转基因甘蔗BtG-2的T-DNA侧翼序列分析及其转化事件特异性检测     

冯翠莲  万玥  冯小艳  王俊刚  赵婷婷  王文治  沈林波  张树珍 《热带作物学报》2021,42(9):2468-2477

转基因甘蔗BtG-2是利用农杆菌介导法把Cry1Ac-2A-gna融合抗虫基因导入‘新台糖22号’的转基因甘蔗株系,具有良好的抗虫特性和农艺性状。为了明确转基因甘蔗BtG-2的分子特征及其检测方法,推进其生物安全性评价工作,以BtG-2的T2代为研究材料,利用Southern杂交检测外源基因在转基因甘蔗基因组内的拷贝数;利用染色体步移技术分离外源基因在甘蔗基因组中插入位点的侧翼序列,并建立了该转化体高效灵敏的特异性PCR检测方法。结果表明：Southern杂交检测证明外源T-DNA以单拷贝方式插入BtG-2株系;经过3次的热不对称巢式PCR扩增,获得外源基因T-DNA左边侧翼序列984 bp和右边侧翼序列705 bp;以这2个序列和相应的T-DNA的左右端序列分别设计3对检测引物对,建立了BtG-2株系的转化事件特异性PCR检测方法,扩增效率最高的引物对LS011/LA451和RS160/RA588分别扩增到440 bp和428 bp的特异片段。其中T-DNA左侧设计的LS011/LA451检测引物对扩增的灵敏度高、特异性强,能够在甘蔗BtG-2基因组DNA相对含量为0.1%的模板中检测出转基因目的成分,相当于9个单倍体基因组拷贝数。本研究完成了转基因株系BtG-2的分子特征及其转化事件特异性检测,为该转基因甘蔗及其衍生产品的检测和身份识别提供技术依据。  相似文献   

正交设计优化青蒿SRAP-PCR反应体系及引物筛选     

石紫薇  梁妍  姜婷婷  梁剑平  贾宁  辛志君  陆锡宏  周翔  李雪虎 《分子植物育种》2020,(10):3303-3310

为了建立青蒿的SRAP最佳扩增体系,并筛选出SRAP多态性引物,本研究以青蒿叶片DNA为模板,采用正交试验设计,以Mg^2+、dNTP Mix、Taq DNA聚合酶、引物和DNA模板5种因素5个水平,对青蒿SRAP反应体系进行研究。结果表明,青蒿SRAP-PCR最佳反应体系为:引物0.6μmol/L、Mg^2+2.0 mmol/L、模板DNA 5.1 ng、Taq DNA聚合酶2.0 U、dNTPs 0.25 mmol/L,总体积为25μL。各因素对扩增反应均有不同影响,其中引物浓度的影响最大,dNTPs的影响最小。运用该体系对不同种质资源的青蒿进行验证,证明该体系稳定可靠,并在30个引物组合中筛选出了25对扩增条带清晰,多态性丰富的引物组合。这一结论为今后利用SRAP标记技术进行青蒿分子遗传学研究提供了科学依据。  相似文献   

茶树种质资源抗茶云纹叶枯病鉴定   总被引：3，自引：0，他引：3  

洪北边  楼云芬 《植物病理学报》1996,26(3):215-216

 茶云纹叶枯病(Guignardia camelliae,无性时代为Colletotrichum camelliae)在我国各产茶省(区)均有发生和为害。对该病的发生规律及防治研究有过报导,但对茶树种质资源的抗病性研究报导甚少,本文简要报道30份茶种质资源抗茶云纹叶枯病的鉴定试验研究结果。  相似文献   

苹果酸处理水稻种子对秧苗根系及抗寒性影响的初探   总被引：1，自引：0，他引：1  

楼锡元  徐伟亮  吴河元 《种子》1993,(2)

水稻种子经苹果酸处理后,淀粉酶过氧化氢酶和脱氢酶活性均有提高。其幼苗根系发达,根/茎叶比重增加。幼苗经5C冷处理后,超氧化物歧化酶活性和叶绿素含量虽表现出下降,但明显高于对照。丙二醛含量和电解质渗漏率比对照为低。苹果酸处理在一定程度上提高了水稻秧苗素质及抗寒能力。  相似文献   

