结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6、CFP10基因的克隆、鉴定及其原核表达   总被引：3，自引：0，他引：3  

宫强  刘思国  王牟平  王春来  彭永刚  沈国顺 《中国兽医学报》2004,24(4):340-342

以人型结核分枝杆菌 H37RV株基因组 DNA为模板 ,应用 PCR法对 ESAT- 6和 CFP10基因进行扩增 ,产物经纯化后与载体 PMD18- T连接、转化及酶切鉴定 ,亚克隆到原核表达载体 PGEX- 6 P- 1,构建原核重组表达质粒 ,转化入大肠杆菌 BL2 1中 ,以 1mmol/L IPTG诱导 ,进行 SDS- PAGE电泳。结果表明 ,ESAT- 6和 CFP10基因表达的融合蛋白相对分子质量分别为 32 0 0 0和 36 0 0 0 ,与实测相符。重组结核杆菌分泌蛋白 ESAT- 6和 CFP10的成功表达为结核病诊断及重组疫苗的构建打下了基础  相似文献   

猪胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白(OMP)5′末端保守区基因的克隆、表达及其免疫活性研究     

刘思国  彭永刚  王牟平  王春来  宫强 《中国预防兽医学报》2004,26(6)

以猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型25-4株基因组DNA为模板,PCR方法扩增外膜蛋白(OMP)5′末端保守区基因片段(OMPc),酶切及核苷酸序列分析鉴定后,与原核表达载体质粒pGEX-6P-1进行连接,构建成重组表达载体pGEX-OM-Pc,转入大肠杆菌BL21中,以IPTG进行诱导,SDS-PAGE电泳分析发现,转化了重组质粒的菌株所表达的融合蛋白相对分子量为34 kD,与实际预测相符,命名为GST-OMPc.GST亲和层析柱进行纯化,ELISA方法对纯化蛋白进行检测.结果表明:纯化蛋白GST-OMPc能够与兔抗猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型的阳性血清反应.OMPc蛋白的成功表达为其功能的研究打下基础.  相似文献   

胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ毒素结构基因的原核表达以及重组蛋白的免疫原性分析   总被引：6，自引：1，他引：6  

王春来  刘思国  王牟平  彭永刚  宫强  孔宪刚 《中国预防兽医学报》2006,28(1):63-66

猪传染性胸膜肺炎（Porcine infectious pleuropneumonia）是由胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae，APP）引起的猪的一种呼吸道疾病。本实验以APP血清7型的一株现地分离株L25—4株为研究对象，对其分泌的ApxⅡ毒素的结构基因apxⅡA进行了全基因克隆和测序，并利用原核表达载体pGEX-6P-1在E．coli中进行了原核表达。表达产物以包涵体形式存在，包涵体蛋白经过洗涤后作为抗原用于Western—blotting免疫印迹实验，结果表明重组的ApxⅡA蛋白具有良好的免疫原性。  相似文献   

牛分枝杆菌特异性PCR检测方法的建立及初步应用   总被引：12，自引：0，他引：12  

刘思国  王春来  宫强  王牟平  彭永刚  张秀华  郭洋  郭设平  邵美丽 《中国预防兽医学报》2006,28(1):80-83

根据已发表的牛分枝杆菌的pncA的基因序列，设计和合成了一对可扩增294bp目的片段的引物，建立了特异性检测牛分枝杆菌的PCR方法。对牛分枝杆菌国际参考株和国内分离株成功扩增出294bp的特异性基因片段；对人结核分枝杆菌、副结核分枝杆菌、鸟胞内分枝杆菌和草分枝杆菌DNA的PCR扩增结果均为阴性。本PCR方法检测的敏感度可达到50pg。对10份牛分枝杆菌培养阳性和10份阴性样品的DNA分别进行了PCR检测，结果10份阳性样品中有9份样品为PCR扩增阳性，阳性符合率为90％（9／10）；而10份阴性样品则PCR扩增全部为阴性，阴性符合率为100％（10／10）。本方法可做为牛分枝杆菌的快速检测和流行病学调查的工具。  相似文献   

不同免疫程序新城疫抗体消长规律分析     

智海东  解生亮  闫丽辉  鞠妍  于向西  杨志  李娜  王牟平  孙建宏  陈洪岩 《黑龙江畜牧兽医》2009,(12)

