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【目的】 探究Ⅰ亚群禽腺病毒（Fowl adenovirus,FAdV）分离株GDDL-4（FAdV-4）、GDB3-8a （FAdV-8a）、GDT08-8b （FAdV-8b）、GDWYT-11（FAdV-11）对SPF雏鸡的致病性,进而制定更加有效的防控措施。【方法】 设立4个攻毒组（GDDL-4、GDB3-8a、GDT08-8b、GDWYT-11）及对照组,攻毒组选择腿部肌内注射接种0.2 mL 105 TCID50病毒液,对照组接种等体积PBS。接种后观察SPF雏鸡的临床症状、剖检病变及组织病理学变化,同时检测其排毒量和病毒载量。【结果】 所有攻毒组鸡均表现为精神沉郁、消瘦、扎堆等,病理剖检以严重心包积液-包涵体肝炎综合征病变为主,其中GDDL-4组症状最为严重,死亡率最高达85%,总体死亡率在0~85%之间。排毒分析结果发现,GDDL-4和GDB3-8a组出现高滴度排毒（≥104拷贝/μL）,GDT08-8b和GDWYT-11组仅能检测到低滴度（≤103拷贝/μL）排毒。器官指数表明,除GDT08-8b组与对照组无明显差异外,其余攻毒组均能造成器官不同程度的肿大或萎缩。病理组织学切片显示,肝脏、肾脏、法氏囊的正常结构被破坏,可见肝细胞有大量淋巴细胞浸润、肾间质充血出血、法氏囊淋巴细胞坏死等。病毒载量分析结果显示,GDDL-4与GDWYT-11组在肝脏组织中病毒滴度最高,而GDB3-8a与GDT08-8b组在十二指肠中病毒滴度最高。【结论】 Ⅰ亚群FAdV的死亡率高,4株分离株均可导致雏鸡肝脏出现包涵体肝炎的病理变化,均可反复排毒,且分离株对不同的组织器官有不同的亲嗜性,在肝脏与十二指肠等组织中的病毒载量最高。 相似文献
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本研究旨在克隆、表达鸭干扰素刺激基因（interferon-induced proteins with tetratricopeptide repeats 5,IFIT5）并制备其多克隆抗体。根据GenBank公布的绿头鸭IFIT5（登录号：KF956064）序列设计特异性引物,PCR扩增获得鸭IFIT5基因,并构建原核表达重组质粒pET-30a-IFIT5和pET-32a-IFIT5及真核表达重组质粒pcDNA3.1-IFIT5。原核表达获得鸭IFIT5重组蛋白后,进行SDS-PAGE分析,并利用镍柱亲和层析方法对重组蛋白进行纯化。以纯化的鸭IFIT5重组蛋白为免疫原制备兔抗鸭IFIT5多克隆抗体。利用间接ELISA测定多克隆抗体效价、用Western blotting鉴定其特异性;将真核表达重组质粒pcDNA3.1-IFIT5转化BHK21细胞,通过间接免疫荧光法鉴定多克隆抗体的反应性。结果表明：目的蛋白主要以包涵体的形式存在;制备的兔抗鸭IFIT5多克隆抗体效价达1：49 600,可特异性识别鸭IFIT5重组蛋白,间接免疫荧光试验则表明纯化的多克隆抗体可特异性识别BHK21瞬时真核表达的鸭IFIT5蛋白。综上,成功克隆了鸭干扰素刺激基因IFIT5,制备的兔抗鸭IFIT5多克隆抗体可用于鸭IFIT5蛋白的检测,可为鸭IFIT5蛋白的后续研究提供材料支撑。 相似文献
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试验旨在建立新型鸭呼肠孤病毒（NDRV）σC蛋白的原核表达系统,制备σC蛋白的多克隆抗体,并评估所制备抗体的效价。通过RT-PCR方法扩增获得NDRV DH13株σC基因,连接至pET-30a（+）及pET-32a（+）载体中,构建原核表达质粒,并将其转化大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞,经IPTG诱导获得两种σC重组蛋白,经SDS-PAGE分析蛋白表达形式。利用切胶方法纯化不含His标签σC重组蛋白,利用Ni-NTA柱纯化含His标签σC重组蛋白。以纯化的无His标签蛋白为免疫原免疫兔子获得兔抗σC多克隆抗体,Western blotting分别使用抗His标签的单克隆抗体和NDRV-σC蛋白阳性血清两种一抗评估抗体的特异性,间接ELISA（iELISA）检测抗体滴度。SDS-PAGE结果显示获得34和37 ku两种重组蛋白,且均得到高效表达。Western blotting结果显示制备的多克隆抗体具有良好的特异性,所制备的抗体与σC蛋白亲和力较好。间接ELISA检测结果显示其效价达1：25 600。本试验成功构建σC蛋白的原核表达系统,制备的σC蛋白多克隆抗体为深入研究σC蛋白的生物学功能及开展NDRV基因工程疫苗的研发奠定了基础。 相似文献
