寨卡病毒SYBR GreenⅠreal-time PCR方法的建立及应用     

于宁  刘宇梦  李成辉  李卓昕  汪伟  孙文超  鲁会军  金宁一 《中国动物传染病学报》2021,(1)

为建立一种针对寨卡病毒的快速诊断方法,本研究根据寨卡病毒的3’端保守基因序列,设计合成1对引物,建立了检测寨卡病毒的荧光定量PCR方法。结果显示:所建立的检测方法的Ct值与标准品在1.41×10^1~1.41×10^10^ copies/μL具有良好的线性关系,相关性为1,斜率为-3.502;灵敏性结果显示,该方法的检测限度为1.41×10^1 copies/μL,是普通PCR的10000倍;特异性结果显示,对CHIKV、DENV和JEV无特异性扩增,特异性强;重复性试验结果显示,组内和组间变异系数均小于1%,重复性好。本研究建立的SYBR Green I real-time PCR检测方法,可用于寨卡病毒感染的快速诊断。  相似文献   

猪细小病毒6型SYBR Green I real-time PCR检测方法的建立     

孙文超  刘立明  赵翠青  汪伟  赵冠宇  曹亮  张赫  庄忻雨  韩继成  鲁会军  金宁一 《中国兽医学报》2018,(3)

采用PCR方法扩增PPV6保守区域基因252bp,将其克隆到pClon007载体,构建重组质粒作为标准阳性质粒。以质粒模板建立PPV6的SYBR GreenⅠreal-time PCR检测方法,并进行敏感性、特异性和重复性等验证。结果表明,重组质粒特异性好;建立的real-time PCR方法Ct值与标准品模板在8.80×109~8.80×101 copies/μL范围内呈良好的线性关系,相关系数为0.993,斜率为-4.320。该方法检测灵敏度可达8.80×101 copies/μL。该方法对JEV、PRV、PRRSV、PCV2、FMDV等猪常见病原检测均无特异性扩增;对临床样品的检测结果表明,所建立的荧光定量PCR阳性检测率为40.63%。本试验成功建立了PPV6SYBR Green I real-time PCR检测方法,可实现对PPV6快速灵敏的诊断。  相似文献   

鸡痘病毒抗体在鹌鹑体内的消长规律     

金明兰  侯继波  南文龙  鲁会军  马鸣潇  郑敏  金宁一 《江苏农业科学》2011,(1)

采用鸡痘弱毒疫苗按1个使用剂量、增加免疫剂量、2次免疫和对照组(生理盐水)对鹌鹑进行刺种,在免疫后的1～8周采血,检测特异性抗体和中和抗体,研究鸡痘病毒抗体在鹌鹑体内的消长规律,对鸡痘病毒疫苗应用于鹌鹑的免疫效果及生物安伞性进行初步评价.在试验期间试验动物精神状态良好,采食、饮水正常,未发生病理变化:抗鸡痘病毒特异性抗体和中和抗体效价免疫后1周显著升高,3周达到高峰,5周开始下降,8周时仍高于对照组的抗体水平,增加免疫剂量组产生的抗体水平高,但消长规律与使用剂量组相同.表明鸡痘病毒疫苗能刺激鹌鹑产生特异性抗体和中和抗体,维持时间较长,无毒副作用,生物安全性好.  相似文献   

Quil A与PICKCa的免疫调节作用研究     

刘燕瑜  任静强  刘存霞  靖杰  鲁会军  金扩世  金宁一 《黑龙江畜牧兽医》2011,(15)

为了探讨Quil A、PICKCa及二者联合使用对实验动物的免疫调节作用,试验分别给小鼠和猪注射Quil A、PICKCa及两者混合物,于注射后不同时间采血,检测细胞因子水平;注射后第7天检测猪T淋巴细胞的体外增殖反应。结果表明:小鼠和猪在注射药物之后均未出现任何不良反应;试验组动物的细胞因子水平均显著高于对照组;猪T淋巴细胞体外增殖能力也显著高于对照组。说明Quil A、PICKCa对小鼠和猪具有良好的免疫调节作用。  相似文献   

兔出血症病毒VP60蛋白T细胞表位优势区的筛选     

金明兰  侯继波  郑其升  鲁会军  任静强  刘春霞  南文龙  胡乐鹏  金宁一 《江苏农业科学》2013,41(4)

应用戊二醛醛化的人的“O”型红细胞纯化兔出血症病毒(RHDV),对非免兔进行3次免疫后,经分段表达的重组杆状病毒、纯化的病毒、Con A分别刺激后进行细胞增殖检测、IL-2、IL-4、IFN-γ检测.WST检测结果表明,3号重组杆状病毒刺激的值最高,所有重组杆状病毒与空白对照组差异显著；IL-2和IFN-γ检测结果表明,3号重组杆状病毒刺激的值最高,其次为2号、4号,而1号、5号重组杆状病毒刺激指数较低,但均高于对照组；IL-4检测结果表明,2号、3号、4号重组杆状病毒刺激的值低于对照组,1号、5号重组杆状病毒刺激组略低于对照组.研究结果表明,重组病毒3号区域为RHDV VP60 T细胞表位的优势区,从而为后期的试验奠定了基础.  相似文献   

