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为了解滑液支原体（Mycoplasma synoviae，MS）甘油磷酸二酯磷酸二酯酶（glycerophosphodoester phosphodiesterase，GDPD）的生物学功能，本试验参照GenBank中MS WVU1853株序列设计特异性引物，应用PCR技术扩增获得MS WVU1853株GDPD基因，在测序及序列分析的基础上将其克隆至pET-28a（+）质粒构建原核表达载体pET-GDPD，转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞后经IPTG诱导表达，纯化表达产物并分析其酶促活性，进而制备其多克隆抗体，应用间接ELISA和Western blotting检测其免疫原性并分析其在MS内的分布。结果表明，MS WVU1853株GDPD基因CDS全长726 bp，编码242个氨基酸，重组蛋白分子质量约为28 ku。酶促活性检测表明，重组蛋白可催化对硝基苯磷酸二钠（pNPP）转化为对硝基苯酚，且其作用的最适pH为9.0，最佳温度为37℃，Pb2+具有较强的抑制作用，而Ca2+对其具有较强的促进作用。间接ELISA及Western blotting检测结果表明，MS GDPD具有良好的免疫原性，可刺激新西兰兔产生高水平的抗体，血清效价高达1：160000；亚细胞定位结果表明，MS GDPD在细胞膜和细胞浆内均有分布，但在细胞膜的含量略高于细胞浆。本研究结果为探究MS GDPD生物学功能提供了一定的参考依据。 相似文献
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为了解滑液支原体(Mycoplasma synoviae,MS)甘油磷酸二酯磷酸二酯酶(glycerophosphodoester phosphodiesterase,GDPD)的生物学功能,本试验参照GenBank中MS WVU1853株序列设计特异性引物,应用PCR技术扩增获得MS WVU1853株GDPD基因,在测序及序列分析的基础上将其克隆至pET-28a(+)质粒构建原核表达载体pET-GDPD,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞后经IPTG诱导表达,纯化表达产物并分析其酶促活性,进而制备其多克隆抗体,应用间接ELISA和Western blotting检测其免疫原性并分析其在MS内的分布。结果表明,MS WVU1853株GDPD基因CDS全长726 bp,编码242个氨基酸,重组蛋白分子质量约为28 ku。酶促活性检测表明,重组蛋白可催化对硝基苯磷酸二钠(pNPP)转化为对硝基苯酚,且其作用的最适pH为9.0,最佳温度为37℃,Pb~(2+)具有较强的抑制作用,而Ca~(2+)对其具有较强的促进作用。间接ELISA及Western blotting检测结果表明,MS GDPD具有良好的免疫原性,可刺激新西兰兔产生高水平的抗体,血清效价高达1∶160 000;亚细胞定位结果表明,MS GDPD在细胞膜和细胞浆内均有分布,但在细胞膜的含量略高于细胞浆。本研究结果为探究MS GDPD生物学功能提供了一定的参考依据。 相似文献
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