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为探索调控家鹅繁殖性能的技术,本研究通过设计合成鹅促性腺激素抑制激素(gonadotropin-inhibitory hormone,GnIH)序列片段,酶切后连接到诺如病毒(Nov)P基因重组pEGX-4T-1载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,提取阳性菌重组质粒,并通过测序和酶切进行验证。将测序正确的质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,利用IPTG诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE及Western blotting检测重组蛋白表达。进一步在不同IPTG浓度及诱导时间条件下进行原核表达,确定最佳诱导条件,在最佳条件下的诱导菌液经过离心收集菌体,并超声波破碎离心后对重组蛋白可溶性进行分析。利用xTractor Buffer和Glutathione Superflow树脂对重组蛋白进行纯化,并使用自制的抗GnIH鹅血清及抗鹅二抗通过Western blotting检测重组蛋白。结果显示,重组质粒Nov P-partical-GnIH经双酶切鉴定获得大小约为96 bp的目的基因条带,进一步测序结果证明重组质粒构建成功。诱导表达的重组蛋白分子质量约为64 ku,与预期大小一致,且在37℃、1.0 mmol/L IPTG、诱导2 h条件下表达量最高;菌体超声破碎后经SDS-PAGE检测,重组蛋白主要表达在沉淀中。重组蛋白与GST单抗及抗GnIH阳性血清均能反应,表明此重组蛋白具有较好的反应原性和免疫原性。本研究通过对Nov P-partical-GnIH蛋白原核表达及纯化成功获得了大量纯度较高的重组蛋白,将有助于进一步建立家鹅的繁殖性能免疫调控方法,为提高繁殖性能及调控繁殖机制的研究奠定基础。 相似文献
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为探索调控家鹅繁殖性能的技术,本研究通过设计合成鹅促性腺激素抑制激素（gonadotropin-inhibitory hormone,GnIH）序列片段,酶切后连接到诺如病毒（Nov）P基因重组pEGX-4T-1载体,转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,提取阳性菌重组质粒,并通过测序和酶切进行验证。将测序正确的质粒转化大肠杆菌BL21感受态细胞,利用IPTG诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE及Western blotting检测重组蛋白表达。进一步在不同IPTG浓度及诱导时间条件下进行原核表达,确定最佳诱导条件,在最佳条件下的诱导菌液经过离心收集菌体,并超声波破碎离心后对重组蛋白可溶性进行分析。利用xTractor Buffer和Glutathione Superflow树脂对重组蛋白进行纯化,并使用自制的抗GnIH鹅血清及抗鹅二抗通过Western blotting检测重组蛋白。结果显示,重组质粒Nov P-partical-GnIH经双酶切鉴定获得大小约为96 bp的目的基因条带,进一步测序结果证明重组质粒构建成功。诱导表达的重组蛋白分子质量约为64 ku,与预期大小一致,且在37℃、1.0 mmol/L IPTG、诱导2 h条件下表达量最高;菌体超声破碎后经SDS-PAGE检测,重组蛋白主要表达在沉淀中。重组蛋白与GST单抗及抗GnIH阳性血清均能反应,表明此重组蛋白具有较好的反应原性和免疫原性。本研究通过对Nov P-partical-GnIH蛋白原核表达及纯化成功获得了大量纯度较高的重组蛋白,将有助于进一步建立家鹅的繁殖性能免疫调控方法,为提高繁殖性能及调控繁殖机制的研究奠定基础。 相似文献
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试验通过研究低蛋白氨基酸平衡饲粮对清远麻鸡生长性能、屠宰性能、肉品质及血液指标的影响,旨在评估低蛋白氨基酸平衡饲粮在清远麻鸡中的应用效果。选用90日龄的清远麻鸡1号320羽,随机分为2个组,每组4个重复,每重复40羽,地面平养。对照组饲喂14%粗蛋白质（CP）饲粮,低蛋白组饲喂12.5%CP并且真可利用赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸和色氨酸平衡饲粮。试验期为90～150日龄。结果表明：低蛋白氨基酸平衡饲粮对90～150日龄清远麻鸡体增重和平均日增重及150日龄清远麻鸡免疫器官指数无显著影响;低蛋白组清远麻鸡胸肌剪切力高于对照组（P<0.05）;低蛋白组清远麻鸡胸肌肌内脂肪低于对照组（P<0.05）;低蛋白组清远麻鸡排出粪氮含量低于对照组（P<0.05）。综上,饲粮CP降低1.5%并平衡真可利用赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸和色氨酸4种必需氨基酸,不影响90～150日龄清远麻鸡增重性能和免疫机能,并可显著降低其胸肌嫩度和肌内脂肪含量以及粪氮含量排放。 相似文献
