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本研究旨在利用原核表达系统表达新型鸭呼肠孤病毒(NDRV) DH13株重组σB蛋白,并检测其免疫原性,为NDRV基因工程疫苗研制等提供物质材料。采用RT-PCR方法扩增获得NDRV σB基因,构建原核表达重组质粒pET-30a-σB和pET-32a-σB,将2个重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,利用IPTG诱导获得相应的重组蛋白,通过SDS-PAGE分析重组蛋白的表达形式。纯化无His的σB蛋白,并以此蛋白作为免疫原免疫新西兰白兔,制备兔源多克隆抗体。利用Ni2+柱亲和层析法纯化含His的σB蛋白,以此蛋白作为检测原,通过间接ELISA方法测定兔源多克隆抗体效价;Western blotting鉴定多克隆抗体与重组蛋白的特异性识别能力。结果显示,PCR扩增获得大小约为1 100 bp的σB基因片段。SDS-PAGE结果显示,高效表达出了2种重组σB蛋白,大小分别约为41和46 ku,均以包涵体形式存在。间接ELISA结果显示,制备的多克隆抗体效价达1∶204 800,能特异性地识别原核表达的重组蛋白,表明重组无His的σB蛋白具有良好的免疫原性。Western blotting特异性鉴定结果显示,含His的σB蛋白和无His的σB蛋白均与制备的兔源多克隆抗体发生特异性反应,表明原核表达得到的重组σB蛋白具备良好的反应原性。本试验利用原核表达系统成功地表达出了重组σB蛋白,并证实了重组NDRV σB蛋白具有良好的免疫原性及反应原性,该结果将有助于后续对NDRV σB蛋白生物学功能的鉴定、NDRV诊断用抗原的制备及NDRV新型疫苗的研制。 相似文献
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【目的】采用简单重复序列间扩增(ISSR)和相关序列扩增多态性(SRAP)等2种标记技术分析不同种源白及Bletilla striata样本的遗传多样性水平和遗传关系,为白及种质的鉴定、分类、保护和开发提供理论依据。【方法】从100个ISSR引物和238对SRAP引物组合中筛选出多态性高、扩增条带清晰、重复性好的引物进行聚合酶链式反应(PCR)扩增,用Popgene 32.0计算来自浙江、云南、贵州和四川等省32个不同种源白及的遗传多样性参数和遗传距离,用NTSYS-pc 2.10e进行聚类分析。【结果】从100个ISSR引物中筛选出11个多态性较好的引物,共扩增出188个条带,平均每个引物扩增出17.09个条带,其中多态性位点174个,占总扩增片段的92.20%;从238对SRAP引物组合中筛选出11对多态性较好的引物组合,共扩增出216个条带,平均每个引物扩增出19.64个条带,其中多态性位点202个,占总扩增片段的93.52%。综合ISSR和SRAP的标记结果发现:四川白及种源的遗传多样性水平最高,贵州最低;非加权组平均法(UPGMA聚类)和主坐标分析(PCoA分析)结果显示:聚... 相似文献
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常言道:有本事的人不去挣有数的钱。也就是说,干自己的买卖一般都比上班挣死工资强,因为忙闲自己掌握,不用受工作单位的约束,何乐而不为呢?还真别说,不挣有数钱的人大有人在,他们成功的关键,是具有抓住商机敢于去闯的信心与胆识。特色米花买卖好一天挣钱真不少石二文是河北省平山县大吾乡人,经营特色米花5年来,平均每天有两百多元的收入。 相似文献
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1前言养猪生产应适应市场经济发展的需要,向产业化方向发展。瘦肉型中猪是供港的活商品之一,我省最多年份供港中猪达6万头。但是,由于对中猪质量要求愈来愈高,而我们生产的中猪质量低,缺乏竞争力,到1991年国家经贸部只给我省中猪配额10000头。提高我省中猪质量,争取扩大 相似文献
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Web服务良好的协同性和可扩展性,使其越来越受到企业的关注。主要IT提供商也一直努力提供对建立Web服务的支持。本文介绍了一种用Apache Axis快速建立多层Web服务模型的方法,并通过一个实验描述了包括Web服务的创建,部署,配置,调用和展示的全过程,验证了这个模型如何实现层次化的服务调用和数据展示。 相似文献
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多媒体影视教学课程是在多媒体影视人才培养目标的基础上,以培养学生专业技能、提升综合能力为核心目标而设置的教学课程。文章以多媒体影视教学创新与改革为研究视角,通过调查,全面揭示了当前多媒体影视教学的现状和存在的问题,进而对未来我国多媒体影视教学的创新和改革发展提出改善建议,目的是更好地提升学生的专业素养,增强实践能力,为社会培养更多综合型素质人才。 相似文献
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