卵泡颗粒细胞维持山羊卵母细胞减数分裂抑制状态的研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘利杰  权富生  刘军  张东  刘根胜  张涌 《华北农学报》2008,23(4)

通过在卵母细胞体外成熟过程中添加不同浓度的卵丘细胞或其外围壁层颗粒细胞进行共培养,对山羊卵母细胞成熟过程中卵泡颗粒细胞对卵母细胞减数分裂抑制作用及作用机制进行了探索.结果表明,成熟液中添加105和106个/mL卵丘细胞或外围壁层颗粒细胞的卵母细胞体外成熟率与对照组相比差异不显著(P>0.05),但添加5×106个/mL(41.2%)和107个/mL(24.6%)卵丘细胞或外围壁层颗粒细胞组的成熟率显著降低(P<0.05);添加5×106和107个/mL卵丘细胞组和颗粒细胞组卵丘不能正常扩展,卵母细胞核状态观察,停留在GV期;Rp-cAMP(Rp-cyclic adenosine monophosphothioate)膜渗透性cAMP对抗剂,诱导了107个/mL的卵丘细胞组(71.6%)和外围壁层颗粒细胞组(71.3%)的卵母细胞体外成熟率与对照组(72.O%)差异不显著(P>0.05).在山羊卵母细胞体外成熟过程中,添加一定浓度的卵丘细胞及其外层的颗粒细胞可以提高卵母细胞胞质内的cAMP的水平,抑制卵母细胞减数分裂的启动,使卵母细胞停留在GV期.  相似文献   

雌性鸵鸟生殖器官解剖学和组织学观察   总被引：1，自引：0，他引：1  

赵慧英  龙敏  孙健红  李义书  刘根胜  马夜肥 《中国兽医杂志》2006,42(7):23-25

我国目前已养殖驼鸟10万只以上，其中种鸵鸟3万只。目前，对鸵鸟基础性方面研究的报道很少，仅见于国外的一些研究机构，但详细资料来源受限；而国内仅有的一些资料多比较粗浅，真正系统深入的研究极少。为此，本试验对雌鸵鸟生殖器官的解剖学和组织学结构进行了研究。  相似文献   

ERα免疫反应产物在山羊卵巢中的分布   总被引：1，自引：0，他引：1  

孙健红  张涌  郑月茂  刘根胜  马夜肥  赵慧英 《畜牧兽医学报》2006,37(9):920-923

为了研究不同生殖周期山羊卵巢中雌激素受体α（estrogen receptor α，ERα）的表达，本试验应用高灵敏度的免疫组织化学SP法检测了ERα免疫反应产物在不同生殖周期山羊卵巢中的分布。结果显示，ERα免疫反应产物主要存在于成熟卵泡的颗粒细胞、发情期和妊娠期生长卵泡的部分颗粒细胞、原始卵泡卵母细胞胞质、粒黄体细胞胞质及膜黄体细胞胞核、卵泡膜细胞和类固醇细胞胞质；间情期生长卵泡的颗粒细胞中的ERα免疫反应产物较少，主要存在于细胞膜上；卵母细胞中ERα免疫反应产物在初级卵泡阶段含量较少，从次级卵泡开始其含量很丰富。以上结果提示，ERα以激活不同信号途径的方式参与了对卵泡生长、排卵及妊娠维持的调控，这为研究雌激素及雌激素受体α在卵巢中的作用及其生殖调控机理提供了形态学资料。  相似文献   

TSA处理供体细胞对组蛋白乙酰化和核重编程效果的影响   总被引：3，自引：0，他引：3  

张东  杨鹭  王勇胜  刘根胜  刘利杰  万敏  张涌 《畜牧兽医学报》2009,40(7)

克隆胚胎基因组的不完全重编程是克隆动物成功率低的主要原因.试验中以第5代牛胎儿成纤维细胞作为供体核,以牛卵母细胞作为受体胞质进行体细胞核移植,用75 nmol·L-1曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)分别处理供体细胞6、12和24 h,通过核移植检测克隆胚胎发育率,并应用激光共聚焦显微镜技术和流式细胞术检测处理细胞和克隆囊胚组蛋白H3K18乙酰化水平和细胞周期.结果显示:随着TSA处理时间的延长,供体细胞组蛋白H3K18乙酰化水平不断提高;以75 nmot·L-1TSA处理供体细胞12 h的克隆胚的囊胚发育率显著高于未处理组(23.5%vs 15.7 %,P<0.05);供体细胞经TSA处理的克隆囊胚组蛋白H3K18乙酰化水平与未处理组相比差异不显著(P>0.5);处理组和对照组细胞G0/G1期和S期比例间存在显著差异(P<0.05).结论:TSA对核供体细胞的处理存在时间效应,75 nmol·L-1TSA处理12 h的牛胎儿成纤维细胞更易被卵母细胞重编程,显著提高了克隆胚的体外发育能力,初步证实TSA是通过提高供体细胞组蛋白乙酰化水平来促进供体细胞重编程的.  相似文献   