新城疫一直是严重危害我国养禽业的重要疾病,疫苗免疫是预防该病的主要手段[1].新城疫的免疫主要以体液免疫应答为主,疫苗主要有弱毒疫苗和灭活疫苗两种,应用中通过优化两种疫苗的免疫程序获得高水平而且持久的抗体来减少新城疫对家禽的危害.  相似文献   

几种易与附红细胞体混合感染疾病的鉴别诊断     

于向前  张健  房良  王牟平 《畜牧兽医科技信息》2009,(7):88-89

猪附红细胞体(以下简称附红体)病已成为一种普通的传染病是由附红细胞体引起的一种以黄疸和贫血为主要特征的传染病,在无其它合并症发生的情况下,症状主要表现为高热,体温可达40～42℃,急性贫血,重度全身性黄疸,同时精神萎靡,食欲不振,可视粘膜发黄,耳尖.  相似文献   

芥菜型油菜自交亲和性变异分析     

杨杰  孙万仓  武军艳  魏文惠  郭秀娟  康艳丽  曾潮武  刘红霞  蒲媛媛  张俊杰  牟平  胡兴茂  韩宏 《西北农业学报》2009,18(2):131-135,140

以来自不同国家、不同地区的34份芥菜型油菜为试验材料,对芥菜型油菜自交亲和性进行了分析,结果表明,芥菜型油菜大部分为自交亲和类型,但芥菜型油菜的自交亲和性差异较大,亲和指数在0.25～9.73间.这种差异不仅存在于品种间,而且存在于亚种间.在34份参试材料中,2个品种表现为自交不亲和(0<亲和指数<1.00),14个品种表现为自交亲和(亲和指数>1),18个品种表现为高自交亲和(亲和指数>4.00).自交亲和性因地区而异,虽然我国有的芥菜型油菜品种的自交亲和性较高,但是整体存在较大的差异,有自交亲和品种,也有自交不亲和品种.芥菜型油菜是自交亲和植物,自交亲和材料中也有自交不亲和类型,因而通过定向培育可育成自交不亲和系,对进一步利用杂种优势、大量筛选找到优良杂交组合并进行杂交种的生产具有重要的意义.  相似文献   

ELISA检测兰州不同动物粪便中轮状病毒抗原及临床意义     

田风林  陈顺雄  王银平  赵学华  牟平  张学军  祁生贵  周彦龙  魏锁成 《中国奶牛》2011,(22):52-55

为探讨动物轮状病毒检测的临床价值及本地轮状病毒在不同动物中的流行情况,本研究以秋冬季腹泻的动物为研究对象进行采样,应用轮状病毒单克隆抗体检测其抗原的方法,检测粪便中的轮状病毒。在进行牛、羊、犬粪便轮状病毒检测中发现犬的阳性率最高,其次是牛和羊。表明本地的轮状病毒感染主要集中在幼犬中。本试验为今后动物轮状病毒在临床应用中的检测及动物轮状病毒检测试剂盒的研制等作以参考。  相似文献   

喹诺酮类抗菌药物的安全性评价     

贺丹  李一经  王牟平 《畜牧兽医科技信息》2013,(7):14-15

喹诺酮类,又称吡酮酸类或吡啶酮酸类,主要作用于革兰阴性菌的抗菌药物,是一类合成抗菌药。喹诺酮类药物存在一系列的不良反应,如胃肠道反应、光毒性、过敏反应、血液系统反应、肝肾功损害及软骨损伤等。如果不能正确合理使用,将会大大降低其药效,影响临床应用,给患者带来不必要的痛苦和损害。为减少喹诺酮类药物的不良反应,本文予以安全用药提示。  相似文献   

牛、羊腐蹄病研究概况     

童申军  ;王牟平  ;张传东  ;祝东彬 《预防兽医学进展》2008,(8):5-6

腐蹄病（Footrot）是由坏死梭杆菌（Fusobactefium necrophorum，F．necrophorum）和节瘤拟杆菌（Baeteroides nodosu，B．nodosus）协同感染引起反刍动物趾间皮肤及深层软组织的一种高度接触性传染病？以动物蹄部组织的化脓坏死性分解、腐败恶臭和角质形成受到破坏为主要特征。  相似文献