猪传染性猪胸膜肺炎APXⅣA毒素特征的研究进展     

李敏  姜国彦  彭永刚  刘思国  沈国顺 《畜牧兽医科技信息》2004,(9)

猪胸膜肺炎放线杆菌是引起猪传染性猪胸膜肺炎(APP)的病原菌.猪传染性猪胸膜肺炎是猪的一种重要的呼吸道疾病,发生在多数养猪国家,其重要性在于本病能引起猪的死亡,并对各国的经济造成了巨大的损失.因此,研究者对该病及其病原菌作了广泛而深入的研究,尤其近几年在分子水平对该病原菌的研究取得了可喜进展,对一些致病因子基因的研究给该病的防治与治疗带来了许多帮助.  相似文献   

结核分枝杆菌分泌蛋白ESAT-6、CFP10基因的克隆、鉴定及其原核表达   总被引：3，自引：0，他引：3  

宫强  刘思国  王牟平  王春来  彭永刚  沈国顺 《中国兽医学报》2004,24(4):340-342

以人型结核分枝杆菌 H37RV株基因组 DNA为模板 ,应用 PCR法对 ESAT- 6和 CFP10基因进行扩增 ,产物经纯化后与载体 PMD18- T连接、转化及酶切鉴定 ,亚克隆到原核表达载体 PGEX- 6 P- 1,构建原核重组表达质粒 ,转化入大肠杆菌 BL2 1中 ,以 1mmol/L IPTG诱导 ,进行 SDS- PAGE电泳。结果表明 ,ESAT- 6和 CFP10基因表达的融合蛋白相对分子质量分别为 32 0 0 0和 36 0 0 0 ,与实测相符。重组结核杆菌分泌蛋白 ESAT- 6和 CFP10的成功表达为结核病诊断及重组疫苗的构建打下了基础  相似文献   

猪胸膜肺炎放线杆菌外膜蛋白(OMP)5′末端保守区基因的克隆、表达及其免疫活性研究     

刘思国  彭永刚  王牟平  王春来  宫强 《中国预防兽医学报》2004,26(6)

以猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型25-4株基因组DNA为模板,PCR方法扩增外膜蛋白(OMP)5′末端保守区基因片段(OMPc),酶切及核苷酸序列分析鉴定后,与原核表达载体质粒pGEX-6P-1进行连接,构建成重组表达载体pGEX-OM-Pc,转入大肠杆菌BL21中,以IPTG进行诱导,SDS-PAGE电泳分析发现,转化了重组质粒的菌株所表达的融合蛋白相对分子量为34 kD,与实际预测相符,命名为GST-OMPc.GST亲和层析柱进行纯化,ELISA方法对纯化蛋白进行检测.结果表明:纯化蛋白GST-OMPc能够与兔抗猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型的阳性血清反应.OMPc蛋白的成功表达为其功能的研究打下基础.  相似文献   

猪链球菌蛋白表面展示系统的构建及展示蛋白的初步观察     

黄萌萌  刘冉  陈平  朱金鲁  卫东  谢芳  李刚  刘思国  张跃灵 《中国预防兽医学报》2020,(2):105-113

为构建猪链球菌(Streptococcus suis)蛋白表面展示系统,本研究通过序列分析,确定猪链球菌的LPxTG蛋白及其信号肽(SP)和胞壁锚定基序(CWA),通过PCR扩增Peno-SP、GFP、CWA的DNA片段并融合,构建强启动子Peno控制表达编码SP-GFP-CWA融合蛋白的DNA片段,将该重组DNA片段连接pSET2载体,获得蛋白表面展示质粒,转化猪链球菌,构建得到以GFP为报告蛋白的猪链球菌蛋白表面展示系统。结果显示,利用猪链球菌的10个LPxTG蛋白及其SP和CWA序列,构建了10个含有Peno-SP-GFP-CWA融合片段的重组pSET2表面蛋白展示质粒pSsPSD1至pSsPSD10,分别转化猪链球菌05ZYH33,PCR鉴定显示其中7个转化猪链球菌。采用western blot初步检测其展示蛋白,结果显示,7个转化阳性菌株均能有效表达GFP蛋白,以成熟GFP条带为指标,均表现出了一定的外源GFP表面展示水平,分别命名为SsPSD1、SsPSD2、SsPSD4、SsPSD7-SsPSD10,其中SsPSD1、SsPSD4、SsPSD8和SsPSD9表面展示水平相对较好,在猪链球菌表面展示外源蛋白方面具有很好的潜力。本研究首次尝试建立猪链球菌蛋白表面展示系统,为猪链球菌表面递呈外源蛋白或抗原提供了新的策略。  相似文献   

