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1.
从BL21(DE3)E.coli菌株中以PCR的方法扩增得到了与T7RNA多聚酶(T7RNApolymerase,T7pol)基因大小一致的DNA片断。将PCR产物纯化后直接克隆到pGEM—T载体中,经酶切鉴定和DNA序列分析表明克隆得到了正确的T7pol基因。将T7pol基因亚克隆入pET-28b( )中,构建得到原核表达质粒pET28T7。该质粒的BL21(DE3)pLysS转化菌在IPTG的诱导下可表达约98800的蛋白,这与T7pol的相对分子质量一致。将该质粒转化DH5α、JMl09、HBl01、BL21(DE3)和BL21(DE3)pLysS等5种不同的宿主菌,仅有转化T7pol酶活性受到抑制的宿主菌BL21(DE3)pLysS才能得到转化子,而其余4种T7T7pol酶活性不受抑制的E.coli宿主菌不能得到转化子。pET28T7原核表达质粒这种仅能在T7pol酶活性受到抑制的宿主菌中才能存活的现象说明本试验所克隆的T7pol基因能正确表达出具有RNA转录酶活性的蛋白。 相似文献
2.
3.
根据国务委员陈俊生同志的指示,今年3月份农业部在北京召开了“全国农区发展畜牧业座谈会”。参加会议的有山东、安徽、河南、河北、黑龙江、吉林、辽宁、山西、陕西、四川10个省人民政府副省长、副秘书长、农业(畜牧)厅(局)长;安徽省阜阳、山东省菏泽、河南省周口地区的负责同志;国务院副秘书长李昌安、农业部部长刘中一、副部长洪绂曾、国家计委副主任刘江、财政部副部长项怀诚及国务院有关部门的工作人员共95人。国务委员陈俊生同志自始至终参加了会议,并做了重要讲话。会议确定“八五”期间全国上述10个省建设10个县作为示范区,国家重点投资,地方配套建设,以开展利用秸杆发展农区养牛业。 相似文献
4.
为了探究保育猪不同伪狂犬病免疫程序的免疫效果,笔者采取4种不同免疫程序进行试验,即4组猪群于35日龄首免和70日龄二免:A组分别免疫接种伪狂犬病弱毒疫苗和灭活疫苗;B组分别接种伪狂犬病灭活疫苗和弱毒疫苗;C组均接种伪狂犬病灭活疫苗;D组分别接种伪狂犬病弱毒疫苗,接种方式和剂量均按照说明书进行。于试验前(25日龄)和试验后(100日龄)应用ELISA法分别检测不同组别的猪群伪狂犬病毒g E和g B抗体水平水平,确定阳性率差异。结果显示:免疫程序A和B可以均能有效控制猪群伪狂犬病野毒的进一步流行,降低猪群的死亡率,但免疫程序B无法使猪群伪狂犬病得到净化,而免疫程序C和D均无法抑制伪狂犬病毒野毒的流行。因此,选择免疫程序A对于防控与净化伪狂犬病毒的发生与流行效果最好。 相似文献
5.
为了解猪肺炎支原体流行菌株遗传变异情况,选取2014-2017年不同时间、地点收集的17头猪肺炎支原体阳性屠宰猪肺脏灌洗液DNA为模板,进行猪肺炎支原体P36(编码具有强免疫原性的胞浆蛋白)、P46(编码具有强免疫原性的表面蛋白)、P97 R1区、P146高变区(猪肺炎支原体黏附气管纤毛细胞的重要功能区域)基因的PCR扩增、测序。结合GenBank登录的猪肺炎支原体相关序列进行氨基酸序列的比对分析。结果表明,比对的序列之间,P36、P46蛋白氨基酸序列同源性均在98.9%以上,但P97功能区R1区、P146多变区在菌株间存在较大差异。11个屠宰猪样本和5个GenBank登录菌株P97 R1区重复氨基酸序列数量达到14个以上,而GenBank登录的3个疫苗相关菌株(168株、168-L株、J株)及另外4个菌株、4个屠宰猪样本重复序列为9~11个不等;P146高变区氨基酸序列的差异主要集中在2个重复氨基酸序列区(R1、R2),GenBank登录的168株、168-L株、J株以及另外2个菌株,1个屠宰猪样本在R1区出现较多氨基酸缺失。168株、168-L株,6个屠宰猪样本及另外3个GenBank登录菌株在R2区出现了3~9个不等的氨基酸缺失。利用DNAStar进行抗原表位预测发现,菌株间P97 R1、P146 R1、P146 R2区氨基酸序列的差异,导致了抗原表位出现明显的变化。提示开展P97、P146等黏附因子的筛选和研究或许能进一步提升疫苗阻止猪肺炎支原体黏附气管纤毛细胞的作用,从而进一步改善疫苗的免疫效果。 相似文献
6.
