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基因2型牛病毒性腹泻病毒RT-PCR检测方法的建立和初步应用 总被引:1,自引:0,他引:1
根据已发表的牛病毒性腹泻病毒基因1型(BVDV-1)和2型(BVDV-2)5非编码区(5-UTR)的序列,分别设计了针对BVDV-1型、BVDV-2型以及针对BVDV-1和BVDV-2两型的特异性引物和通用引物,以标准参考株BVDV-1 NADL株和BVDV-2890 株为对照,建立了分别能检测BVDV-1、BVDV-2和BVDV-1/BVDV-2的RT-PCR 检测方法.在此基础上,进一步对疑似BVDV-2感染牛的临床病料组织(脾、淋巴结、心肌、血液等)检测结果表明,在所检测的18份样品中,BVDV-2阳性8份(44%).经RT-PCR鉴定为阳性的组织病料,进一步通过MDBK 细胞进行病毒分离,病毒分离率为100%;结合感染细胞病变观察,间接免疫荧光试验RT-PCR和序列测定鉴定,所分离的病毒均为BVDV-2.上述研究表明,该RT-PCR检测方法敏感、特异;并证实我国牛群已存在BVDV-2的污染或感染. 相似文献
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为分析中国新疆小反刍兽疫病毒(PPRV)毒株分子演变特点和疫情传播路线,从GenBank数据库下载所有国家全部的PPRVF基因全序列,应用DNAStar软件,结合疫情毒株时空分布进行序列分析。结果显示,中国新疆PPRV株F基因全序列,与2014年小反刍兽疫情中河南和北京毒株核苷酸的同源性最高,为99.8%~99.9%,与中国西藏3个毒株核苷酸的同源性为97.7%,与中国采用的疫苗株核苷酸同源性为92.9%,核苷酸同源性最低的是肯尼亚毒株,与国外毒株核苷酸同源性最高的是印度毒株。F基因系统进化关系分析显示,中国新疆PPRV株属于基因Ⅳ系。F蛋白氨基酸同源性结果显示,除与科特迪瓦1989年毒株ICV89氨基酸同源性最低外,与其他氨基酸同源性比对结果均与核苷酸的比对结果一致。中国新疆PPRV株存在一定程度的变异,可能是由周边国家传入。 相似文献
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棉粕中营养物质含量丰富,价格低廉,人们经常用棉粕代替豆粕作为畜禽饲料的蛋白质来源.由于棉粕中含有的游离棉酚具有一定的毒性,长期不间断地使用棉粕饲料饲喂畜禽,会导致棉酚在体内蓄积而引起慢性中毒,这不仅影响畜禽生长,甚至会引起畜禽死亡.临床上又常常把这种慢性中毒误诊为其他疾病,耽误了治疗时机,增加了药物费用,给养殖户带来巨大的经济损失.2009年11月,新疆阿克苏地区某个体养殖户的育肥猪连续出现几例棉酚中毒病例,本文将该病例的发病情况和病理变化作一简述与分析,以期为畜禽棉酚中毒的预防和早期诊断提供依据. 相似文献
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为了研究羊痘病毒KLP1的特性及制备其抗体,研究通过PCR扩增了山羊痘病毒毒力因子KLP1的两个结构域KLP1-1、KLP1-2,并构建了重组表达载体pET42b-KLP1-1和pET42b-KLP1-2,将重组载体转化到大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达,表达产物应用SDS-PAGE和Western-blot检测,表达蛋白经镍柱纯化或KCl染色切胶纯化,经弗氏佐剂乳化后免疫家兔,制备的抗体用Western-blot和ELISA检测评价。结果表明:克隆得到的KLP1-1基因的大小为762 bp,表达约为30 ku的蛋白,主要在上清液中表达,镍柱纯化蛋白浓度为3 mg/mL;KLP1-2的基因大小为927 bp,表达约为35 ku的蛋白,以包涵体形式表达在沉淀中,切胶纯化的蛋白浓度在1~2 mg/mL之间。免疫家兔后收集血清,经Western-blot检测可见明显的特异条带,ELISA检测的抗体效价分别为1∶512和1∶256。 相似文献