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1.
家鸡Leptin成熟肽cDNA的克隆、重组蛋白表达及纯化 总被引:4,自引:0,他引:4
从 18周龄鸡卵巢组织中抽提总 RNA,使用六聚体随机引物反转录后 ,用鸡 L eptin(瘦素 )特异性引物扩增出鸡L eptin编码区第 5 2~ 4 6 0 bp的长度为 4 0 9bp的 c DNA片段。根据鸡 L eptin的 3′端第 4 6 0~ 4 92 bp序列设计了 3条部分相互重叠并且顺序串联延伸的下游反义引物 ,并在最后 1条引物 3′端连接上 Eco R 切点 ;在以上用于反转录扩增的 5′端引物的 5′端连接一 Bam H 切点。用该 5′端引物分别与 3个 3′端引物配对 ,利用反转录扩增出的 4 0 9bp的L eptin c DNA片段作为第 1模板进行扩增 ,扩增产物再作为模板与下一引物对再次扩增。经 3次扩增得到编码鸡 L ep-tin成熟肽的全长 4 5 1bp的 c DNA序列。将该 4 5 1bp的 L eptin c DNA序列经 Bam H 和 Eco R 双酶切后 ,克隆入表达质粒 p RSET A的 Bam H 和 Eco R 两酶切位点之间 ,构建成表达质粒 p L ep- SCAU。转化有重组表达质粒 p L ep-SCAU的大肠杆菌 BL 2 1(DE3)在 L B培养基中培养后 ,经 IPTG诱导表达出相对分子质量为 2 0 10 0的鸡 L eptin融合蛋白和少量 4 0 2 0 0的 L eptin融合蛋白。L eptin融合蛋白的表达在 IPTG浓度为 0 .0 5 mmol/ L 时达到最高 ,占总菌体蛋白的 32 .6 %。用 Ni- NTA凝胶从 7L 发酵培养菌裂解液中纯化出 180 m g左右 相似文献
2.
为探索纯化的重组猪抑制素蛋白质毒素残留情况以及重组猪抑制素蛋白质稳定性,本研究利用鲎试剂、气相色谱和SDS-PAGE方法对重组猪抑制素蛋白质中的细菌内毒素、β-巯基乙醇的残留量及其蛋白质在不同温度、极端p H值和反复冻融条件下的稳定性进行检测。结果显示,经过3次等电点沉淀洗涤后,重组猪抑制素蛋白质中细菌内毒素和β-巯基乙醇的残留量大幅减少。通过在不同温度下的处理发现,重组猪抑制素蛋白质在4℃环境下较稳定,可以长期保存;但在37℃时,稳定性快速下降,随着温度上升而降解加速。通过极端p H值和反复冻融试验发现,重组猪抑制素蛋白质对极端p H值和反复冻融具有较好的耐受性。 相似文献
3.
试验旨在研究降低载鸭水体革兰氏阴性菌和内毒素污染对肉鸭肠道发育和生长性能的影响。将480只1日龄鸭随机分成4组,包括对照组、对照组+低聚半乳糖、对照组+光合细菌以及对照组+低聚半乳糖+光合细菌。每组4个重复,每个重复30只。在50d的试验期间采用"高床+水池"模式养殖至出栏。结果表明,日粮添加低聚半乳糖和向载鸭水体应用光合细菌均抑制水体大肠杆菌、沙门氏菌和志贺氏菌数量(P0.05),降低鸭血液内毒素浓度(P0.05),增加肠黏膜绒毛长度(P0.05),提高肉鸭日增重(P0.05),降低料重比和死亡率(P0.05)。表明低聚半乳糖和光合细菌通过降低养殖水体革兰氏阴性菌和内毒素水平促进肠道吸收能力,提高肉鸭生长性能。 相似文献
4.
为了探讨免疫抑制素对水牛超排的作用,进一步揭示水牛超排机理,选取17头具有正常发情周期的母水牛,随机分为试验组(10头),对照组(7头),试验组首次免疫重组猪抑制素亚基融合蛋白1 mg/头,首免后第28和第56天分别进行加强免疫,剂量为0.5 mg/头,对照组牛同期注射矿物油与生理盐水混合佐剂。试验组牛在首免、二免和三免当天分别用B超仪进行卵泡大小监测和计数,在超排后第6天用B超仪进行卵泡和黄体数进行统计。用免疫抑制素组水牛平均卵泡数在加强免疫后,卵泡数量从8.8增加到15.0个,但与对照组相比差异不显著(P>0.05)。超排后,试验组的平均成熟卵泡数、黄体数和排卵率分别是12.2±0.79,9.0±1.06和73.77%,与对照组相比差异显著。胚胎回收总数和可用胚胎数差异不显著。结果表明,利用免疫抑制素免疫水牛,可提高水牛的超排效果。 相似文献
5.
6.
7.
马岗鹅原产于广东省开平市,是广东省的优良地方鹅种之一,具有体型大小适中、屠宰率高、肉质鲜嫩、生长快和耐粗易养等优点,深受广大消费者的欢迎,目前在广东省各地几乎都有分布,而且全省近年的饲养量增长迅猛. 相似文献
8.
9.
激活素是一种主要由性腺分泌的二聚体糖蛋白,与抑制素在组成结构和功能上有着密切的复杂关系,两者与卵泡抑素所组成的INH-ACT-卵泡抑素轴系统在动物繁殖生理中占有重要作用.本文就激活素的生物学特性及其在动物繁殖生理中的作用进行综述,为其更深入的研究提供参考. 相似文献
10.