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【目的】构建新型猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)乳酸菌活菌疫苗载体。【方法】应用DNA重组技术将嗜酸乳杆菌S-层蛋白(SLP)基因及PEDV S2基因B细胞表位(EpitopeS2)融合基因(SLP-EpitopeS2)克隆到乳酸杆菌表达载体pTRK892中,构建重组载体pTRK-SLP-EpitopeS2,通过电转化方法将重组质粒导入副干酪乳杆菌中,获得重组副干酪乳杆菌。分别用SDS-PAGE、Western blotting和免疫荧光试验(IFA)鉴定目的蛋白在副干酪乳杆菌中的表达。【结果】PCR结果显示,成功扩增出大小为1 400 bp的目的条带,与插入融合基因大小一致,双酶切结果出现大小分别为1 400和4 700 bp的2条带,基因测序结果显示无碱基缺失和突变等,从而确定重组质粒pTRK-SLP-EpitopeS2构建正确。SDS-PAGE、Western blotting结果显示,在48 ku处出现与理论值大小一致的目的蛋白条带,表明融合基因SLP-EpitopeS2在副干酪乳杆菌中得到有效表达。IFA结果显示,与对照组副干酪乳杆菌相比,重组副干酪乳杆菌均能被激发出特异性绿色荧光信号,与高浓度氯化锂(LiCl)洗脱下来的菌体膜蛋白样品补充鉴定试验结果相吻合。表明融合蛋白SLP-EpitopeS2可能在副干酪乳杆菌的菌体表面表达。【结论】成功构建了PEDV EpitopeS2及嗜酸乳杆菌SLP嵌入型融合表达载体pTRK-SLP-EpitopeS2,为乳杆菌活菌载体疫苗相关研究奠定了基础。 相似文献
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鄂尔多斯市某羊场发生羊不明原因死亡的疫情,为了寻找病因并制定治疗方案和防治措施,本研究通过临床检查和实验室病理及分子生物学诊断方法确诊并提供治疗方案。试验以病死羊为试验材料,首先对其进行临床检查,包括尸体剖检和病理组织学采样。随后,采用常规无菌操作方法取回其脑组织至实验室,进行触片、染色镜检和分离细菌。病死羊剖检发现,肺脏淤血实变、心外膜点状出血、肾脏质地变软如泥、脑严重水肿等。选取脑组织制备病理切片,在镜下可观察到大脑皮质中性粒细胞浸润及中性粒细胞性血管管套现象;深层脑组织进行触片染色后,在镜下可见单个或成对排列的革兰氏阳性球菌,并分离出1株可疑细菌,命名为NEF1;采用Mega 6.0生物软件依据该分离株的16S rRNA基因而绘制的遗传进化树分析结果显示,分离株NEF1与屎肠球菌的国内分离株（MT197247.1）和伊朗分离株（KM495939.1）聚类在同一分支上,而与GenBank中其他屎肠球菌参考菌株遗传距离较远;药物敏感性试验结果表明,分离株NEF1只对环丙沙星呈现中度敏感,而对青霉素等其他选定的抗生素类药物均呈现明显的耐药性。本试验从病死羊脑组织中成功分离并鉴定了1株屎肠球菌NEF1,同时通过药物敏感性试验方法筛选出来的敏感药物有效控制了该病在发病羊场的进一步蔓延,为该地区羊细菌性疾病的有效防治提供了行之有效的试验数据。 相似文献
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