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鹅源新城疫病毒单克隆抗体的研制及其与不同NDV毒株的反应性 总被引:6,自引:0,他引:6
以鹅源新城疫病毒(NDV)作为免疫原免疫BALB/c小鼠,获得了5株具有HI特性的单克隆抗体,分别命名为2G5、3A4、385、6B1和8C5,其腹水HI效价分别为2^14、2^12、2^9、2^15和2^8。竞争ELISA结果表明,2G5、3A4、385和6B1在HN蛋白上所针对的表位属于同一抗原区,而8C5针对的表位为另一抗原区。将上述5株单抗与不同来源的NDV进行了HI排谱试验。结果显示,同一抗原区4株单抗的反应谱比较一致,而与另一抗原区单抗8C5的反应谱明显不同。5株单抗与鹅源NDV毒株的反应性较强,而与鸽源NDV毒株的反应性较弱。这5株单抗用HRP标记后再与不同单抗进行交叉夹心ELISA,得到了一个新的系统(2G5—8C5)。用该系统对NDV分离株做排谱试验。结果显示,该系统与鹅源NDV分离株的反应性较好,表明所建立的新系统可用于鹅源NDV的检测。 相似文献
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鸡痘病毒通用高效表达载体的构建及其初步应用 总被引:4,自引:0,他引:4
利用分子克隆技术对本室构建的高效鸡痘病毒表达载体 p1 1 S进行改造 ,在其人工合成禽痘病毒 ( FPV)强启动子 Ps的下游引入含 7个单一酶切位点的多克隆位点 ( MCS) ,构建了便于外源基因插入的通用性更强的高效单表达载体 p N1 1 S。然后将 FPV早晚期启动子 PE/ L 及其启动的鹅源新城疫病毒 NDV ZJ1株的 F基因一并插入 p N1 1 S中 ,使PE/ L 与 Ps反向串联 ,从而构建出 1个含 NDV ZJ1株 F基因的重组 FPV高效双表达载体 p N1 1 SEF,其 MCS可以用于插入其他外源基因。在此基础上 ,将 NDV ZJ1株的 HN基因插入 p N1 1 SEF的 Ps启动子下游的 MCS中 ,构建了共表达 NDV ZJ1株 F和 HN基因的重组 FPV双表达载体 p N1 1 SEFHN。将 p H1 1 SEFHN质粒 DNA与 FPV2 82 E4株共转染 CEF,得到共表达 NDV ZJ1株和 HN基因的重组 FPV,间接免疫荧光实验初步证明外源基因得到了较好的表达。表明所构建的通用高效 FPV表达载体有利于高效基因工程活载体疫苗的研制 ,具有广阔的应用前景 相似文献
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新城疫(ND)是由新城疫病毒(Newcastle Disease Virus,NDV)引起的一种急性、高度致死性的禽类传染病,被国际兽疫局(Office International des Epizooties,OIE)列为对畜禽危害最大的A类传染病之一。自1926年从印度瓜哇分离到NDV以来,在世界上已发生了4次ND大流行,造成了巨大的经济损失。ND也是一直严重危害着我国的养禽业的疫病之一,但由于疫苗的广泛使用,此病已基本上得到了较好的控制。近年来ND的流行出现了以下新特点:1非典型新城疫发生普遍由于几乎所有的鸡场都使用ND疫苗,临床上典型的ND病例大大减少。自上世纪九十年代初以… 相似文献
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以抗H5亚型禽流感病毒(AIV)JSD株鸡胚尿囊液免疫8周龄BALB/c小鼠,第4次免疫后取其脾淋巴细胞与SP2/0-Ag-14骨髓瘤细胞融合,用血凝抑制试验(HI)对杂交瘤进行筛选,经3次亚克隆后,共获得4株针对血凝素(HA)蛋白的特异性单克隆抗体,分别命名为:2D2、2C8、3D3和3D11。该4株单抗的小鼠腹水的HI效价在2^13~2^15,ELISA效价为1.2×10^5~5.1×10^5。亚类鉴定结果表明,2D2和3D11属于IgG1,2C8属于IgG3,3D3属于IgG2a亚类;特异性试验结果表明,上述4株单抗仅与H5 AIV毒株发生特异性反应,而不与其他亚型AIV以及NDV、IBV和EDSV-76等病毒反应;鸡胚中和试验结果显示,4株单抗均具有较好的中和活性。本研究成功获得4株针对H5 AIVHA蛋白的特异性单抗,为临床H5 AIV的血清学监测及鉴定提供了必需的试剂。 相似文献
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新城疫病毒Ulster株经SPF鸡胚增殖和超速离心纯化后,以酚-SDS法提取其基因组RNA,作为反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的模板。根据其已发表的F和HN基因核苷酸序列,合成一个长为30mer的寡核苷酸(位于F基因内)和一对分别长为28、30mer的寡核苷酸(位于HN基因两侧)分别作为反转录引物和PCR引物。扩增反应产物经琼脂糖凝胶电泳分析,出现一条长为1.93kb的特异性条带,与预期相符。并将此特异性条带克隆入质粒载体pGEM-3Zf(+)中,并经限制性核酸内切酶分析(REA)。RT-PCR和REA结果证实其为新城疫病毒Ulster株的血凝素-神经氨酸酶基因。 相似文献