嗜水气单胞菌gyrA氟喹诺酮抗性决定区的克隆与分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

郑伟  卢强 《中国兽医科技》2003,33(3):8-15

研究了从病鱼体内分离的嗜水气单胞菌对氟喹诺酮类药物耐药性的分子机理。以4株对诺氟沙星等氟喹诺酮类药物耐药菌株及2株敏感菌株为模板，参照杀鲑气单胞菌gyrA基因序列，设计了1对引物，进行gyrA基因氟喹诺酮抗性决定区PCR扩增，将扩增产物克隆入pMD18-T载体，转化入大肠埃希氏菌DH5α中，小提质粒，酶切鉴定，测序并分析比较耐药菌和敏感菌的氨基酸残基序列。发现耐药菌有5个氨基酸突变位点，分别是83位点的Ser→Ile,92位点的Leu→Met,174位点的Ile→Phe,202位点的Asn→Asp,203位点的Leu→Arg，耐药菌突变后的氨基酸残基均比敏感菌正常的相对应氨基酸残基分子量大。83位点的突变与大肠埃希氏菌的耐药性突变一致。122位点具有保守的Try。  相似文献   

柴油机微粒排放控制技术的研究进展     

卢强  孙平  顾勤  董彪 《拖拉机与农用运输车》2005,(6):43-46

分别从机内净化、排气后处理、改善燃油品质三个方面分析了近年来降低柴油机微粒排放的研究现状。  相似文献   

4LZ—2.0型联合收获机割台模态分析   总被引：2，自引：0，他引：2  

陈树人  韩红阳  卢强 《农业机械学报》2012,43(Z1):90-94

为建立准确的联合收获机割台有限元模型,获取完备的结构动态特性,进行碧浪4LZ-2.0型联合收获机割台的试验模态分析,利用ModalVIEW软件识别各阶模态参数,同时利用UG软件进行割台有限元模态分析,得到了各阶计算模态,计算了试验模态的MAC值,并通过所测模态数据对比验证了所建立割台有限元模型的正确性.  相似文献   

鲤鱼白细胞介素-1β全长cDNA的克隆·鉴定及其差异表达分析     

何江帅  卢强  李伟  赵晓  冯祥汝  陈义龙 《安徽农业科学》2011,39(12):7301-7304

[目的]进行鲤鱼白细胞介素-1β（IL-1β）全长cDNA的克隆、鉴定及其差异表达分析。[方法]利用DD-RTPCR方法获得差异表达cDNA片段,对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库进行筛选,克隆了鲤鱼IL-1β的全长cDNA,并进行了序列分析和差异表达分析。[结果]获得的阳性克隆含有1个大小为831 bp编码276个氨基酸的完整开放阅读框。聚类分析表明,鲤鱼IL-1β氨基酸序列与日本鲤鱼紧密聚为一支,氨基酸序列的同源性达95%,之后聚类顺序依次为鲫鱼、斑马鱼、猪、牛、马、人和小鼠。差异表达分析表明,经有丝分裂原刺激后前期（4 h）白细胞中IL-1β的表达量显著增大,但随着时间推移（12,24 h）并非一直较同期大,表达量总体趋势成峰形。[结论]为进一步研究IL-1β在体内的表达方式、功能特点和调控机理以及在炎症反应、应急反应和免疫应答的作用机制奠定了基础。  相似文献   

鲤白细胞介素-8基因组DNA的克隆及序列分析     

孙晓义  卢强  谭业平  付保忠  李伟 《大连水产学院学报》2008,23(2):157-160

在白细胞介素-8(IL-8)cDNA全长序列的两侧--非翻译区设计一对引物,以提取的鲤脾脏基因组DNA为模板进行PCR扩增,并将扩增产物回收、纯化,连接到pMD18-T载体上,再转化到DH5α大肠杆菌感受态细胞中,并对插入片段进行测序,获得了鲤IL-8基因组DNA的全长序列.结果表明:鲤IL-8DNA全长为943 bp,由4个外显子和3个内含子组成,与已知其它物种的排列非常相近,说明在进化过程中其拼接位点非常保守,符合GT-AG规则;对系统发生的分析证明,鲤与斑马鱼的亲缘关系较近,与哺乳动物亲缘关系较远;将鲤的IL-8基因组结构与人、猪、狗、虹鳟的基因组结构进行比较,发现IL-8基因在由鱼类到哺乳动物的分子进化过程中较为保守,外显子基本保持稳定,而内含子的变化较大.  相似文献   

