水泡性口炎病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立   总被引：1，自引：0，他引：1  

孙秀萍  宋晗星  苏高莉  周平  何叶  王丽  潘伟  丁宁  包英夫  孙晨  宋德光 《中国预防兽医学报》2012,(8):637-641

为建立方便快捷的水泡性口炎病毒(VSV)检测方法,本研究以抗VSV单克隆抗体(MAb)为捕获抗体,兔抗VSV多克隆抗体为检测抗体,建立VSV双抗体夹心ELISA检测方法。结果显示,该方法的最佳工作条件为:抗VSV MAb 1A2的包被浓度为3.09μg/mL,兔抗VSV多克隆抗体和酶标抗体的工作浓度分别为5.16μg/mL和1∶5 000,以OD450nm≥0.231作为阳性判定标准。该ELISA方法对猪水泡病病毒、猪水疱疹病毒及羊传染性脓疱病毒等均无交叉反应;敏感度可达3.125μg/mL(101TCID50);其重复性变异系数小于10%。采用建立的ELISA方法与RT-PCR方法同时检测187份临床样品,符合率达到97.9%,具有良好的相关性。本实验建立的VSV双抗体夹心ELISA检测方法具有特异性好、敏感性高、成本低及方便快捷等优点,可以用于VSV的快速检测。  相似文献   

羊口疮病毒农安分离株的分离鉴定及Orf059(F1L)基因的序列分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

苏高莉  高丰  赵魁  孙秀萍  何叶  周平  潘伟  包英夫  李吉达  宋德光 《中国兽医学报》2013,33(1):4-8

利用初生胎羊鼻甲骨(Primary ovine fetal turbinate,OFTu)细胞从送检的疑似“口疮”症状的病羊唇部痂皮中分离获得1株病毒,用PCR检测、电镜负染观察及理化性质测定等方法对该分离株病毒进行鉴定,证实该分离株为羊传染性脓疱病毒(Off virus,ORFV),命名为(Orf virus Jilin-Nongan,ORFV JL-NA株).对ORFV JL-NA分离株Orf059(F1L)基因进行克隆、测序并对测序结果进行序列分析.结果显示,获得的ORFV JL-NA分离株Orf059(F1L)基因序列长为994 bp,编码329个氨基酸,与ORFV-D1701株、ORFV-Jilin株、ORFV-NZ2株、ORFV-20株、ORFV-7株、ORFV-C2株、ORFV-IA82株、ORFV-SA00株、ORFV-mi90株、ORFV-torino株、ORFV-Shanxi株核苷酸序列同源性分别为96.4％、97.3％、99.1％、98.7％、99.0％、97.5％、98.4％、97.2％、97.4％、96.9％和96.8％.遗传进化树结果显示,ORFV JL-NA分离株与意大利ORFV-7毒株的亲缘关系较近,表明不同地区分离株的Orf059(F1L)基因差异不大.  相似文献   

抗ORFV免疫球蛋白重链可变区基因序列的RT-PCR扩增及其多样性     

包英夫  宋德光  贺文琦 《中国兽医学报》2014,(4):526-529

利用RT-PCR方法从羊传染性脓疱病毒(Orf virus,ORFV)感染绵羊脾脏总RNA中扩增获得免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)重链可变区cDNA克隆,随机挑选52个阳性克隆进行测序,获得49条完整的不重复序列。序列比对结果显示,49条序列的核苷酸同源性分别为84.3%(H7与H38)¹00%(H5与H6)不等;绵羊IgH可变区V片段氨基酸聚类结果显示,克隆H1100%(H5与H6)不等;绵羊IgH可变区V片段氨基酸聚类结果显示,克隆H1^H49的VH区段自动聚类为2个相对独立的单位。通过BLAST-N程序在GenBank数据库在线搜索,并结合其他参考序列进行比较分析,分析数据显示,D片段从9到46个碱基长度不等,无论是在核苷酸还是氨基酸序列上,其同源性均存在高度的变异性;结合其亲水性分布图可知,可变区的亲水性氨基酸主要分布在VH区域和D高变区,对照抗原指数图和表面可能性图,亲水性强的VH区域和D高变区易形成抗原决定簇。  相似文献