拟南芥LRR-RLK家族蛋白CLV1胞外域的可溶性表达与纯化     

李锋  严孝金  韩翠晓  冯舵  李倩倩  高伟 《湖北农业科学》2011,50(11):2259-2263

大肠杆菌NusA蛋白与拟南芥LRR-RLK家族蛋白CLAVATA1(CLV1)胞外结构域(Ectodomain,ECD)融合表达,实现了蛋白CLV1-ECD的可溶性表达;CLV1-ECD与其配体蛋白CLAVATA3(CLV3)共表达,可以明显提高它的水溶性。该实验方法快速简易地获得了大量纯化的CLV1-ECD蛋白,避免了包涵体变性与复性的复杂过程,为植物CLAVATA信号系统的进一步研究奠定了基础。  相似文献   

传染性法氏囊病病毒VP5蛋白跨膜区的敲除及可溶性原核表达研究     

严孝金  李锋  秦立廷  李倩倩  韩翠晓  冯舵  王笑梅  高伟 《安徽农业科学》2011,(17):10461-10463

[目的]构建敲除传染性法氏囊病病毒（IBDV）VP5蛋白跨膜区序列的原核表达载体,并进行目的蛋白的表达、分离和纯化。[方法]利用PCR技术分别扩增IBDVVP5基因的胞外片段和胞内片段,然后将2个片段及pET-28b（＋）同时相接,即载体一胞内片段一胞外片段一载体,构建了敲除跨膜区基因片段的VP5重组表达质粒pET—VP5-FC及改进后的pET—VP5-SC。将表达质粒转化BL21（DE3）,IPrG诱导后经Ni亲和层析及凝胶过滤层析纯化重组蛋白。[结果]得到可溶性表达的IBDVVP5。[结论]为进一步研究VP5蛋白的结构与功能奠定了基础。  相似文献   

传染性法氏囊病病毒VP5蛋白跨膜区的敲除及可溶性原核表达研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

严孝金  李锋  秦立廷  李倩倩  韩翠晓  冯舵  王笑梅  高伟 《农业科学与技术》2011,(4):621-624

[目的]构建敲除传染性法氏囊病病毒（IBDV）VP5蛋白跨膜区序列的原核表达载体,并进行目的蛋白的表达、分离和纯化。[方法]利用PCR技术分别扩增IBDVVP5基因的胞外片段和胞内片段,然后将2个片段及pET-28b（＋）同时相接,即载体-胞内片段-胞外片段-载体,构建了敲除跨膜区基因片段的VP5重组表达质粒pET-VP5-FC及改进后的pET-VP5-SC。将表达质粒转化BL21（DE3）,IPTG诱导后经Ni亲和层析及凝胶过滤层析纯化重组蛋白。[结果]得到可溶性表达的IBDVVP5。[结论]为进一步研究VP5蛋白的结构与功能奠定了良好的基础,另外为本文的研究方法对其它跨膜蛋白的可溶性表达及进一步研究也有一定的借鉴意义。  相似文献   

木聚糖酶XynB-E18的重组表达纯化及酶学性质测定     

宋迎  鲁芳  严孝金  张蓓  刘永  张立  孟昆  杨培龙  姚斌  高伟 《山东农业大学学报(自然科学版)》2018,(2)

为了测定木聚糖酶Xyn B-E18的活性以及酶学特征,采用大肠杆菌原核表达系统对来源于青贮饲料菌群的木聚糖酶Xyn B-E18进行重组表达纯化。在16℃180 r·min-1条件下表达,并通过Ni亲和层析和分子排阻层析的方法进行纯化,用DNS显色法测定其酶学性质。得到的重组蛋白能在大肠杆菌中获得高效表达,纯化后的蛋白溶液纯度达90%以上,蛋白分子量约为38k Da,酶活力可达1782 U,最适反应p H为6.5,在中性偏碱性条件下酶的稳定性较好,最适反应温度为50℃,在50℃以下酶的热稳定性保持较好。实验结果表明Xyn B-E18具有良好的稳定性,可具有更大应用潜力。  相似文献