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为克隆犬弓首蛔虫Toxocara canis,T.canis卵黄原蛋白DUF1943结构域(The domain of unknown function1943,DUF1943)(Tc-duf1943),构建其原核表达载体pET-28a(+)/duf1943,并检测重组蛋白在大肠杆菌Escherichia coli,E.coli中的表达形式.该文根据T.canis的转录组数据,以T.canis雌、雄虫cDNA为模板扩增Tcduf1943,然后与表达载体pET-28a(+)连接,转化E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导,对目的蛋白的原核表达形式和蛋白质纯化进行鉴定.结果显示Tc-duf1943序列长度为864bp,含有一个完整的开放阅读框,编码288个氨基酸;SDS-PAGE电泳结果表明,重组蛋白以包涵体形式存在,相对分子质量大小约为3.5×10~4;对表达条件进行优化后,以0.4mmol/L IPTG,于37℃诱导4h时可获得大量目的蛋白;利用Ni-NTA亲和层析柱纯化可以获得具有较高纯度的目的蛋白.该试验成功构建了pET-28a(+)/duf1943原核表达载体,为进一步研究TcDUF1943的生物学功能奠定了基础. 相似文献
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正水通道蛋白(Aquaporins,AQPs)是一个具有跨膜转运水分子功能的蛋白家族,属于主要内在蛋白超级家族成员,能够介导不同类型细胞的跨膜水转运。研究发现,AQPs不仅运输水,还能运输一些小的溶质如甘油、尿素,甚至是气体(如CO_2等)和离子通过细胞膜~[1]。AQPs广泛分布于各种生物体内,在哺乳动物、植物、昆虫、蠕虫、原生动物、细菌、真菌、病毒以及各种有机体中均有AQPs的存在~[2]。作为宿主-寄生虫相互作用的分子基础~[3], 相似文献
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为研究犬弓首蛔虫(Toxocara canis,T.canis)腺苷三磷酸结合盒G5基因(ATP-binding cassette G5,ab-cg-5)的功能,通过体外合成Tc-abcg-5基因的特异性siRNA,利用RNAi技术对T.canis的成虫和虫卵进行干扰。结果显示,干扰24、48h后siRNA-744组Tc-abcg-5的相对表达量比siRNA-1020组和siRNA-432组显著性降低,表明siRNA-744有较高的沉默效率。采用电穿孔法和浸泡法对siRNA-744的递送效率进行比较,结果显示浸泡法更有利于将siRNA-744导入到T.canis虫卵内。用siRNA-744经浸泡法干扰T.canis感染性虫卵,经口灌服小鼠,感染后第7天对小鼠的脑、肝和肺组织进行病理学研究,结果显示RNA干扰使T.canis感染性虫卵的感染力下降,从而降低了肺、肝的病变程度。研究表明Tc-abcg-5基因可能通过影响虫卵的发育从而参与T.canis的生长、发育过程。 相似文献
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了解重庆市荣昌区犬消化道内寄生虫的感染情况,为制定防治措施提供依据.采用锦纶筛兜淘洗法、饱和盐水漂浮法和虫卵沉淀法调查了荣昌区6个街镇的209份犬粪样.结果检测出感染虫体种数为5种,感染率最高的是犬弓首蛔虫,阳性率为77.03%;感染率最低的是巴西钩口线虫,感染率为21.53%.1-6月龄的犬寄生虫感染率为98.68%;7-12月龄的犬寄生虫感染率为79.17%;1岁以上的犬寄生虫感染率为68.85%.本地犬寄生虫的感染率达到了96.55%;其次属杂交犬,为89.65%;宠物犬的感染率较低,为59.38%.结果表明,荣昌区犬消化道内寄生虫感染较为普遍,应重视犬寄生虫病的防治. 相似文献
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