鲤鱼IL8的克隆及序列分析^*     

李莲瑞  卢强  刘明远  崔国祯  韩文瑜 《云南农业大学学报(自然科学版)》2008,23(1):68-72

 利用DD-RTPCR（正常鲤鱼外周血白细胞和经有丝分裂源刺激后白细胞的总RNA）获得的差异显示片段B₁₀克隆（编码IL8的一段序列）,对该基因进行DIG标记,对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库进行核酸杂交筛选,从0.8×10⁴个重组噬菌体中,经过2轮筛选最终获得阳性克隆,挑选了3个分别命名为IL8-1,IL8-2,IL8-3。测序后经NCBI Blast分析表明,阳性克隆具有完整阅读框架,均为编码鲤鱼IL8的全长cDNA,编码的多肽由98个氨基酸残基组成,其相对分子质量理论推导值为 10 848.9 Da,等电点为8.68。且与2003年12月Dev Comp Immunol.杂志报道的荷兰鲤鱼氨基酸的同源性达84%。  相似文献   

抗菌肽天蚕素B突变体ABP-S1基因在E.coli中的融合表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

卢强  刘维全  赵凤芹  刘明远  江禹  殷震 《中国兽医学报》2002,22(3):241-243

利用绿色荧光蛋白 (GFP)基因与天蚕素 B突变体 ABP- S1基因的融合基因 ,构建了 2个原核表达载体 p Am GS1和 p Bm GS1,转化表达宿主菌 E.coli BL 2 1(DE3)和 E.coli BL 2 1(DE3) p L ys S。结果 ,p Am GS1未能得到转化子 ,而p Bm GS1的转化子高效表达了融合蛋白 ,经 IPTG诱导 ,SDS- PAGE检查 ,融合表达产物最高可占菌体总蛋白的49.45 %。表达产物经包涵体复性 ,柱层析初步纯化 ,通过平板抑菌试验 ,对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、变形杆菌以及鱼类重要的致病菌嗜水气单胞菌等多种革兰氏阳性、阴性菌表现出较强的抗菌活性  相似文献   

HRP直接标记属特异性基因探针检测沙门氏菌的研究   总被引：2，自引：2，他引：0  

卢强  林万明 《中国兽医学报》1994,14(1):48-53

以活化辣根过氧化物酶复合物（ＨＲＰ—ＰＢＱ—ＰＥＩ＋—ＮＨ３＋）直接标记沙门氏菌属特异性ＤＮＡ探针ｐＬＳ２和ｐＬＳ３，探针与靶ＤＮＡ杂交后催化发光底物，经增强型化学发光反应（ＥＣＬ），用普通Ｘ光胶片自显影（ＣＰＤ）检测沙门氏菌。经狭缝杂交（Ｓｌｏｔｂｌｏｔ），该法标记探针均可检测到０．１ｐｇ的纯质粒ＤＮＡ及１０３个未经培养的鼠伤寒沙门氏菌。Ｄｏｔ—ｂｌｏｔ杂交结果证明，ＨＲＰ标记的探针仅与沙门氏菌属细菌杂交，而与试验的其他肠道非沙门氏菌不杂交。本研究表明，ＨＲＰ直接标记基因探针化学发光自显影法检测沙门氏菌，安全、快速、简便，且有高度的敏感性和特异性，是一种有较大应用前景的非放射性标记探针杂交检测方法。  相似文献   

对加快辽阳市土地流转的思考     

郑健  郭明顺  卢强 《现代农业科技》2012,(10):391-392

对辽阳市农村土地政策落实、规模、形式等流转情况进行阐述和分析,围绕辽阳市现代农业发展目标,提出建立和完善土地流转市场、制订有利于土地流转的政策、发展经济等建议,以为辽阳市加快利用土地流转给予指导。  相似文献   

旋毛虫肌幼虫cDNA文库的免疫筛选及初步分析   总被引：1，自引：1，他引：0  

付宝权  原丽红  张亚兰  吴秀萍  李莲瑞  卢强  刘明远  陈启军  P.Boireau 《吉林农业大学学报》2004,26(3):323-325,333

用旋毛虫感染猪血清对旋毛虫肌幼虫cDNA文库进行了免疫筛选,从1 6×105个重组噬菌体中筛选出21个阳性克隆。阳性克隆的测序结果表明:有9个克隆为未曾报道过的新基因;有9个克隆不含有开放阅读框架(ORF),与旋毛虫线粒体DNA同源,编码核糖体大亚基RNA;3个克隆为旋毛虫已知基因,其中克隆ML12,34与Serineproteaseinhibitor[Trichinellaspiralis](AAF63473)同源性为99%,克隆ML42与HypotheticalOFR17 20[Trichinellaspiralis](AAB48489)同源性为99%,与21kDExcretory secretoryprotein[Trichinellapseudospiralis](AAF79206)同源性为90%,这为进一步研究基因重组抗原奠定了基础。  相似文献