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鹅GAPDH实时荧光定量PCR方法的建立 总被引：1，自引：0，他引：1
研究旨在建立鹅GAPDH基因的Real-time PCR技术,为鹅功能基因m RNA表达水平的定量分析提供方法学基础。根据Gen Bank上鸭GAPDH基因的序列设计引物扩增鹅全长基因,以全长基保守区作为模板设计引物,采用SYBR GreenⅠ染料建立了Real-time PCR方法,以阳性重组质粒为标准品,建立标准曲线,并进行了熔解曲线分析。结果表明,所建立的方法具有快速、线性范围广以及重复性高等特点,研究结果为鹅GAPDH作为内参基因用于鹅相关基因定量表达分析奠定了基础。 相似文献
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【目的】本研究旨在探讨生物素在蛋鸭生产中的应用效果及对蛋鸭卵巢发育和胫骨性状的影响。【方法】采用单因素完全随机试验设计,将432羽健康、处于产蛋高峰期的福建龙岩山麻鸭随机分为6个处理,每个处理6个重复,每个重复12羽。采用小麦-豆粕型基础饲粮,生物素添加水平分别为0、0.05、0.10、0.15、0.20、0.25 mg/kg,试验期12周。于第12周,每个重复随机选取4枚蛋,以及2只试验鸭进行采血、屠宰取样,检测蛋品质、血液生化指标及卵巢发育和胫骨性状指标。【结果】(1)饲粮生物素添加水平对产蛋性能影响不显著(P>0.05)。(2)饲粮生物素添加水平为0.10 mg/kg时,蛋黄重量最低,显著低于0.05和0.20 mg/kg添加组(P<0.05);随饲粮生物素添加水平升高,蛋黄中胆固醇(CHO)含量呈现升高趋势(P<0.05)。与对照组相比,生物素添加水平为0.25 mg/kg时,蛋黄中丙二醛(MDA)含量显著下降(P<0.05)。(3)饲粮生物素添加水平对蛋鸭血浆生化指标、卵巢发育指标及胫骨发育指标均无显著影响(P>0.05)。【结论】饲粮中添加不同... 相似文献
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山麻鸭卵泡发育的形态学及激素分泌调控基因的表达研究 总被引：1，自引：0，他引：1
为探讨各阶段山麻鸭卵泡发育水平以及激素分泌调控基因的表达情况,对不同发育等级山麻鸭卵泡壁的形态进行了观察,并检测了ＣＹＰ１９Ａ１和３β-ＨＳＤ基因的表达量．研究发现,发育过程中颗粒层和膜层细胞数量不断增加,密度和厚度也随着细胞的增殖而增长．对产蛋期山麻鸭卵泡膜层和颗粒层ＣＹＰ１９Ａ１和３β-ＨＳＤ的表达量进行检测结果表明,卵泡颗粒层的ＣＹＰ１９Ａ１基因主要在等级前阶段表达,３β-ＨＳＤ基因主要在等级阶段表达,卵泡膜层的ＣＹＰ１９Ａ１和３β-ＨＳＤ基因则主要都在等级阶段表达． 相似文献
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本试验旨在研究饲粮中椰子粕和复合酶添加水平对蛋鸭抗氧化及脂类代谢指标的影响。选择健康、体重接近的产蛋高峰期福建龙岩麻鸭576只，随机分为8组，每组6个重复，每个重复12只鸭。采用双因子完全随机试验设计，试验饲粮椰子粕添加水平分别为0、6%、12%、18%，复合酶制剂添加水平分别为0和400 mg/kg。试验期16周。结果表明：1）饲粮中复合酶添加水平对蛋鸭血浆谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性及肝脏GSH-Px、总超氧化物岐化酶（T-SOD）活性有显著影响（P<0.05）。2）饲粮中椰子粕添加水平对蛋鸭肝脏总胆固醇（T-CHO）含量有显著影响（P>0.05），饲粮中复合酶添加水平对蛋鸭血浆游离脂肪酸（FFA）含量及肝脏T-CHO、FFA含量有显著影响（P>0.05），饲粮中椰子粕和复合酶添加水平对蛋鸭血浆FFA含量及肝脏甘油三酯（TG）、FFA含量存在显著交互作用（P<0.05）。3）饲粮中复合酶添加水平对蛋鸭蛋黄TG含量有显著影响（P<0.05），饲粮中椰子粕和复合酶添加水平对蛋鸭蛋黄丙二醛（MDA）含量存在显著交互作用（P<0.05）。4）饲... 相似文献
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