程序性细胞死亡因子10抑制Ⅰ型干扰素表达并促进FMDV复制     

曾宗波  马旭升  罗志宽  齐亚银  郑海学 《畜牧兽医学报》2021,52(2):450-459

旨在探究宿主蛋白程序性细胞死亡因子10（programmed cell death factor 10，PDCD10）通过抑制Ⅰ型干扰素表达进而促进口蹄疫病毒（foot-and-mouth disease virus，FMDV）的复制。首先，本研究验证了过表达和沉默PDCD10对FMDV复制的影响，接着利用双荧光素酶报告系统探究PDCD10对Ⅰ型干扰素信号通路活化的影响，最后，利用实时荧光定量PCR探究PDCD10对Ⅰ型干扰素通路下游刺激基因（IFN-stimulated genes，ISGs）转录的影响。结果表明，过表达PDCD10显著促进FMDV的复制，沉默PDCD10显著抑制FMDV的复制。与对照相比，过表达PDCD10后感染仙台病毒（Sendai virus，SeV）的细胞培养液上清液显著促进FMDV复制，进一步，PDCD10显著抑制SeV诱导的IFN-β启动子以及NF-κB的激活且呈剂量依赖性，并且PDCD10负调控Ⅰ型干扰素通路信号分子转录，最后还发现PDCD10负调控Ⅰ型干扰素下游ISGs转录。本研究结果为深入探究PDCD10在抗病毒天然免疫中的作用积累了资料。  相似文献   

猪水泡病病毒结构蛋白基因的克隆及其蛋白二级结构和淋巴细胞表位的预测     

郑海学刘湘涛  尚佑军刘光清白兴文  罗静初谢庆阁 《中国兽医科技》2005,35(11):843-850

以免疫信息学和反向疫苗学为理论根据，利用RT-PCR法获得了猪水泡病病毒（SVDV）HK／70株的基因组序列并测序，应用生物信息学相关软件和方法，对SVDV结构蛋白的二级结构的不同方面及其抗原特异性淋巴细胞表位进行了预测，综合评价了SVDV结构蛋白的抗原特异性细胞表位，并计算出一些潜在的抗原位点。结果表明，VP1蛋白含有的细胞优势抗原表位最多，但其他结构蛋白也含有抗原特异性淋巴细胞表位，有的甚至有可能成为优势抗原表位或对优势抗原表位有协同作用。  相似文献   

猪瘟病毒E2基因抗原结构域A、B、C、D区在大肠杆菌中的表达   总被引：4，自引：0，他引：4  

张永国  刘湘涛  韩雪清  胡建和  张彦明  谢庆阁 《畜牧兽医学报》2004,35(2):182-185

采用PCR技术扩增出猪瘟病毒E2基因抗原结构域A、B、C、D区并克隆于PGEM-T easy载体上，测序结果表明插入的为猪瘟病毒E2基因抗原结构域，切出目的基因，将目的基因克隆到表达质粒pProEX—HTb中，获得重组质粒经PCR、酶切和序列分析鉴定E2基因抗原结构域插入的位置、大小和读码框均正确，SDS—PAGE检测表明受体菌经IPTG诱导后能表达E2基因抗原结构域蛋白，Westernblot检测表明受体菌诱导表达E2基因抗原结构域蛋白可与猪瘟阳性血清发生特异性反应。  相似文献   

猪瘟病毒及其全长cDNA在猪肾细胞中增殖表达特性的比较研究   总被引：1，自引：2，他引：1  

田宏  张彦明  林彤  刘湘涛  胡建和  吴锦艳  张淼涛  谢庆阁 《畜牧兽医学报》2005,36(10):1038-1042

以猪瘟C-株弱毒疫苗株、经典强毒石门株和C-株全长cDNA为试验材料，以免疫荧光技术为主；结合ELISA和RT-PCR检测技术，对其在培养细胞中的增殖特性和表达规律进行了比较研究。同时筛选猪瘟病毒及其全长cDNA的敏感细胞，探索其增殖表达规律，以便为猪瘟病毒反向遗传操作提供技术方法和可操作的条件。  相似文献   

猪瘟病毒化学发光抗体检测方法的建立与应用     

麻园  石正旺  罗俊聪  杨波  王丽娟  万颖  宋锐  曹丽艳  周改静  田宏  郑海学  陈轶霞 《畜牧兽医学报》2021,52(6):1744-1752

旨在建立猪瘟病毒（CSFV）化学发光抗体检测方法,本研究以CSFV E2蛋白作为包被抗原,山羊抗猪IgG-HRP抗体作为酶标抗体,鲁米诺为底物溶液,优化检测方法,成功建立CSFV化学发光抗体检测方法。该方法能在室温20 min内完成对CSFV抗体血清特异性检测,灵敏度与商品化CSFV抗体检测试剂盒相当,且与A型口蹄疫病毒、O型口蹄疫病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒、塞内卡病毒、非洲猪瘟病毒抗体阳性血清均无交叉反应;批内变异系数为1.80%~6.88%,批间变异系数为1.11%~9.18%,重复性好。通过对152份田间猪血清样品的检测并与商品化CSFV抗体检测试剂盒检测结果进行比较,其Kappa值为0.929,具有高度的一致性。综上表明,本研究建立的CSFV化学发光抗体检测方法特异性强、灵敏性高、重复性好、简单快速,可应用于临床血清CSFV抗体的检测。  相似文献   

