新型鸭呼肠孤病毒DH13株结构蛋白σB的原核表达及免疫原性分析     

杨惠湖  黄惠兰  袁生  李文俊  姚鑫炎  张玉倩  梁昭平  黄淑坚  张雪莲 《中国畜牧兽医》2021,48(11):4204-4212

本研究旨在利用原核表达系统表达新型鸭呼肠孤病毒（NDRV） DH13株重组σB蛋白,并检测其免疫原性,为NDRV基因工程疫苗研制等提供物质材料。采用RT-PCR方法扩增获得NDRV σB基因,构建原核表达重组质粒pET-30a-σB和pET-32a-σB,将2个重组质粒转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,利用IPTG诱导获得相应的重组蛋白,通过SDS-PAGE分析重组蛋白的表达形式。纯化无His的σB蛋白,并以此蛋白作为免疫原免疫新西兰白兔,制备兔源多克隆抗体。利用Ni²⁺柱亲和层析法纯化含His的σB蛋白,以此蛋白作为检测原,通过间接ELISA方法测定兔源多克隆抗体效价;Western blotting鉴定多克隆抗体与重组蛋白的特异性识别能力。结果显示,PCR扩增获得大小约为1 100 bp的σB基因片段。SDS-PAGE结果显示,高效表达出了2种重组σB蛋白,大小分别约为41和46 ku,均以包涵体形式存在。间接ELISA结果显示,制备的多克隆抗体效价达1∶204 800,能特异性地识别原核表达的重组蛋白,表明重组无His的σB蛋白具有良好的免疫原性。Western blotting特异性鉴定结果显示,含His的σB蛋白和无His的σB蛋白均与制备的兔源多克隆抗体发生特异性反应,表明原核表达得到的重组σB蛋白具备良好的反应原性。本试验利用原核表达系统成功地表达出了重组σB蛋白,并证实了重组NDRV σB蛋白具有良好的免疫原性及反应原性,该结果将有助于后续对NDRV σB蛋白生物学功能的鉴定、NDRV诊断用抗原的制备及NDRV新型疫苗的研制。  相似文献   

粤北地区鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定及药敏试验   总被引：1，自引：0，他引：1  

黄淑坚  王政富  梁文冠  吴志新  龚中贵  张莹  梁家桥  陈燕萍 《中国家禽》2007,29(24):53-54

鸭疫里默氏杆菌病是鸭、鹅、火鸡等多种禽类的一种细菌性传染病.该病原为鸭疫里默氏杆菌(Riemerella anatipestifer,RA),简称鸭疫里氏杆菌.该病呈急性或慢性败血症,常见症状为精神沉郁、流眼泪和流鼻液、轻度咳嗽和打喷嚏、排绿色稀粪、共济失调、头颈震颤和昏迷.其特征性病理变化是纤维素性心包炎、肝周炎、气囊炎、干酪性输卵管炎和脑膜炎.许多国家均有此病报道,我国郭玉璞等于1982年在北京首次发现此病以来,在全国许多省区均有此病发生的报道.……  相似文献   

鹅高致病性禽流感病理组织学观察   总被引：2，自引：0，他引：2  

马春全  赵德明  黄兴国  黄淑坚  卢玉葵 《中国预防兽医学报》2006,28(2):175-177

本文对发生H5N1高致病性禽流感禽场的鹅进行了病理学观察，证实此场鹅禽流感在剖检上以眼结膜潮红出血；心肌条纹状坏死，条带样出血；胰腺有白垩状或透明坏死点；胃肠出血等为特征。组织学观察以非化脓性脑炎，胰腺坏死，心肌坏死，坏死性脾炎为主要病变，揭示了鹅禽流感的病理学变化特征。  相似文献   

4株Ⅰ亚群禽腺病毒分离株对SPF雏鸡的致病性研究     

谢梓民  曾繁聪  傅禹铭  姜含雨  杨惠湖  柯骏鸿  罗瑞  梁昭平  张雪莲  黄淑坚 《中国畜牧兽医》2022,49(3):1032-1040

【目的】 探究Ⅰ亚群禽腺病毒（Fowl adenovirus,FAdV）分离株GDDL-4（FAdV-4）、GDB3-8a （FAdV-8a）、GDT08-8b （FAdV-8b）、GDWYT-11（FAdV-11）对SPF雏鸡的致病性,进而制定更加有效的防控措施。【方法】 设立4个攻毒组（GDDL-4、GDB3-8a、GDT08-8b、GDWYT-11）及对照组,攻毒组选择腿部肌内注射接种0.2 mL 10⁵ TCID₅₀病毒液,对照组接种等体积PBS。接种后观察SPF雏鸡的临床症状、剖检病变及组织病理学变化,同时检测其排毒量和病毒载量。【结果】 所有攻毒组鸡均表现为精神沉郁、消瘦、扎堆等,病理剖检以严重心包积液-包涵体肝炎综合征病变为主,其中GDDL-4组症状最为严重,死亡率最高达85%,总体死亡率在0~85%之间。排毒分析结果发现,GDDL-4和GDB3-8a组出现高滴度排毒（≥10⁴拷贝/μL）,GDT08-8b和GDWYT-11组仅能检测到低滴度（≤10³拷贝/μL）排毒。器官指数表明,除GDT08-8b组与对照组无明显差异外,其余攻毒组均能造成器官不同程度的肿大或萎缩。病理组织学切片显示,肝脏、肾脏、法氏囊的正常结构被破坏,可见肝细胞有大量淋巴细胞浸润、肾间质充血出血、法氏囊淋巴细胞坏死等。病毒载量分析结果显示,GDDL-4与GDWYT-11组在肝脏组织中病毒滴度最高,而GDB3-8a与GDT08-8b组在十二指肠中病毒滴度最高。【结论】 Ⅰ亚群FAdV的死亡率高,4株分离株均可导致雏鸡肝脏出现包涵体肝炎的病理变化,均可反复排毒,且分离株对不同的组织器官有不同的亲嗜性,在肝脏与十二指肠等组织中的病毒载量最高。  相似文献   