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【目的】监测广东地区 H9N2 亚型禽流感病毒（Avian Influenza Virus, AIV）的遗传变异和分子进化趋势，为我国 H9N2 亚型 AIV 的防控提供参考。【方法】对 2022 年广东地区 3 株 H9N2 亚型 AIV 的 HA 和 NA 基因进行扩增、克隆、测序，使用 DNAStar、PhyloSuite 软件进行序列拼接和比对，再运用 MEGA、Megalign、 NetNGlyc 1.0 Server 等软件，对其核苷酸和氨基酸序列进行遗传进化、核苷酸同源性分析，以及受体结合、蛋白活性、耐药性和糖基化等关键位点分析。【结果】系统发育树和核苷酸同源性分析结果显示，3 株分离株的 HA 和 NA 基因分别属于 h9.4.2.5 分支和 1 分支，与早期毒株的核苷酸同源性分别为 81.6%~91.7% 和 88.2%~91.2%，分别命名为 h9.4.2.5c 分支和 1.2 分支；核苷酸和氨基酸序列分析发现，HA 裂解位点为 PSRSSR ↓ GLF，受体结合位点产生 I155T、H183N、A190T/V、T212I、Q226L、Q227M 突变，糖基化位点产生 218N 非糖基化和新增 313N 糖基化突变；NA 茎部缺失 187~195 位 9 个核苷酸（ACAGAGATA），导致缺失 63~65 位 3 个氨基酸（TEI）；NA 红细胞结合位点产生 K/E/S368N、D369N 突变，与 NA 蛋白活性，耐药性的相关位点 E119、D151、R152、R224、E276、R292、R371 均未发生突变。【结论】 2022 年广东地区分离的 3 株 H9N2 亚型 AIV 已经进化成新的亚群，部分突变可能增强了对哺乳动物的适应性，且其抗原性发生改变，但尚未获得对奥司他韦和扎那米韦等抗流感病毒药物的耐药性。 相似文献
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【目的】建立禽腺病毒血清 2 型（FAdV-2）的发病模型，为评价 FAdV-2 的免疫原性和疫苗有效性提供参考。【方法】对疑似禽腺病毒感染的样品进行分离鉴定，对分离株 Fiber 基因和 Hexon 基因序列进行遗传演化分析，使用 DNAStar 和 MEGA7.0 软件对分离株和其他 FAdV 代表株进行核苷酸和氨基酸同源性比较。在确定分离到的病毒为 FAdV-2 后，通过动物实验分析分离株在不同感染途径和不同感染剂量下对 6 周龄 SPF鸡的致病性，筛选出建立 FAdV-2 血清型发病模型的最佳感染方式和最佳感染剂量。【结果】从发病鸡组织样品中成功分离得到 1 株 FAdV-2 血清型毒株，命名为 KM 株。遗传演化分析表明，KM 株和 GX01 株同属于禽腺病毒Ⅰ群 D 种中的 FAdV-2 血清型；同源性分析结果显示，KM 株和 GX01 株的 Fiber 基因和 Hexon 基因核苷酸序列同源性分别为 98.9% 和 99.3%，推导出氨基酸同源性分别为 98.9% 和 98.8%。KM 株静脉注射感染途径的致病性高于肌肉注射，试验鸡出现明显的心包积液 - 肝炎综合征；KM 株发病模型的感染途径为静脉注射，感染剂量为 108.0 TCID50，感染后鸡群死亡率为 50%，剖检病死鸡可见明显的病理变化，鸡群感染后 1 d 泄殖腔排毒阳性。【结论】首次验证了 FAdV-2 能引发心包积液 - 肝炎综合征，建立了 FAdV-2 感染 SPF 鸡的发病模型，可为药物研发和疫苗评价提供一定参考，将有效预防和减少 FAdV-2 传播。 相似文献
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为了制备抗非洲猪瘟病毒I177L蛋白的多克隆抗体，根据HLJ/2018株的I177L序列，设计引物，扩增带有His标签序列的I177L序列，并将其插入pMAL-c5x原核表达载体中，转化至Rosetta(DE3)感受态细胞中，经IPTG诱导表达和切胶纯化后，用Xa蛋白酶因子去除重组蛋白中的MBP标签。将处理后的I177L蛋白免疫新西兰大白兔，制备多克隆抗体。结果显示，在37℃、0.6 mmol/L IPTG条件下，诱导5 h后，重组MBP-I177L蛋白表达量最高，蛋白分子质量大小约为67 ku,与预期大小相符；重组蛋白以可溶性表达为主；多克隆抗体经Western blot、间接ELISA及IFA试验结果显示，抗体效价为1∶128 000,并且该抗体能特异性识别I177L蛋白。 相似文献
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