鸡传染性贫血病毒VP1基因的克隆表达及抗原性分析     

杨勇任玉红  梁宝怀朱雅宁 梁智选 《中国兽医科技》2007,37(2):140-144

参考已发表的鸡传染性贫血病毒（CIAV）VP1基因序列，设计并合成了2对引物，经PCR扩增获得了2个基因片段。将PCR产物克隆至pGEM—T Easy载体中，成功构建了克隆载体pGEM—CIAVVP1A和pGEM—CIAVVP1B。将上述重组质粒和原核表达载体pMXB10分别用NdPⅠ＋EcoRⅠ、NdeⅠ十X^0I双酶切，并将纯化的2个基因亚克隆至pMXB10中，构建出原核表达载体pMXB10-VP1A和pMXB10-VPIB。在0．3mmol／L IPTG诱导下，目的基因在大肠杆菌ER2566中以分泌型得到了大量表达。Western—blot分析发现，表达蛋白具有CIAV抗原性。表达蛋白经纯化后作为包被抗原，用间接ELISA鉴定，与CIAV阳性血清均能发生特异性反应。2组蛋白免疫SPF鸡后，用全病毒ELISA试剂盒检测血清呈阳性，表明2组蛋白均可诱发机体产生抗CIAV的抗体。  相似文献   

浅议奶牛酮病     

梁宝怀 《农机推广与安全》2013,(23):14-15

奶牛酮病多发于高产奶牛产犊后10～60d，且以3-6胎次的高产母牛发病率较高。酮病虽然能够治愈，也很少引起奶牛死亡，但酮病会使泌乳牛的泌乳量下降、乳质量降低、繁殖率降低以及引起生殖系统疾病和内分泌紊乱等多种疾病，增加了治疗费用，  相似文献   

鸡传染性贫血病毒vp1基因的克隆表达及抗原性分析     

杨勇  任玉红  梁宝怀  朱雅宁  梁志选 《中国预防兽医学报》2007,29(8):575-578,583

从组织病料中提取CAV核酸,根据GenBank上发表的序列设计两对引物,分别扩增出vp1的139 bp～83 bp和547 bp～1337 bp两个基因片段,然后分别将其充隆到原核表达载体PMXB10上,经PCR和酶切鉴定,证明成功构建了重组表达载体PMXB10-vp1C和PMXB10-vp1D。在0.3 mM的IPTG诱导下,融合蛋白在大肠杆菌ER（2566）以分泌型得到大量表达,经大量表达后,用几丁质柱挂柱切割纯化后,得到切割蛋白E、F,在Western blot免疫分析印迹中,两组融合蛋白和切割蛋白与CAV阳性血清均能发生特异性反应。用ELISA方法检验,纯化的两组蛋白与CAV阳性血清均能发生特异性反应。用两组蛋白免疫SPF鸡后,用全病毒ELISA试剂盒检测血清呈阳性,表明两组蛋白均可诱发机体产生抗CAV的抗体。  相似文献