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Trizol法提取猪瘟兔化弱毒株(C株)总RNA,根据GenBank中E0基因序列设计特异性引物,扩增克隆E0基因,插入原核表达载体pET-32a(+),转化进BL2l(DE3)内进行表达。将表达的重组pET-E0蛋白通过His亲和层析柱纯化,以纯化后的蛋白为诊断抗原,包被96孔聚乙烯平板,通过探索抗原包被量和血清稀释倍数,建立检测猪瘟E0抗体的ELISA方法。通过对蛋白表达条件和ELISA反应条件的优化,确定E0蛋白能在BL2l(DE3)内高效表达,表达量达30%,蛋白分子质量约为50 ku,且蛋白以可溶性形式存在。纯化后蛋白浓度为2 mg/mL;抗原最适包被量为300 ng;血清最适稀释度为1∶50。经阻断试验、交叉反应试验和与IDEXX公司猪瘟病毒抗体检测试剂盒的符合性(83%)试验证明,建立的E0-ELISA简便、特异、稳定,为研制开发E2标记疫苗的应用和推广提供配套的检测方法。 相似文献
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小反刍兽疫病毒H基因的原核表达与鉴定 总被引：1，自引：0，他引：1
根据GenBank中已发表的小反刍兽疫病毒(PPRV)Nigeria 75/1株的H基因序列,设计上下游引物并添加BamH I酶切位点,以含有小反刍兽疫病毒H基因的Topo-PPRVH质粒为模板进行PCR扩增,扩增产物克隆于pEASY-T载体中,用BamH I单酶切后将目的片段连接到原核表达载体pET-32a(+)中,核酸序列分析证明.成功构建了PPRV H原核表达质粒pET-32a-H.将pET-32a-H重组质粒转化大肠杆茵 BL21(DE3)进行融合表达.经SDS-PAGE电泳,可见H蛋白获得了高效表达,融合蛋白的分子量约为87 Ku,表达产物以包涵体的形式存在,其表达量达到茵体总蛋白的38%,占包涵体蛋白的80%以上.Western blot鉴定表明,所表达的重组蛋白能被抗组氨酸单抗、抗PPRV标准阳性羊血清及抗PPRV疫苗的羊血清所识别,具有良好的免疫原性. 相似文献
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黑龙江省湿地GIS空间数据库的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
以CIS技术为手段,在收集大量有关湿地材料的基础上,完成了黑龙江省湿地GIS空间数据库的建立,利用此数据库．可以进行图形信息与属性信息的双重查询,同时可以构造条件表达式,进行复杂的查询。比较全面、系统地尽映出黑龙江省湿些的数量、类型、生态特征、地理分布、主要保护动植物以及与湿地相关的自然保护区。将CIS技术用于全省湿地保护与管理,可以节省大量人力、物力和财力,达到生态效益、经济效益和社会效益的统一。 相似文献
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为研究地表覆盖材料对甘肃盐渍化土壤水盐运移及枸杞生生长产量的影响,在统一沟灌6 000 m3·hm~(-2)的基础上,以不覆盖为对照(CK),设置覆盖黑膜(T1)、草帘(T2)、无纺布(T3)3种材料处理;监测覆盖处理后土壤含水率、盐分含量和pH,分析土壤水盐变化。结果表明:地表覆盖黑膜、草帘、无纺布均能削弱地表蒸发,抑制地表返盐,黑膜处理土壤含水率最高、含盐量最低,无纺布处理土壤含盐量最高;覆盖草帘处理枸杞成活率、保存率、株高、冠幅和产量均为最高,第2年草帘处理枸杞产量为1.86t·hm~(-2),是对照的1.4倍,比黑膜、无纺布处理分别高10.7%、8.1%。因此,沟灌条件下覆盖草帘适宜于该地区盐渍土农作物种植。 相似文献
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山东某猪场繁殖障碍性疾病的诊断研究 总被引：6，自引：0，他引：6
采用ELISA、PCR、RT-PCR及细胞培养等方法对山东某猪场流产、死胎及出生后几天死亡的小猪进行猪瘟病毒(CSFV),伪狂犬病毒(PRV),圆环病毒2型(PCV-2),细小病毒(PPV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)五种繁殖障碍性疾病进行检测,并应用ELISA猪瘟抗原检测试剂盒检测猪瘟病毒.检测结果表明,猪瘟病毒与圆环病毒2型为阳性,猪繁殖与呼吸综合征病毒、细小病毒、伪狂犬病毒均为阴性.根据结果判定该猪场发生猪瘟病毒与圆环病毒2型混合感染的繁殖障碍性疾病,其中以猪瘟感染最为严重. 相似文献
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