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为克隆犬弓首蛔虫Toxocara canis,T.canis卵黄原蛋白DUF1943结构域(The domain of unknown function1943,DUF1943)(Tc-duf1943),构建其原核表达载体pET-28a(+)/duf1943,并检测重组蛋白在大肠杆菌Escherichia coli,E.coli中的表达形式.该文根据T.canis的转录组数据,以T.canis雌、雄虫cDNA为模板扩增Tcduf1943,然后与表达载体pET-28a(+)连接,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导,对目的蛋白的原核表达形式和蛋白质纯化进行鉴定.结果显示Tc-duf1943序列长度为864bp,含有一个完整的开放阅读框,编码288个氨基酸;SDS-PAGE电泳结果表明,重组蛋白以包涵体形式存在,相对分子质量大小约为3.5×10~4;对表达条件进行优化后,以0.4mmol/L IPTG,于37℃诱导4h时可获得大量目的蛋白;利用Ni-NTA亲和层析柱纯化可以获得具有较高纯度的目的蛋白.该试验成功构建了pET-28a(+)/duf1943原核表达载体,为进一步研究TcDUF1943的生物学功能奠定了基础. 相似文献
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为探讨犬弓首蛔虫（Toxocara canis，T.canis）软骨素蛋白多糖TcCPG1的表达特征及其与几丁质的结合方式，为犬弓首蛔虫软骨素蛋白多糖的功能研究提供依据，笔者克隆T.canis软骨素蛋白多糖1基因（Tc-cpg-1）并原核表达重组蛋白TcCPG1，采用镍柱亲和层析技术对重组蛋白进行纯化，并与几丁质进行结合试验；采用实时荧光定量PCR（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）进行Tc-cpg-1基因的转录水平的性别和组织差异表达分析。结果显示：Tc-cpg-1基因编码区（coding sequence，CDS）的长度为1 251 bp，共编码417个氨基酸；SDS-PAGE电泳结果显示重组蛋白TcCPG1以包涵体形式存在，相对分子质量大小约为70 ku；对表达条件进行优化后，以0.8 mmol·L-1 IPTG于16℃诱导14 h时可获得大量目的蛋白；利用镍柱亲和层析纯化可以获得具有较高纯度的目的蛋白，与几丁质进行结合试验，验证了重组蛋白TcCPG1能够与几丁质结合；通过qRT-PCR对Tc-cpg-1基因转录水平的组织差异性进行分析，发现Tc-cpg-1在雌虫中高量表达，尤其在雌虫的生殖组织中表达量最高，表明Tc-cpg-1可能参与了T.canis雌虫的生殖过程，推测TcCPG1可能通过与卵壳中几丁质的相互作用从而影响T.canis的胚胎和生殖发育过程。 相似文献
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为研究犬弓首蛔虫(Toxocara canis,T.canis)黏蛋白1基因(Tc-MUC-1)的分子特征,该试验根据犬弓首蛔虫基因组数据库中的Tc-MUC-1基因序列设计引物,通过PCR技术克隆Tc-MUC-1全长基因,并进行多重序列比对和种系发育进化树分析.结果发现该基因全长为531 bp,编码176个氨基酸.功能结构域分析发现Tc-MUC-1蛋白包含1个由11个STSSSSA重复序列构成的Mucin结构域和2个ShKT结构域; GO分析显示具有蛋白质结合和金属离子结合功能;多重序列比对发现Tc-MUC-1与T.canis的其余4个黏蛋白(Tc-MUC-2-Tc-MUC-5)均含有2个由36个氨基酸组成的ShKT结构域;种系发育进化树分析显示Tc-MUC-1与双胃线虫(Pristionchus pacificus; GenBank No. PDM76930)和秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans; GenBank No. NP491509)进化关系较近. 相似文献
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研究犬弓首蛔虫(Toxocara canis,T.canis)腺苷三磷酸结合盒转运蛋白(ATP-binding cassette transporters, ABC)亚家族G5基因(abcg-5)的分子特征.根据犬弓首蛔虫基因组数据库中的Tc-abcg-5基因序列设计引物,通过PCR技术克隆Tc-abcg-5全长基因,并进行多重序列比对和种系发育进化树分析.结果表明:该基因全长为1 902 bp,编码633个氨基酸.功能结构域分析发现TcABCG5蛋白包含1个ABC转运蛋白结构域和6个跨膜区,同时发现了高度保守的Walker A和Walker B模体. GO分析显示ABCG5具有ATP结合和ATP酶活性.种系发育进化树分析显示TcABCG5与猪蛔虫进化关系较近,与哺乳动物进化关系较远. 相似文献
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为研究犬弓首蛔虫(Toxocara canis,T.canis)腺苷三磷酸结合盒G5基因(ATP-binding cassette G5,ab-cg-5)的功能,通过体外合成Tc-abcg-5基因的特异性siRNA,利用RNAi技术对T.canis的成虫和虫卵进行干扰。结果显示,干扰24、48h后siRNA-744组Tc-abcg-5的相对表达量比siRNA-1020组和siRNA-432组显著性降低,表明siRNA-744有较高的沉默效率。采用电穿孔法和浸泡法对siRNA-744的递送效率进行比较,结果显示浸泡法更有利于将siRNA-744导入到T.canis虫卵内。用siRNA-744经浸泡法干扰T.canis感染性虫卵,经口灌服小鼠,感染后第7天对小鼠的脑、肝和肺组织进行病理学研究,结果显示RNA干扰使T.canis感染性虫卵的感染力下降,从而降低了肺、肝的病变程度。研究表明Tc-abcg-5基因可能通过影响虫卵的发育从而参与T.canis的生长、发育过程。 相似文献
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了解重庆市荣昌区犬消化道内寄生虫的感染情况,为制定防治措施提供依据.采用锦纶筛兜淘洗法、饱和盐水漂浮法和虫卵沉淀法调查了荣昌区6个街镇的209份犬粪样.结果检测出感染虫体种数为5种,感染率最高的是犬弓首蛔虫,阳性率为77.03%;感染率最低的是巴西钩口线虫,感染率为21.53%.1-6月龄的犬寄生虫感染率为98.68%;7-12月龄的犬寄生虫感染率为79.17%;1岁以上的犬寄生虫感染率为68.85%.本地犬寄生虫的感染率达到了96.55%;其次属杂交犬,为89.65%;宠物犬的感染率较低,为59.38%.结果表明,荣昌区犬消化道内寄生虫感染较为普遍,应重视犬寄生虫病的防治. 相似文献
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