新型鸭呼肠孤病毒RT-PCR检测方法建立与初步应用     

孔丰  袁远华  肖成谋  黄淑坚 《广东畜牧兽医科技》2014,(1):24-27

为建立一种能够快速检测新型鸭呼肠孤病毒（NDRV）的方法,本研究参考GenBank上登录的NDRV S3基因保守序列设计特异性引物.经条件优化后,建立了检测NDRV的RT-PCR方法.对其特异性、敏感性和重复性进行检验.结果显示：该方法仅能从NDRV分离毒中扩增到与预期大小相符,长度为298 bp的特异性目的片段,检测灵敏度达到83.4 pg病毒RNA;而其它病毒：番鸭呼肠孤病毒、禽呼肠孤病毒、鸭病毒性肝炎病毒、鸭瘟病毒、鸭新城疫病毒和禽流感病毒等样品的扩增结果均为阴性.采用该方法对在广东不同地区采集的15份鸭病料样品进行检测,NDRV阳性率为53.33％.表明建立的RT-PCR方法特异性强、敏感度高,可用于NDRV的临床诊断和流行病学调查.  相似文献   

仔猪渗出性皮炎的诊断与防制     

黄淑坚  赵群念 《养猪》1999,(4):40-41

近几个月来，广东省新会某猪场的许多哺乳仔猪发生以渗出性皮炎为主的疾病。为了寻找发病的原因，我们对该猪场的猪舍内外环境卫生、流行病学进行了调查，并观察了病猪临床表现及病理变化，通过实验室诊断和防治效果的分析，最后确诊该病猪为致病性表皮葡萄球菌和大肠杆菌混合感染。现将有关材料报告如下。１　猪舍环境卫生状况的调查该猪场座于山脚下，猪舍走向为座南向北，但由于每栋猪舍之间较为密集，加上周围山的屏障，造成猪舍通风不良；哺乳猪舍内较多饮水器破旧，出现漏水现象，场地普遍较为潮湿；各哺乳栏舍地面平坦，坡度不够，造…  相似文献   

母猪子宫内膜炎的诊断与综合防制   总被引：3，自引：0，他引：3  

黄淑坚  白挨泉  张济培  梁小英  叶润全  顾万军 《中国兽医杂志》2002,38(5):23-24

20 0 0年 8月至 1 2月期间 ,广东某种猪场共有1 2 4头母猪发生较为严重的子宫内膜炎 ,由于母猪发情不正常甚至不发情 ,屡配不孕或流产 ,给该猪场造成巨大的经济损失。为了寻找真正的发病病因 ,我们从子宫内膜炎的患猪采取子宫炎性分泌物 ,经过病原的分离、鉴定及其致病性检验 ,  相似文献   

心包积水肝炎综合征的新进展     

黄淑坚  辛朝安 《养禽与禽病防治》2001,(1)

腺病毒引起的心包积水肝炎综合征，一直被认为是巴基斯坦的Angara病，或者是印度的 Leechi病，或者是墨西哥和拉丁美洲其他国家的恶性包涵体肝炎。伊拉克、科威特以及日本均有本病的报道。进一步了解本病发病及控制，对于全球的养禽业有着重要的作用。有关此主题的文章在1999年美国西部禽病会议上也有大篇幅的报道。一、与包涵体肝炎、心包积水肝炎综合征有关的禽腺病毒特性Brarret S．Cowen博士、L．M．Grenz联合Biomune公司，从包涵体肝炎和心包积水肝炎综合征爆发现场中，检测到一些与其有关的腺病毒分离株，并在SPF鸡胚和组织培养…  相似文献   

目前鸭主要传染病及其防制对策     

黄淑坚 《养禽与禽病防治》2001,(11)

随着养鸭业的蓬勃发展，不同规模的鸭场星罗棋布，饲养水平参差不齐，而且饲养密度不断加大，为各种病原微生物在鸭体内繁殖、变异及传播创造了条件，加上一些劣质的蛋黄液含有蛋传递性疾病的应用，以及抗生素或抗菌药物的盲目使用，目前鸭传染性疾病依然十分复杂，并出现了许多新的变化，主要表现在下面几个方面：一是由于免疫防制松懈及水域的污染，有些旧的传染病尚未得到有效控制，在部分地区出现地方性流行，如番鸭细小病毒病；二是有些病毒出现变异株，用原来的疫苗免疫，疾病得不到有效控制，如鸭病毒性肝炎；三是由于抗生素或抗菌药…  相似文献   

鸡大肠杆菌荚膜多糖——蛋白质抗原免疫原性的研究     

黄淑坚  林维庆 《华南农业大学学报》1996,17(2):28-32

用碳化二亚胺作为交联剂将荚膜多糖与载体蛋白质交联后加入蜂胶佐剂制成疫苗免疫鸡只。７周龄同源菌株攻毒结果表明，荚膜多糖－破伤风类毒素苗组鸡有很好的保护效果且试验重复性好；在免疫后３个月的同源攻毒保护指数也达１３／２０以上。但对异源菌株的攻毒没有明显保护效果。该研究采用微量法间接血凝试验检测了免疫鸡抗体水平。  相似文献