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应用反向遗传技术对新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)LaSota株感染性克隆PBRN-FL质粒进行操作,构建插入欧洲型猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)ORF5基因的重组质粒LaSota-ORF5并进行病毒拯救及鉴定。依据GenBank所发表的欧洲型PRRSV LV株ORF5序列,设计引物扩增ORF5片段,通过PBRN-FL质粒上P和M基因间的PmeⅠ酶切位点插入目的片段,构建重组质粒LaSota-ORF5。采用磷酸钙转染法将重组质粒和PCI-NP、PCI-P、PCI-L等3种辅助质粒共转染BSR-T7/5/细胞拯救病毒并对其分别进行RT-PCR、间接免疫荧光(IFA)和Western blot(WB)试验鉴定。结果显示:拯救病毒的RT-PCR产物测序结果正确,IFA出现绿色荧光,WB试验条带大小符合预期,证明GP5蛋白有效表达。结果表明:成功构建并拯救得到重组病毒rLaSota-GP5,为制备表达PRRSV GP5蛋白的重组NDV疫苗奠定基础。 相似文献
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我国是农业大国,农业经济在我国占有较高的比重,因此早日实现农业现代化的发展有利于我国经济的快速发展。解放劳动力,增加农民收入,农业机械的推广就显得尤为重要。虽然近些年来,我国的农机化作业普及程度已经很广,但是在实际情况中,农业机械的推广还存在着诸多问题。本文分析了有关推广中的问题并提出了对策。 相似文献
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近年来绿盲蝽Apolygus lucorum已经逐渐发展成为果树上的重要害虫之一, 对其越冬卵在果树上的空间分布型进行探究具有重要意义?本研究利用6种聚集度指标?Iwao回归方程和Taylor幂法则分析了苹果园中绿盲蝽越冬卵的空间分布型, 同时对苹果园绿盲蝽越冬卵聚集的原因和最适理论抽样数进行了分析与计算?结果显示, 绿盲蝽越冬卵在苹果园呈聚集分布, 并且随着越冬卵密度的增加, 分布越聚集?绿盲蝽越冬卵的种群聚集是由其生活习性与周围环境共同引起的?运用绿盲蝽越冬卵空间分布型参数, 建立Iwao理论抽样数模型, 从而明确不同密度下绿盲蝽越冬卵的最适理论抽样数, 为今后绿盲蝽越冬卵在苹果园内密度的准确调查和种群密度的预测提供了理论依据? 相似文献
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为探索云南省南部地区乙型脑炎病毒(JEV)的流行及基因变异情况,将2016年8—10月在南部4个县级地区采集的6 952只蚊,根据采集地和蚊种合并为69份样品,采用RT-PCR检测JEV并进行基因分析。结果显示:检出7份JEV阳性样品,平均阳性率为10.14%,其中思茅区和宁洱县蚊阳性率最高,均为25.00%;扩增的5条完整JEV E基因序列与2009年分离的JEV老挝株亲缘关系最近,同源性为97.3%~98.7%,均属于基因I型;5条E基因序列(YN2016-1/2/3/4/5)在1 323位核苷酸位点首次出现C碱基替换,且YN2016-1在第340位氨基酸位点首次出现丙氨酸替换。结果表明:云南省南部地区蚊JEV的携带率较高,尤其是思茅区和宁洱县;蚊携带的JEV出现了核苷酸和氨基酸变异,应注意对其加强监测。 相似文献