猪流行性腹泻病毒微滴式数字PCR定量检测方法的建立及初步应用     

周建浩  王东方  刘影  王淑娟  马震原  谢彩华  赵雪丽  杨海波  冯桂丹  康台生  胡煜锋  李博文  闫若潜 《畜牧兽医学报》2024,(1):413-418

旨在建立一种敏感性高、特异性强、重复性好的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)微滴式数字PCR(droplet digital PCR, ddPCR)定量检测方法。本研究根据GenBank登录的PEDV(MK862249.1)M基因序列保守区设计合成特异性引物对和探针;通过对反应体系和反应条件的优化,成功建立了可用于检测PEDV的荧光定量PCR(fluorescent quantitative real-time PCR,FQ-PCR)方法,将自行建立的FQ-PCR方法的引物对/探针用来确定ddPCR方法;对ddPCR方法进行敏感性、特异性、重复性和初步应用试验。结果显示：自行建立的FQ-PCR方法在敏感性、重复性等方面均优于行标FQ-PCR方法;根据自行设计的FQ-PCR方法建立的ddPCR方法最低检测极限为0.15 copies·μL^-1,敏感性高于行业标准(SN/T 1699—2017)FQ-PCR方法(1.0×10¹ copies·μL^-1);模板浓度为1...  相似文献