家蚕核型多角体病毒p35基因的核苷酸序列分析   总被引：3，自引：0，他引：3  

贡成良  薛仁宇  曹广力 《蚕业科学》2000,26(4):219-223

对家蚕核型多角体病毒苏州株 (BmNPVsu)p35基因的序列分析表明 :BmNPVsup35编码序列为 897nt,编码 2 98aa。同源性分析表明 :BmNPVsup35与BmNPVT3、AcNPV、SlNPV在核苷酸水平上同源性分别为 99.5%、95.1 %、89.3% ,在氨基酸水平上的同源性分别为 98.7%、89.4 %、76.4 % ,显示了杆状病毒p35基因在进化上的保守性。BmNPVT3中位的N14 6、S2 0 2 、E2 0 4 、K2 4 4 ,在BmNPVsu中分别被G、N、Q、N取代 ,BmNPVT3中S2 2 2 ,在BmNPVsuP35中发生了缺失。推测BmNPVsuP35蛋白的功能及抑制细胞凋亡的能力与BmNPVT3P35蛋白的相似  相似文献   

鳗鲡血液细胞的研究   总被引：17，自引：0，他引：17  

朱越雄  曹广力 《水产养殖》1997,(4):18-20

本文通过鳗鲡血液有形成份Ｗｒｉｇｈｔ染色并进行显微分析，辩识其红血细胞、嗜中性粒细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱生粒细胞、小淋巴细胞、单核细胞和血栓细胞并加以分析。  相似文献   

罗氏沼虾白斑综合征病毒囊膜蛋白VP28基因的克隆及分析     

王晓兰  贡成良  薛宇醒  曹广力  魏育红  陈辉  许雅香  张伟明  薛仁宇 《淡水渔业》2007,37(3):12-16

根据已公布的罗氏沼虾白斑综合征病毒(WSSV)囊膜蛋白VP28基因序列设计一对特异性引物,从疑似患白斑病毒病的罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)中提取总DNA,并以此为模板,经PCR扩增、克隆并测序后将该片段通过GenBank比对,证实为WSSV的VP28基因;与20个已公布的WSSV VP28进行同源性比较,结果显示:从中国对虾、斑节对虾、南美白对虾、日本对虾、波纹龙虾提取的病毒株聚为一类,印度对虾WSSV VP28为另一类,罗氏沼虾WSSV VP28又单独为一类。根据测序结果推测VP28蛋白的二级结构在氨基酸的7～29区间可能为跨膜螺旋区,且该区域高度保守。  相似文献   

家蚕hop基因的克隆及序列分析     

梁聪  彭景琨  曹广力  薛仁宇  贡成良 《江苏农业科学》2012,40(1):10-13

JAK激酶HOP是JAK/STAT信号途径的重要组成成员,在信号传导中发挥重要作用.为研究家蚕的JAK/STAT途径,通过RT-PCR克隆家蚕的hop基因(Bmhop)的cDNA,序列测定结果显示:Bmhop开放读码框为1 924 bp,编码638个氨基酸残基;结构分析结果显示:BmHOP具CRD_FZ、Kringle、转膜区域和PKc超家族蛋白激酶催化结构域TyrKc,每个结构域均可形成特定的三级结构;基于基因芯片的数据分析结果显示:Bmhop在家蚕5龄第3天的睾丸、卵巢、头部、脂肪体、中肠、马氏管中均有表达,但表达水平较低;基于TyrKc结构域序列的进化分析指出:昆虫HOP并不完全按物种聚类,BmHOP单独形成1个分枝,HOP在进化过程有TyrKc结构域扩增和TyrKc结构域组合事件发生.本研究结果为探讨BmHOP在JAK/STAT信号途径中的作用方式以及hop基因进化提供新的线索.  相似文献   

利用非转座子载体介导的转基因家蚕表达人胰岛素样生长因子Ⅰ     

胡莹莹  薛仁宇  曹广力  贡成良 《蚕业科学》2012,(4):658-664

为了实现利用非转座子载体介导的转基因家蚕整体表达人胰岛素样生长因子Ⅰ(hIGF-Ⅰ),将hIGF-Ⅰ基因克隆进非转座子类型的昆虫细胞表达载体pIZT/V5-His,构建转基因载体pIZT/V5-His-hIGF-Ⅰ。利用精子介导法将该转基因载体导入家蚕卵,通过绿色荧光筛选并结合PCR和Dot blotting检测鉴定,表明已成功获得hIGF-Ⅰ转基因家蚕。对培育至G2代的转基因家蚕5龄幼虫蛋白质样品进行Western blotting分析,结果显示hIGF-Ⅰ在转基因家蚕中获得表达,重组hIGF-Ⅰ的分子质量约12.5 kD;ELISA检测hIGF-Ⅰ在G2代转基因家蚕5龄幼虫全蚕以及后部丝腺、脂肪体冻干粉中的质量比分别为65、411、469 ng/g。试验结果再次证实通过非转座子载体pIZT/V5-His介导可以将外源基因导入家蚕基因组,并实现外源基因在转基因家蚕中整体表达。  相似文献   