雄蚕杂交种的应用研究     

马秀康  沈志华  陶红伟  朱欣方  费建明  沈根生  楼黎静 《蚕桑通报》2001,32(4):22-25

总结了4年8个蚕期利用家蚕性连锁平衡致死第转育改良组配成的7对雄蚕杂交组合的饲养试验。结果表明雄蚕杂交种具有食桑省、叶丝转化率高、能够大幅度提高蚕出丝率、茧丝质量优异等优点，具有广阔的推广应用前景，对于改造提升传统蚕丝业具有重要意义。  相似文献   

黄瓜全雌性基因连锁的AFLP和SCAR分子标记   总被引：32，自引：5，他引：32  

娄群峰  陈劲枫  Molly Jahn  陈龙正  耿红  罗向东 《园艺学报》2005,32(2):256-259

 本研究以全雌品种‘戴多星’自交系和弱雌品种‘北京截头’自交系为双亲杂交获得F₁ ,然后得到F₂ 性型分离群体, 利用分离群体分组分析法(Bulked Segregant Analysis, BSA) 构建全雌和弱雌两个基因池, 筛选了64对AFLP选择性引物EcoR I-NN +Mse I-NNN组合, 发现EcoR I-TG +Mse I-CAC引物组合在全雌基因池中扩增出一条分子量为234 bp的特异带。经F₂ 代单株验证, 该特异条带能在全雌单株中稳定出现。以MAP MAKER (Version 310) 软件分析, 该标记与全雌性位点的连锁距离在617 cM。命名该连锁标记为TG/CAC₂₃₄。将该特异条带回收、克隆、测序, 设计特异SCAR引物, 再对F₂ 代单株基因组DNA进行扩增, 仅在全雌单株中扩增出1条分子量为166 bp 的特异带, 表明已成功地将与黄瓜全雌性连锁的AFLP标记转化为操作简便、表现稳定的SCAR标记, 该标记命名为SA₁₆₆。  相似文献   

苹果抗病虫育种研究概况     

闫忠业  娄汉平  田颖辉 《中国果树》2005,(6):48-49,58

抗病虫育种已成为许多苹果生产国苹果育种的主要目标.选育抗病虫苹果新品种可以降低生产成本,同时也可以满足生产绿色果品的需要.20世纪80年代以来,随着世界环保呼声渐高,苹果抗病虫育种研究日益受到重视,并取得了一定进展.但在我国苹果抗病虫育种研究甚少,仅在方法上进行一些探索,本文概述苹果抗病虫育种研究.  相似文献   

High-throughput real-time RT-PCR assay to detect the exotic Newcastle Disease Virus during the California 2002--2003 outbreak.   总被引：4，自引：0，他引：4  

Beate M Crossley  Sharon K Hietala  Liu-Mei Shih  Lou Lee  Evan W Skowronski  Alex A Ardans 《Journal of veterinary diagnostic investigation》2005,17(2):124-132

  相似文献   

犬胚胎移植手术路径研究性试验   总被引：6，自引：0，他引：6  

董君艳  谢伟东  娄红军 《中国工作犬业》2005,(5):10-11

犬胚胎移植手术路径的确定是移植能否成功的关键。我们选择了12例自然发情的母犬，分为供体组和受体组，每组6头。通过生物检测镜确定排卵时间，用腹腔镜观察卵巢黄体发育情况，同时于交配后第9、11、13天剖腹探查，确定冲卵时间。结果于交配后第11天冲洗供体犬左侧子宫角，保留右侧子宫角的两例犬受孕，移植给2头受体犬左侧子宫角。  相似文献   

种植密度对机播条件下红玫瑰马铃薯结薯性状及产量的影响     

密其鹏  杨宝戈  王瑞良  库婷婷 《蔬菜》2021,(10):13-16

为确定临沂市机播条件下红玫瑰彩色马铃薯的最佳播种密度,开展了机播马铃薯相同行距(90 cm)、不同株距(14、18、22、26 cm)的密度试验,分析了不同密度处理对红玫瑰马铃薯出苗期、现蕾期、开花期、成熟期、株高、茎粗、主茎数、马铃薯晚疫病发病情况、产量、商品薯率的影响。结果表明:随着播种密度的增加,红玫瑰物候期无明显变化,株高、马铃薯晚疫病株数呈升高趋势,茎粗和主茎数呈降低趋势,商品薯率和商品薯产量呈下降趋势。以行距90 cm、株距22 cm密度下商品薯667 m~2产量最高,为2 129.25 kg,并且马铃薯晚疫病未见发生。  相似文献