牛坏死杆菌溶血素基因克隆、表达和抗原性分析     

孙东波  吕思文  高晶  郭东华  王建发  武瑞  王洪斌 《黑龙江畜牧兽医》2015,(1):140-142

为了研制新型有效安全的牛坏死杆菌病亚单位疫苗和诊断试剂,试验利用PCR扩增技术获得了牛坏死杆菌H05菌株hly基因的全长及5个相互重叠的截短片段的核苷酸序列,并利用原核表达载体p ET-32a对hly基因的5个截短片段进行了表达和抗原性分析。结果表明:hly-2、hly-3和hly-4片段获得了成功表达,且hly-2(aa 278~567)、hly-3(aa 566~888)和hly-4(aa 887~1163)重组蛋白能够与牛坏死杆菌多克隆抗体反应。说明hly-2、hly-3和hly-4可以用于研制新型牛坏死杆菌病亚单位疫苗和诊断试剂。  相似文献   

加强实验室建设 提高《动物病理学》教学效果     

齐艳萍  郭东华  孙东波  郑家三  张洪友  范春玲  孙斌 《畜牧与饲料科学》2012,33(5)

随着我国教育教学体制的改革与发展,《动物病理学》作为高职高专院校兽医专业的必修课,提高该课程的教学质量成为亟待解决的问题之一。从2009年开始进行《动物病理学》课程的改革与探索,发现了病理解剖实验室中存在的若干问题,并从改善实验室教学环境、动物标本的建设和管理、实验室开放及队伍建设等方面进行了一系列的探讨,以期为提高《动物病理学》教学效果提供参考与借鉴。  相似文献   

牛腐蹄病坏死梭杆菌白细胞毒素重组亚单位疫苗诱导小鼠免疫保护效果的观察     

郭东华  王君伟  孙玉国  吕占军  张建涛  李林  王洪斌 《中国预防兽医学报》2008,30(5):398-402

以大肠杆菌表达系统表达并纯化的牛源坏死杆菌H05菌株5个截短的重组白细胞毒素蛋白PL1（1aa～174aa）、PL2（311aa～644aa）、1ktA3（1319aa～2026aa）、PL4（1960aa～2287aa）和PL5（3077aa～3241aa）为抗原分别免疫昆明系小白鼠,同时将灭活的天然坏死杆菌白细胞毒素和PBS作为免疫对照。ELISA结果显示,经4次免疫后5个重组蛋白和天然白细胞毒素均能介导小鼠产生抗白细胞毒素蛋白的特异性抗体,抗体效价分别为1：6400、1：12800、1：6400、1：12800、1：3200和1：800。免疫鼠活菌攻击观察结果和免疫鼠肝脏组织学变化结果一致证明,PL1、PL2、1ktA3、PL4、PL5重组蛋白和天然白细胞毒素对小鼠均具有保护作用,5个重组蛋白的免疫保护作用均优于天然白细胞毒素,在5个重组蛋白中PL1、1ktA3和PL4对鼠的免疫保护效果最好。  相似文献   

坏死杆菌白细胞毒素作为腐蹄病亚单位疫苗候选抗原的研究前景     

郭东华  孙东波  武瑞  范春玲  孙斌 《中国畜牧兽医》2009,36(3):137-139

腐蹄病（foot rot）是侵害反刍动物趾间皮肤及深层软组织为主的,严重影响奶牛生产性能和产奶质量的一种常见疾病。由于传统的灭活菌苗具有免疫效果差、副反应严重及大量生产困难等缺点,使腐蹄病基因工程疫苗的研究成为热点。笔者对坏死杆菌白细胞毒素作为腐蹄病亚单位疫苗候选抗原研究的最新进展进行综述,希望为腐蹄病亚单位疫苗的研究提供参考。  相似文献   

农业网络信息资源获取途径调查分析     

罗德一  郭东华 《农业图书情报学刊》2010,22(7):56-58

通过多种调查方式,了解用户对网上农业信息资源的获取及搜索引擎的使用情况,提出建立满足用户需求、符合农业信息特点的农业专业搜索引擎,整合互联网上农业信息资源,以促进信息共享,并满足农业信息工作者多样化的信息需求,使农业专业搜索引擎能够提供大量经过分析后筛选出的、符合农业工作者需求的有效信息资源,为我国农业工作者及从事相关产业的人员在网上集中快速地查找农业信息提供高质量的服务,为我国农业科教事业的发展提供便利。  相似文献   