SARS-COV S蛋白在大肠杆菌和家蚕中的表达     

陈文柱  何婀妮  曹广力  薛仁宇  陈淼  何泽  沈卫德  贡成良 《蚕业科学》2005,31(4):444-448

将SARS-CoV S蛋白基因的部分序列(accession number为AY304495的22 908-23 542 nt区域),克隆到表达载体pET28 a(+)中,并在大肠杆菌BL21中诱导表达。SDS-PAGE、W estern b lotting分析表明,重组S蛋白的分子量约为27 kD,与理论分子量相符。将S蛋白基因的部分序列克隆入杆状病毒转移载体pBacPAK-H is后,与线性化家蚕杆状病毒BmBacPAK-6共转染BmN细胞,经空斑筛选获得重组杆状病毒BmBac-S,并将其在细胞和家蚕中进行表达。SDS-PAGE、W estern b lotting分析表明,表达产物的分子量约30 kD,用金属螯合亲和层析纯化得到家蚕细胞表达的重组S蛋白。  相似文献   

家蚕丝素蛋白H链基因启动子区域的克隆及活性分析   总被引：2，自引：2，他引：0  

周文林  曹锦如  叶爱红  曹广力  薛仁宇  贡成良 《蚕业科学》2008,34(1):72-77

家蚕(Bombyxmori)丝素蛋白H链基因(fib-H)具有在后部丝腺组织专一性、高效性表达的特点。为利用其时空调控机制,通过PCR扩增方法克隆fib-H启动子片段,并进行序列分析,进而构建由fib-H启动子控制报告基因DsRed的重组载体pSK-FH-DsRed-PolyA,通过家蚕BmN细胞和丝腺进行瞬时表达。结果表明:克隆的fib-H启动子序列具有典型的丝腺特异性表达启动子的特征,并可以驱动DsRed报告基因在BmN细胞和家蚕后部丝腺组织中瞬时表达。  相似文献   

ie-1和lef-1基因dsRNA表达元件转染及转化细胞对家蚕核型多角体病毒增殖的抑制   总被引：3，自引：2，他引：1  

薛仁宇  曹广力  王崇龙  刘波  沈卫德  贡成良 《蚕业科学》2008,34(2):250-256

通过RNAi介导可以抑制病毒增殖,将相应的RNAi元件通过转基因转入宿主有可能使宿主对病毒产生一定的抗性。根据家蚕核型多角体病毒(BmNPV)基因组中的病毒复制必需基因ie-1、lef-1设计相应的RNA干扰区段,并构建相应的转基因载体转入家蚕BmN细胞中,瞬时表达结果显示转染了转基因RNAi载体的BmN细胞均对BmNPV有一定的抑制作用。IE dsRNA在病毒滴度为10-4时有抑制作用,在病毒滴度为10-5时有比较好的作用;LEF dsRNA则在病毒滴度为10-5时有抑制作用,在病毒滴度为10-6时有较好的抑制作用。通过转基因及G418筛选后,转基因IE dsRNA细胞在病毒滴度为10-4显示出一定的抑制作用,在病毒滴度为10-5表现了明显的抑制作用;而转基因LEF dsRNA细胞在病毒滴度为10-5有一定的抑制作用,但只维持了一个时段。  相似文献   

piggyBac转座子介导的家蚕细胞转基因研究初探   总被引：5，自引：4，他引：1  

周文林  王崇龙  刘波  曹广力  薛仁宇  沈卫德  贡成良 《蚕业科学》2007,33(1):30-35

为探讨稳定转化家蚕细胞表达外源基因的新方法,以家蚕核型多角体病毒(BmNPV)极早期蛋白基因(ie-1)启动子元件驱动新霉素抗性基因(neor),并克隆至具有绿色荧光蛋白基因(gfp)标记的昆虫转座子载体piggyBac中,构建转基因载体pigA3-IE-Neo。以该载体转染家蚕BmN细胞,用终浓度800μg/mL的遗传霉素(geneticin,G418)筛选3个月,获得了稳定转化的细胞,呈现绿色荧光的细胞数达80%以上。通过PCR鉴定证实了细胞基因组DNA中neor基因和gfp基因的存在。  相似文献   

利用家蚕表达合成人表皮生长因子(EGF)及产物对胃粘膜损伤的修复作用     

薛仁宇  曹广力  陈淼  沈卫德  魏育红  贡成良 《蚕业科学》2007,33(1):67-73

基于家蚕杆状病毒密码子的偏爱性,对人表皮生长因子基因(hEGF)的部分密码子进行修改后合成一个新的基因,命名为CSEGF。所合成的CSEGF能编码同hEGF完全一致的氨基酸序列,并被重组进家蚕杆状病毒获得重组Bm-BacCSEGF。重组病毒感染家蚕后,该基因在家蚕中的表达量达28.4μg/mL幼虫血淋巴及33.07μg/mL蛹血淋巴。将表达CSEGF的蚕蛹经冻干直接制成EGF冻干粉胶囊,经测定冻干粉中EGF的质量比达140μg/g。动物模型试验显示该冻干粉对酸诱导的急性胃粘膜损伤的SD大鼠有显著的修复作用,对大鼠裸鼠的肾细胞生长也有明显的促进作用。  相似文献