母猪猪瘟疫苗的免疫方式分为跟胎和普免2种。为了比较2种免疫方式接种后母猪在一个生产繁殖周期内抗体水平的变化情况,本研究检测了6个饲养管理很好的猪场的猪瘟抗体水平。对其中跟胎免疫的4个母猪群在怀孕前期、怀孕中期、怀孕后期和哺乳期等4个阶段的抗体水平分别进行了检测,同时,对4个猪群的仔猪的母源抗体水平也进行了检测。对一个普免的猪群分别在其免疫后第1月、2月、3月和4月分别跟踪检测母猪猪瘟抗体。另外,分析了一个普免的猪群4年来的检测数据。结果发现不管是跟胎免疫还是普免,免疫水平好的猪群在一个生产周期内均可保持很高的抗体水平。而母猪群即使抗体水平很高且整齐度好,仔猪的母源抗体水平也难以保持较好的整齐度。 相似文献
7.
名列全省农机化工作前列的德阳市农机局,充分发挥职能作用,积极改善农村生产、生活条件,切实加强农田水利基本建设,努力进行乡村机耕道建设,乡村机耕道将实现网络化。 根据省人民政府精神,结合本市实际情况,市农田水利基本建设指挥部在下达全市“十五”期间“六六”目标任务时,涉及农机项目有乡村机耕道建设和新增提灌设备两项指标,德阳市农机局领导对此高度重视,成立了专门的领导班子,将两项目标任务细化分解下达到 6个县 (市、区 )农机局,要求他们与当地政府和相关部门认真衔接,切实抓好此项工作。截止 2001年 4月 24日,通… 相似文献
8.
为探讨一种适合规模猪场的合理的种猪口蹄疫免疫程序,通过对种猪用不同的免疫次数,及不同免疫时间进行免疫,然后采集血清,对血清的抗体水平进行检测,从而筛选出认为合理的免疫程序。对种猪配种前注射1次(每年2次)和每年普注3次进行采血检测,结果配种前注射不能达到合理的抗体效价,每年3次普注能达到很高的抗体水平和阳性率,证明种猪每年3次免疫是合适的;同时对一大型养猪场采用每年3次普注的程序,连续3年该场种猪进行抗体监测,结果表明抗体水平和阳性率均达到保护水平,这也从实践的角度应证了这种免疫方式的有效性。 相似文献
9.
9株猪瘟分离毒株的致病特性 总被引:4,自引:0,他引:4
采用9株临床表现强、中、低致病特点的猪瘟野毒分离株第3代细胞毒作为种毒,按3mL/头剂量分别注射猪瘟抗原及抗体阴性猪,再用上一代传代猪发病后的血毒作为下一代接毒用种毒接种试验猪1头或2头,或上一代传代猪发病后,同圈放入1头或2头试验猪进行同居感染.如此进行,GDGZ1/95、BJCY1/96和JL1/94传至8代;FJFQ1/99传至7代;HeBHH1/95、HeNBY1/96、BJTX3/96、GXBH1/98和HeNXH2/98传至3代.结果显示:上述分离株传至3~5代过程中均表现出毒力增强的趋势,从3~5代传代到8(7)代的过程中毒力进一步增强并保持稳定,且均超过了标准石门强毒株的发病特点.所有试验猪均出现较典型的猪瘟临床症状,解剖后均表现出不同程度的病理变化,死后或解剖后的各种脏器经HCFA检查均为强阳性,这种现象进一步证实了猪是猪瘟病毒的敏感动物,各毒株之间毒力没有明显差异.对其中7株分离株传代血毒部分代次E2基因主要区域进行序列分析,结果仅GDGZ1/95株从F1~F8代中的F6代有2个核苷酸的差异,引起1个相应氨基酸的变异,其余毒株的不同代次没有碱基发生变异,初步说明猪瘟病毒基因型表现相对的稳定性. 相似文献
10.
白细胞介素—3对猪瘟病毒E2基因疫苗免疫增强作用的研究 总被引:1,自引:0,他引:1
以昆明系小白鼠为试验动物,观察了白细胞介素-3(IL-3)对猪瘟病毒E2囊膜糖蛋白(HCV E2)基因疫苗免疫效果的增强作用。用DNA重组技术将HCV E2基因和白小鼠IL-3基因克隆到pIRES1neo质粒,因在两者之间有脑心肌炎病毒(EMCV)的核糖体进入位点(IRES)片段,可得到HCV E2抗体效价。结果显示,IL-3能显著提高HCV E2基因疫苗的免疫效果,表明IL-3可作为HCV E2 相似文献