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【目的】从表达M2e-EYFP融合蛋白转基因柔嫩艾美耳球虫的稳定性,及其在环境中的传播能力、竞争能力和存活能力方面,分析转基因球虫对生态环境的潜在风险。【方法】稳定性试验包括:转基因球虫感染非靶动物,观察临床症状和卵囊产出情况;转基因球虫继代繁殖,检测荧光率;转基因球虫与毒害艾美耳球虫混合感染,PCR检测卵囊中的外源基因。传播能力试验主要是分析感染鸡和不感染同居鸡的卵囊产量和荧光率。竞争性试验则是用不同混合比例的2种球虫感染鸡,检测卵囊产量和荧光率;存活能力试验是用不同处理方式的卵囊感染鸡,检测卵囊是否产出以分析卵囊存活能力。【结果】转基因球虫不感染小鼠和家鸽,与野生型柔嫩艾美耳球虫宿主特异性相同;连续繁殖传17代后外源基因稳定表达。与毒害艾美耳球虫混合寄生时在异种球虫体内未检测出外源基因。传播能力试验中,46d攻毒时转基因球虫感染与不感染同居组的卵囊产量差异不显著,但与不感染对照组相比均显著减少,且1∶1感染和不感染同居组卵囊荧光率检测结果维持在51.6%67.9%。竟争性试验中,攻毒时各比例感染组卵囊产量均极显著少于不感染攻毒对照组,荧光率检测结果各比例组变化幅动不大,且1∶1组哨兵鸡卵囊荧光率检测结果为41.2%61%。存活能力试验,转基因球虫与野生型球虫在夏季室温条件下均不能存活90d,且与其他不同方式处理的卵囊外界存活时间接近。【结论】说明转基因球虫具有良好的稳定性,在环境中的传播能力、竞争能力和存活能力未呈现显著优于野生球虫的趋势。 相似文献
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低转染效率一直是利用基因转染技术研究柔嫩艾美耳球虫的主要屏障。为了进一步提高现有的转染效率,本研究分别利用传统的Bio-Rad Gene Pulser电穿孔仪和新型的NucleofectorⅠ核转仪对柔嫩艾美耳球虫子孢子的转染条件进行了优化。通过对外源DNA浓度、电场强度、环境温度及NucleofectorⅠ核转仪的内置程序这些关键参数的探索,最终发现利用Bio-Rad Gene Pulser电穿孔仪设置电压为2000 V,电容25 μF,利用4 mm电击杯进行电转时,转染效率最高,达到3.8×10-4,此时最佳质粒浓度为50 μg/107子孢子。 相似文献
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2006～2008年,北京动物园繁殖的17只1.5～3.5月龄丹顶鹤幼鹤出现厌食、精神倦怠、呼吸困难等症状。采用PCR方法鉴定病原,使用特异性引物对线粒体细胞色素b、细胞色素氧化酶Ⅰ、18S rRNA及线粒体部分非编码区基因进行扩增、克隆、测序,结合GenBank中已知疟原虫序列,经DNAMAN软件处理分析,并对Cytb序列用软件MEGA 4.0建NJ树。序列分析表明丹顶鹤血孢子虫靶序列与鸟疟原虫序列相似性达到98%以上,进化关系分析表明与残疟原虫各株属同一个种群,证明该病病原为残疟原虫。但该血孢子虫与残疟原虫已报道各株形态有一定差异,可能为寄生于丹顶鹤的一个新基因型。 相似文献
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鸡球虫病是阻碍养禽业健康发展的重要寄生虫病。地克珠利作为一种低毒、广谱、高效的抗球虫药物得到了广泛使用,但长期使用导致鸡球虫耐药株广泛出现。为了探究鸡球虫对地克珠利产生耐药性的分子机制,本试验采用药物浓度递增的方法诱导耐药株,通过全基因组重测序分析柔嫩艾美耳球虫耐药株和敏感株之间单核苷酸多态性(SNP)的杂合度差异。结果显示,与敏感株相比,耐药株在蛋白激酶(EVM0000192)基因存在2个非同义突变,推测其与柔嫩艾美耳球虫的地克珠利耐药性的产生有关,本试验为后续利用更多耐药株的SNP来发掘地克珠利耐药基因提供了科学依据。 相似文献
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为明确地克珠利耐药虫株与敏感虫株在基因水平的差异,进而解析地克珠利耐药性产生的分子机制,本研究以实验室保存的2株柔嫩艾美耳球虫地克珠利耐药虫株和2株柔嫩艾美耳球虫地克珠利敏感虫株为研究对象,将4个虫株进行全基因组重测序(NGS),通过单核苷酸多态性(SNP)密度分布解析耐药株与敏感株之间的差异。结果显示,与敏感株相比,耐药株在第13号染色体0.1～1 Mb区间内的SNP比较富集。本研究结果为解析鸡球虫14条染色体上抗原变异位点和耐药性位点等的研究提供了科学依据。 相似文献