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通过克隆2型猪圆环病毒（PCV2）的开放阅读框2（0RF2）基因编码其核衣壳蛋白（Cap）的一段靶序列,构建重组质粒作为标准阳性模板.根据GenBank中的靶序列设计一对引物和一条TaqMan探针.对PCR反应条件优化后,对构建的标准阳性模板定量,然后1 0＆#215;倍比稀释进行荧光定量PCR（qPCR）扩增并制作标准曲线,初步建立了PCV2检测的qPCR方法.结果表明,该方法检测灵敏度可达1.0＆#215;102拷贝/μ L,线性范围为101 ～ 109,达9个数量级,并且具有很好的特异性.对起始浓度为1.0＆#215;108、1.0＆#215; 106、1.0＆#215;104拷贝/μL的标准品的最终实际测得CT均值分别为12.77、19.72和26.89;变异系数分别为0.25％、0.10％和0.13％,均小于1％,说明此方法具有良好的准确性和重复性. 相似文献
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用ELISA方法进行猪圆环病毒病血清学调查 总被引：1，自引：0，他引：1
本研究用猪2型圆环病毒ORF2基因的表达产物包被酶标板，建立ELISA诊断方法，用此方法对临床1257份送检血清进行了检测，其总阳性率为57．28%(720／1257)，仔猪阳性率为30．83％(119／386)，肥猪阳性率为64．93％(137／211)，母猪阳性率为71．50％(419／586)，公猪阳性率为70．27％(52／74)。这一结果表明猪圆环病毒在我国流行较普遍，且抗体阳性率随猪体年龄的增长而升高。 相似文献
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我国部分地区近年来新城疫病毒流行株分子生物学特征的研究 总被引：1，自引：0，他引：1
参考GenBank中的新城疫病毒（NDV）的基因序列,在F基因的3’端相对保守区设计1对引物,利用RT-PCR方法对华南农业大学兽医学院禽病学教研室近几年来分离并保存的24株新城疫病毒毒株的F基因进行了扩增,其扩增长度为450bp．测序结果表明：近十几年来,我国流行的新城疫毒株主要为基因Ⅶ型,其氨基酸序列均符合F蛋白裂解位点区（112～117）强毒株的氨基酸序列特征,并从分子水平上进一步证明我国最近流行的NDV主要为基因Ⅶ型NDV强毒株． 相似文献
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从患病鹅群中分离到一株禽副黏病毒，编号为2／GD／05／Go，简写为GPMV-2／05。经纯化后发现该病毒在透射电镜下呈圆形、大小比较均一，表面有纤突，对氯仿和酸敏感，不耐热，在中性和碱性溶液中比较稳定。血清学试验结果表明该病毒具有血凝活性，且能被鸡新城疫病毒（NDV）I系、Ⅳ系抗血清部分抑制，但与禽流感、小鹅瘟等病毒无交叉反应。人工感染结果显示，新分离到的病毒对1、14、28、48日龄的鹅均有很强的致病性，尤以30日龄内最为严重，死亡率高达100％；经口服、点眼滴鼻、肌注、皮下注射等途径均能感染鹅，并且临床症状和死亡率与自然感染病例相似。该病毒对鸡也有很高的致病性和致死率，但用NDV强毒攻毒的鹅并不发病。通过免疫保护试验发现，GPMV-2／05与NDVI系、Ⅳ系及强毒F48E9有部分免疫原性交叉。血清学、电镜观察、理化鉴定、病理组织学观察、免疫保护试验、RT-PCR鉴定以及致病性指数的测定等结果均表明该病毒是一株对鹅具有高致病力的禽副黏病毒。 相似文献
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参照GenBank中已发表的H7亚型禽流感病毒血凝素(HA)基因设计合成了一对预计扩增片段大小约为310bp的引物。利用这对引物,通过对RT-PCR反应体系和反应条件的优化,建立了针对H7亚型禽流感的RT-PCR检测方法。敏感性试验和特异性试验结果表明,该方法敏感性高,最低可检出100pg的AIV-H7的mRNA,且应用该引物对新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)及其他亚型的流感病毒(H1、H3、H5、H9)在相同反应条件下未扩增出任何片段,具有较好的特异性。用所建立RT-PCR方法检测发病鸡组织病料及咽、肛拭子,检测结果与鸡胚病毒分离结果相比,阳性符合率高达90.6%。 相似文献
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应用环介导逆转录等温扩增技术快速检测新城疫病毒 总被引：4，自引：0，他引：4
参考新城疫病毒融合基因(fusion gene, F gene)序列,设计了2对能够特异性地识别F基因上的6个区域的引物,并以此建立了一种简单、快速、有效的环介导逆转录等温扩增(RT-LAMP)方法检测NDV. 试验结果表明:该方法用时短(2 h内完成)、特异性好而且灵敏度高,最小检测限可达100 pg;对人工发病样品进行鸡胚分离和RT-LAMP检测,二者的阳性符合率高达93.5%;同时采用镁离子沉淀对检测结果进行可视化处理,方便利用肉眼直接观察. 相似文献
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本研究选择ISA 775 VG佐剂和Marcol-52白油佐剂制备鸡毒支原体灭活疫苗（R株）,对其物理性状、安全性和效力进行比较试验.结果表明：两种佐剂制备的疫苗物理性状良好;ISA 775 VG佐剂疫苗粘度比Marcol-52白油佐剂疫苗低;Marcol-52白油佐剂疫苗安全性优于ISA 775 VG佐剂疫苗;气囊损伤保护率ISA 775 VG佐剂疫苗为100％,Marcol-52白油佐剂疫苗组为79.81％. 相似文献
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为了研究鸡γ-干扰素（ChIFN-γ）基因的功能并进一步探究其在控制家禽传染病方面的应用，根据GenBank已发表的ChIFN-γ cDNA基因序列自行设计引物，应用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）技术从伴刀豆球蛋白A（ConA）刺激培养鸡脾淋巴细胞中提取的总RNA中扩增得到ChIFN-γ，然后连接到pMD18-T载体上并转化到Top10感受态细胞中，获得阳性重组质粒并进行正确性序列测序．核甘酸序列结果表明，试验得到了长为513bp的ChIFN-γ基因，与原鸡（Gullus）IFN-γ的同源性可高达100％，其含有1个495bp的开放性阅读框架，编码164个氨基酸，推测其成熟蛋白的相对分子质量约为18000． 相似文献
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