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研究旨在对驴α1酸性糖蛋白（alpha-1-acid glycoprotein,α1-AGP）进行生物信息学预测和分析,并建立一种高效提纯驴α1-AGP的方法。通过生物信息学在线软件分析驴α1-AGP的基本理化性质,并对其二、三级结构进行预测分析;用阳离子层析-凝胶过滤层析联用的方法对其进行纯化,经SDS-PAGE后用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption ionization-time offlight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS）进行鉴定。结果显示,驴α1-AGP由201个氨基酸组成,理论等电点（pI）为4.99,有5个潜在N-糖基化位点,亲水性总平均值（GRAVY）为-0.386;二级结构中α-螺旋和β-折叠有序出现,占比88.56%;利用GMQE值和QMEAN的z值验证三级结构预测所得模型在合理范围之内。阳离子交换层析-凝胶过滤层析纯化后得到50 mL蛋白液,SDS-PAGE后得到清晰蛋白条带,经MALDI-TOF-MS鉴定后于NCBI数据库检索,驴α1-AGP得分最高且远高于其他蛋白,证明驴α1-AGP为纯化后蛋白液中主要组分。本研究提出一种新的纯化鉴定驴α1-AGP方法,具有纯化率高、操作简便、所需样品少等优点,为驴α1-AGP的后续生物学研究和应用奠定了理论基础。 相似文献
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旨在探究马和驴血清蛋白质生物学特征,为马属动物种间生理特征比较和健康保障提供理论依据。本研究选取辽宁省大连市某集约化养殖场的9匹蒙古马和9头辽西驴,雌性,年龄4~10岁,均处于正常发情周期的间情期,健康无病、精神状态及采食状况良好,分别提供相同的饲养条件。采集马和驴各9份血清样品分别随机分成3组,每组内的3份血清样品均匀混合成1个生物学重复,各获得3个生物学重复的血清样品。利用Label-free蛋白质组学技术及生物信息学方法对马和驴的血清蛋白质组分进行比较研究,提取血清蛋白质,再对蛋白质进行酶解,液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）进行蛋白质组分分析,数据库检索分析马和驴血清样品中蛋白质表达情况,并应用生物信息学方法筛选马和驴血清差异关键调控蛋白质。结果显示,本研究共鉴定出361种蛋白质,其中,马血清中表达288种蛋白质,分子量范围为1.52~511.24 ku;驴血清中表达244种蛋白质,分子量范围为1.53~611.47 ku;共获得231种显著差异表达蛋白质（差异倍数≥1.5,P≤0.05）。差异表达蛋白质主要参与蛋白质激活、补体激活、免疫应答、凝血和脂蛋白氧化调控等生物学过程。显著富集的KEGG通路为补体和凝血级联,吞噬体,内质网蛋白质加工,抗原加工递呈,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸的代谢,癌症蛋白多糖等。通过差异蛋白互作分析显示,差异表达蛋白质紧密相连富集最为显著的功能模块主要为代谢途径、补体和凝血级联、吞噬体,HSP90AA1、HSPA8、APOD、APOM、SERPING1、MASP1、CALR、TUBA1B、TUBB等处在关系互作网的重要节点。马和驴在生理条件下的血清蛋白质组成特征存在一定差异,该研究为进一步揭示马属动物种间生理特征差异和有效保障健康提供数据支撑。 相似文献
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