条件性敲除D1133L基因的重组非洲猪瘟病毒的构建及增殖特性     

张婷  冯涛  杨金柯  郝雨  杨行  张大俊  史喜绢  闫文倩  陈玲玲  刘湘涛  郑海学  张克山 《畜牧兽医学报》2023,54(2):706-714

前期研究初步表明非洲猪瘟病毒(ASFV)编码的D1133L基因对ASFV复制至关重要,本研究拟进一步探究D1133L在ASFV复制中的作用。利用同源重组技术结合大肠杆菌lac阻遏操作系统实现条件性敲除D1133L基因,以pUC118为骨架重组转移载体ASFVΔi130,将重组转移载体转染骨髓源巨噬细胞(BMDMs),以ASFV CN/GS/2018为亲本毒株感染BMDM,在β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)存在的条件下,经绿色荧光和PCR鉴定,获得条件性敲除D1133L重组毒株vD1133Li。利用荧光显微镜观察该重组毒株与亲本毒株在猪肺泡巨噬细胞(PAMs)中的复制差异,利用qPCR技术比较重组病毒与亲本毒株的复制差异,分析vD1133Li在无IPTG情况下回补D1133L蛋白后与在IPTG诱导情况下的复制差异。结果显示：本研究成功构建了条件性敲除D1133L的ASFV重组病毒vD1133Li,重组毒株不表达D1133L,在IPTG诱导下复制能力显著低于亲本毒株;在稳定表达D1133L的MA-104细胞系中,vD1133Li复制能力恢复。综上所述,D1133L基因对于ASFV复制至关重...  相似文献   

猪瘟病毒及其致病机制研究进展   总被引：1，自引：0，他引：1  

田宏刘湘涛  张彦明林彤吴锦艳  谢庆阁 《动物医学进展》2007,28(B08):27-30

猪瘟（CSF）是猪的一种高度接触性传染病，该传染病可分为急性、亚急性、慢性、非典型性和不明显型。急性CSF由强毒株引发，一般导致高发病率和死亡率，而弱毒病毒感染则表现不明显。由于疫苗的广泛应用，有效地控制了猪瘟的大流行，减少了急性死亡。但从20世纪80年代以后，临床症状不典型且病程变长的非典型性猪瘟（或慢性猪瘟）成为该病的主要发生形式，持续感染普遍存在，疫苗的预防效果明显下降，使猪瘟防制遇到了新的困难。以目前人类对猪瘟的认识水平，尚难以从分子水平解释这一新变化的成因，这是因为对猪瘟病毒致病机理及其分子基础的认识深度不够。就此，文章综述了猪瘟及猪瘟病毒研究进展，主要涉及CSFV生物学特性、致病机制及其防控，希望能为猪瘟防控提供新的思路和对策。  相似文献   

猪水疱病病毒致病和免疫的分子基础     

孙世琪  郭慧琛  刘湘涛  谢庆阁 《畜牧市场》2009,(11):23-25

猪水泡病病毒（Swinevesiculardiseasevirus，SVDV）属于小RNA病毒科（Picornaviriclae）肠道病毒属（Enterovirus），其抗原特性与柯萨奇病毒B5（CoxsackievirusB5，CVB5）关系密切，被认为是CVB5的一个猪变种或亚种。SVDV只有一个血清型，但对其分离株进行系统发生分析可进一步分为4个抗原群或基因群。  相似文献   

猪瘟病毒NS3蛋白在真核细胞中的表达与定位     

宋江伟  田宏  吴锦艳  陈妍  尚佑军  刘湘涛 《西北农业学报》2014,23(8):16-19

为研究与猪瘟病毒NS3蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,采用PCR方法获得NS3基因,将其定向克隆至pCMV-Myc真核表达载体,经酶切鉴定及序列测定分析,将鉴定为阳性重组表达质粒命名为pMycNS3。采用脂质体介导法将pMyc-NS3转染至PK-15细胞和293T细胞,Western blot和间接免疫荧光检测目的蛋白的表达。结果表明,成功构建重组表达质粒pMyc-NS3,Western blot表明,NS3蛋白在PK-15细胞和293T细胞中均得到表达,NS3在PK-15和293T细胞质中呈弥散性分布。说明,成功构建的猪瘟病毒NS3基因与Myc融合表达质粒,为验证NS3蛋白与宿主细胞蛋白相互作用奠定基础。  相似文献   

我国O型Mya-98口蹄疫病毒流行情况与毒株分析     

何继军  杨亚民  马维民  尚佑军  吕律  郑海学  靳野  郭建宏  刘在新  刘湘涛 《中国动物检疫》2014,31(5):45-51

  相似文献