东北地区奶牛乳房炎表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌的分子流行病学及耐药性研究     

董志民  张万江  刘琪  卢中冶  王秋东  华欣  韩吉雨  宋丽华  刘思国 《中国预防兽医学报》2016,(4):307-311

为调查表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌在东北地区的流行病学情况和耐药性,本研究对来自东北地区3个大型奶牛场采集的330份奶样进行葡萄球菌的分离、鉴定及其耐药表型的检测,并采用脉冲场凝胶电泳(PFGE)进行分离株的亲缘性分析,对表皮葡萄球菌进行多位点序列分型(MLST),同时应用PCR扩增分离株中携带的相关耐药基因。研究结果表明,在330份奶样中共分离到表皮葡萄球菌32株(9.7%),腐生葡萄球菌34株(10.3%);PFGE分析共获得9种不同谱型的表皮葡萄球菌和11种不同谱型的腐生葡萄球菌。药敏试验结果显示,两种菌对青霉素(70%)、苯唑西林(60%)和林克霉素(55%)的耐药率较高,主要耐药基因为lnu(B)(40%)、erm(B)(30%)和mec A(25%)。本研究结果揭示了东北地区奶牛乳房炎病原菌表皮葡萄球菌和腐生葡萄球菌的耐药谱和流行情况,为临床合理用药及奶牛乳房炎的防控提供了实验依据。  相似文献   

牛分枝杆菌抗原MPB70、MPB83和ESAT-6的融合表达及重组蛋白的初步应用   总被引：14，自引：1，他引：14  

郭设平  刘思国  张秀华  王春来  宫强  郭洋  邵美丽 《畜牧兽医学报》2006,37(7):676-680

应用PCR方法从牛分枝杆菌Vallee株基因组中扩增获得mpb70、mpb83和esat-6三个目的基因片段。采用重叠延伸剪接技术(splicing by overlap extension,SOE)获得融合基因mpb70-mpb83后,将mpb70-mpb83和esat-6串连于同一表达载体pET32a( )中得到重组质粒pET70-83-E6。转化BL21(DE3)大肠杆菌感受态后,经IPTG诱导以可溶的形式表达融合蛋白。用Ni2 亲合层析的方法纯化该融合蛋白。Western blot分析显示:该融合蛋白能与抗牛分枝杆菌阳性血清发生特异性反应,而与牛副结核病阳性血清不反应。用该纯化蛋白初步建立了间接ELISA方法,并检测了117份临床血清样本(其中67份为PPD阳性牛血清),阳性率为39.32%(46/117)份,与PPD皮试诊断的符合率为82.05%(96/117)。  相似文献   

鸭病毒性肝炎研究进展   总被引：6，自引：0，他引：6  

王勇  李广兴  刘思国 《畜牧兽医科技信息》2007,(3):7-9

鸭病毒性肝炎(Duck viral hepatitis,DVH)是由鸭肝炎病毒(Duck hepatitis virus,DHV)引起雏鸭的一种高度致死性传染病。该病发病急,病程短,发病率和死亡率高,严重威胁养鸭业健康发展。1流行病学1.1I型DHVI型DHV最早于1945年由Levine和Hofstad在美国发现,并在1950年用鸡胚分离到I型DHV,此后加拿大、英国、德国、意大利、匈牙利、前苏联、印度、日本  相似文献   

仔猪注射牲血素引起感染的诊断     

杨  陈红  刘思国 《四川畜牧兽医》1998,(4)

１发病情况某农户自养２头经产母猪,１头于１９９５年３月１０日分娩,产仔猪１２头,仔猪出生后发育情况良好。３日龄时均注射牲血素,仔猪于注射当天晚上死亡２头,发病后注射青霉素无效,第２天下午１２头仔猪均死亡,病猪主要症状,身体变软,牙关紧闭,四肢游动,发...  相似文献   

中国鸡传染性支气管炎病毒的变异   总被引：11，自引：0，他引：11  

江国托  刘思国 《中国畜禽传染病》1998,20(6):321-323

同ＩＢＶ参考株比较,中国ＩＢＶ流行株血清型内和血清型间在基因型和组织嗜性上均已发生变异,研究首次表明ＩＢＶ血清型,基因型及组织嗜性间存在有规律的相关性,病毒免疫原Ｓ１基因的点突变在一定程度上影响病毒的免疫原性。  相似文献   

鸡传染性支气管炎的免疫机制研究进展     

刘思国  江国托 《预防兽医学进展》1999,1(1):17-20

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