新农科背景下动物病理生理学实验教学改革探索     

贺显晶  范春玲  连帅  钱伟东  王峥  武瑞  孙东波  郭东华 《黑龙江农业科学》2022,(2):81-85

为探索出适应新农科建设下创新人才培养的实验教学新模式,本文通过分析传统教学中动物病理生理学实验教学中存在的问题,以提高学生综合素质和创新能力为导向对动物病理生理学实验教学内容、教学团队、考核机制进行了一系列的改革.经过4年的改革,形成了以学生为主体、教师为辅助的多层次全方位教学体系.在教师方面,通过学习、培训等使教师整...  相似文献   

牛源坏死梭杆菌43K外膜蛋白的黏附特性研究     

贺显晶  刘娇  王志慧  武瑞  郭东华 《畜牧兽医学报》2023,54(2):726-735

旨在明确牛源坏死梭杆菌43K OMP的黏附特性。将43K OMP基因克隆连接至pET-32a载体,转化入大肠杆菌BL21 DE3中,通过IPTG诱导进行原核表达,应用黏附试验、天然蛋白竞争试验、抗体抑制试验和蛋白酶水解试验,明确牛源坏死梭杆菌43K OMP的黏附性,同时将纯化的重组蛋白和提取的天然43K OMP与牛子宫内膜细胞和牛乳腺上皮细胞共孵育,观察43K OMP对细胞的黏附作用。结果显示：43K OMP基因克隆到pET-32a载体中,随后在大肠杆菌BL21 DE3以包涵体形式成功表达;携带重组质粒(H2019)的大肠杆菌经IPTG诱导后,与空载体对照相比,与宿主细胞的结合显著增强(P<0.05);天然43K OMP与细胞共孵育后,黏附细胞的细菌数量显著降低(P<0.05);H2019与43K OMP多抗或单抗预孵育后,显著降低黏附宿主细胞的细菌数量(P<0.05);经不同浓度蛋白酶K处理H2019后,黏附细胞的细菌数量显著降低(P<0.05),且与蛋白酶K浓度呈现剂量依赖关系。同时,43K OMP天然蛋白和重组蛋白能黏附于牛子宫内膜细胞和乳腺上皮细胞表面。...  相似文献   

《动物病理解剖学》课程多媒体教学的优势与不足   总被引：2，自引：0，他引：2  

郭东华  孙东波  张洪友  郑家三  齐艳萍  范春玲  孙斌 《畜牧与饲料科学》2012,33(7):39-40

《动物病理解剖学》是动物医学专业必修的一门基础课程,同时也是基础动物医学向临床动物医学过渡的桥梁课程．其主要内容是通过组织形态结构的变化来阐述疾病的发生机理。因此,图文并茂的多媒体教学方式在该课程教学中被广泛应用。针对多媒体教学在《动物病理解剖学》课程中的优势与不足进行剖析,并提出改善方案,从而进一步提高《动物病理解剖学》课程的教学效果。  相似文献   

高职兽医专业动物病理学课程教学改革初探     

郭东华  孙东波  张洪友  齐艳萍  郑家三  范春玲  孙斌 《黑龙江畜牧兽医》2012,(20):35-36

目前,我国高职高专院校"动物病理学"课程教学面临的主要问题是教学容量大、教学时数少、教学方法单一、教学手段陈旧,学生对要求掌握的知识背多思少、对要求掌握的技能眼高手低。随着病理学发展日新月异,企业对学生的实践能力要求愈来愈高,必须按照"实际、实用、实践"的原则改革教学内容、  相似文献   

牛腐蹄病坏死杆菌H05菌株白细胞毒素基因的克隆与序列分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

郭东华  孙玉国  李林  王君伟  张建涛  王洪斌 《黑龙江八一农垦大学学报》2008,20(4)

以黑龙江省分离的牛腐蹄病坏死杆菌H05菌株基因组DNA为模板,参考GenBank发表的羊腐蹄病坏死杆菌A25菌株白细胞毒素基因核苷酸序列,设计5对覆盖白细胞毒素基因完整开放阅读框(ORF)的线物,通过PCR扩增获得了H05菌株白细胞毒素基因5个相互重叠的DNA片段,将它们克隆到pMD18-T载体中.测序结果显示:牛腐蹄病坏死杆菌H05菌株白细胞毒素基因长为9 723bp,编码一个3 240个氨基酸的蛋白质,与羊腐蹄病坏死杆菌白细胞毒素蛋白的核苷酸和氨基酸的同源性分别为99.75%和99.63%,缺失了1 078位的天冬酰胺.  相似文献