小鼠无透明带胚胎培养方法的优化     

刘根胜  刘军  孙健红  刘凤军  张东  刘利杰  马夜肥  杨鹭  张涌 《农业生物技术学报》2008,16(2):270-275

探索一种高效的无透明带胚胎培养方法,为手工核移植提供技术支持,研究以小鼠（Mus musculus）胚胎为材料,对比了现有的3种无透明带胚胎培养方法,对其中效果较好的WOW（the well of the well）法进行改进,以海藻酸钙凝胶包埋小凹,并且尝试与共培养技术相结合。结果显示,海藻酸钙凝胶包埋小凹法（AEW法）的囊胚发育率（54.7%）和囊胚细胞平均数（54.3）显著高于微滴单卵培养法（MDS法）和琼脂柱包埋培养法（AE法）（P〈0.05）,与WOW法相当（P〉0.05）;使用AEW法进行培养时,最佳的海藻酸钠和钙离子浓度分别为0.7%和1.5%;该法与颗粒细胞共培养相结合后,胚胎卵裂率（89.7%）与囊胚发育率（67.9%）显著高于对照组（分别为79.5%和54.7%）（P〈0.05）。实验结果表明,AEW法培养无透明带胚胎的效果优于其它几种方法;AEW法与颗粒细胞共培养相结合可以大大提高无透明带胚胎的胚胎卵裂率及囊胚发育率。  相似文献   

小鼠卵母细胞化学去核及手工构建核移植胚胎   总被引：1，自引：1，他引：0  

赵禹  刘军  王保垒  张拓  刘根胜  张涌 《中国畜牧兽医》2009,36(10):102-106

为优化脱羰秋水仙碱（DC）诱导去核程序,研究以DC去核卵母细胞为核受体的、无透明带体细胞核移植方法在小鼠体细胞核移植中的应用,试验比较了乙醇、SrCl2两种激活方法及脱羰秋水仙碱处理开始时间对小鼠MⅡ期卵母细胞去核效率的影响;将DC诱导去核成功的卵母细胞去除透明带,与胎儿成纤维细胞粘合、电融合和SrCl2激活后,体外培养重构胚。结果显示,7%乙醇激活后0 min起始DC处理可得到最高的诱导去核率（66.4%）;而在8 mmol/L SrCl2中激活15 min后用DC处理可得到最高的诱导去核率（64.3%）;目前重构胚可以体外发育到8-细胞。试验结果首次证明了SrCl2在小鼠卵母细胞DC诱导去核中的作用效果与乙醇相当,初步证明了将DC诱导去核技术与无透明带技术相结合手工克隆生产小鼠重构胚的可能性,它的成功将大大简化核移植程序。  相似文献   

一种改进的小鼠无透明带胚胎培养方法     

刘根胜 《农业生物技术学报》2008,16(2)

摘要：为了探索一种高效的无透明带胚胎培养方法,为手工核移植提供技术支持,本研究以小鼠胚胎为材料,对比了现有的3 种无透明带胚胎培养方法,对其中效果较好的WOW法进行改进,以海藻酸钙凝胶包埋小凹并且尝试与共培养技术相结合。结果显示,海藻酸钙凝胶包埋小凹法（AEW法）的囊胚发育率（54.7 %）和囊胚细胞平均数（54.3）显著高于微滴单卵培养法（MDS法）和琼脂柱包埋培养法（AE法）（p＜0.05）,与WOW法相当（p>0.05）;使用AEW法进行培养时,最佳的海藻酸钠及钙离子浓度分别为0.7 %和 1.5 %;该法与颗粒细胞共培养相结合后,胚胎卵裂率（89.7 %）与囊胚发育率(67.9 %)显著高于对照组（p＜0.05）。实验结果表明,AEW法培养无透明带胚胎的效果优于其他几种方法;AEW法与颗粒细胞共培养相结合可以大大提高无透明带胚胎的胚胎卵裂率及囊胚发育率,便于无透明带重构胚的大批量培养。  相似文献