O型口蹄疫病毒VP1嵌合基因的构建及原核表达   总被引：9，自引：0，他引：9  

郑敏  金宁一  鲁会军  韩松  金扩世  李昌 《中国兽医学报》2005,25(6):561-563

首先合成我国O型口蹄疫病毒2个疫苗毒株VP1基因的3个抗原袁位，与另外扩增的流行毒株VP1基因末端273bp片段相连,构建出O型VP1嵌合基因片段（VP1O）。然后，将VPIO基因连接到原核表达载体pET28a上，构建了重组表达质粒pET28a-VP1O，转化大肠杆菌BL21（DE3）进行诱导表达。SDS-PAGE电泳表明。VP1O基因在大肠杆菌中获得表达。Western blotting检测证实表达的VP1O蛋白具有良好的生物学活性。对表达蛋白通过包涵体洗涤的方法进行初步纯化，获得了较高纯度的VP1O蛋白。  相似文献   

口蹄疫重组鸡痘病毒活载体疫苗在豚鼠、猪体内的毒性、分布及抗体消长规律     

金明兰  金宁一  鲁会军  马鸣潇  郑敏  霍小伟  刘慧娟  计越  李旭 《中国兽医学报》2007,27(6):803-806

利用临床观察、病理解剖、PCR、RT-PCR、ELISA、中和抗体检测等方法,对口蹄疫(FMD)重组鸡痘病毒(FPV)在豚鼠、仔猪体内的毒性、分布以及抗体消长规律进行研究。结果表明,FMD重组鸡痘病毒免疫的动物在整个试验期间,未表现出明显的临床症状和不良反应;病理组织切片检测无明显的组织学变化;PCR、RT-PCR检测证明,豚鼠、猪免疫FMD重组鸡痘病毒后,在心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、脑、肠系膜淋巴结内检测到FPVDNA和FMDV DNA,且在大部分组织能存在3 d左右;FMD重组鸡痘病毒均可诱导免疫动物产生较高水平的抗FMDV特异性抗体和中和抗体,验证了所构建重组FPV的生物安全性及良好的免疫原性,为其他哺乳动物实验提供了必要的基础数据。  相似文献   

H5亚型禽流感病毒HA基因在重组杆状病毒中的表达及检测   总被引：6，自引：3，他引：6  

费东亮  金宁一  马鸣潇  夏志平  鲁会军  金扩世 《中国兽医学报》2006,26(4):387-389

利用杆状病毒表达系统对H5亚型禽流感病毒HA基因在sf9细胞中的表达进行了研究。首先将pUCm—T—H5HA质粒用BamHⅠ及NotⅠ酶切，获得HA基因片段，同时杆状病毒转座载体质粒pFastBacⅠ也用BamHⅠ及NotⅠ酶切，然后用T4DNA连接酶连接，构建了重组质粒pFastBac—H5HA。再将该重组质粒转化DH10Bac感受态细菌，在体内进行重组，并经三重抗性与蓝白斑筛选，得到杆状病毒重组质粒Bacmid—H5HA。将Bacmid—H5HA转染sf9细胞，获得重组杆状病毒，经SDS—PAGE和Western blotting检测表明，HA蛋白在重组杆状病毒中获得表达。  相似文献   

治疗性噬菌体制剂研究进展   总被引：9，自引：0，他引：9  

鲁会军  韩文瑜  雷连成 《中国兽药杂志》2002,36(6):39-41,19

细菌性疾病一直是困扰养殖业发展的主要问题之一,治疗的常用方法是使用抗生素,但随着耐药菌的大量出现,抗生素已无法达到理想的治疗效果,噬菌体制剂作为一种新的治疗手段已受到越来越广泛的关注。虽然噬菌体制剂的早期研究工作并不理想,而且一度被认为是没有前途的,但近期的研究表明,噬菌体制剂不但有许多抗生素无法比较的优势,而且只要对其进行正确的处理,是可以在治疗中发挥其应有的作用的。国外某些研究机构已开始研制噬菌体制剂,有些国家的噬菌体制剂已经应用于临床治疗并取得了比较理想的治疗效果。  相似文献   

长春地区猪源链球菌分离株的病原特性研究   总被引：11，自引：0，他引：11  

倪宏波  王兴龙  鲁会军  雷连成 《黑龙江八一农垦大学学报》2002,14(1):64-68

2000～2001年从长春地区分离到20株猪源链球菌,结合培养特征、生化特性及血清学反应等对其进行鉴定,其形态、染色、培养特征及理化特性基本符合猪链球菌的特点,大多具有α或β溶血,生化试验结果不稳定。用国际通用的链球菌A～G乳胶分型诊断试剂盒检测20株分离菌,5株为C群链球菌,9株为D群链球菌,1株为G群链球菌,2株与D群和G群有交叉反应,3株不在检测范围。20株链球菌对小白鼠致病性有所差异。本实验可证实长春地区猪链球菌病的病原已不局限于原有的C群链球菌,因此研制针对本地区流行株的多价灭活疫苗已成为控制该病的当务之急。  相似文献