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CRISPR/Cas9系统是一种广泛应用于细菌、酵母、动物和植物中的基因组定点编辑技术,但该编辑系统的使用范围受PAM (proto-spacer-motif)位点NGG的限制。本研究通过突变Streptococcus pyogenes Cas9 (SpCas9)编码氨基酸(1135位的天冬氨酸D突变成缬氨酸V, 1335位的精氨酸R突变为谷胱氨酸Q, 1337位的苏氨酸T突变为精氨酸R,命名该突变子为Cas9-VQR)改造其识别PAM为NGA的位点以扩大其使用范围。并使用玉米Ubi启动子启动Cas9-VQR基因、优化SpCas9的密码子、加入保守的核定位信号序列、增加单子叶植物中保守的3′UTR序列和使用水稻U6启动子启动gRNA来修饰该编辑系统。结果表明Cas9-VQR系统能够识别PAM为NGA的位点,并进行有效的切割。体外酶切活性检测结果表明Cas9-VQR的切割效率为5%~70%。水稻转化检测结果表明Cas9-VQR的切割效率约为27.5%~70.5%,平均切割效率为46.23%。本研究拓宽了CRISPR/Cas9系统在作物中的使用范围,特别是NGA PAM位点较高的作物。 相似文献
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抗重茬微生态菌剂在马铃薯栽培中的应用效果分析 总被引:1,自引:0,他引:1
针对当前马铃薯种植区连作导致土传病害严重,产量品质下降的现象,通过施用抗重茬微生态菌剂进行田间试验,了解掌握当前新型微生物肥料抗重茬微生态菌剂在马铃薯栽培中的最佳经济施用量和抗病增产效果,为减轻马铃薯栽培中的连作影响,保障马铃薯产区产业健康可持续发展,提供可靠技术依据。结果表明:在马铃薯上施用抗重茬微生态菌剂可以显著降低土传病发病率,提高产量,其中75 kg/hm~2施用量是最佳经济推广用量,对枯萎病、黑痣病、疮痂病平均防效达45.0%。 相似文献
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留茬保护地对减少土壤风蚀的作用 总被引:4,自引:0,他引:4
内蒙古武川县从2000年9月份开始进行保护性耕作研究试验项目,其核心工艺是:秋收时留高茬、保护冬春季农闲季节裸露农田、春季免耕播种、化学除草、隔年视土壤容重进行深松。通过几年的试验研究,初步确立了适合当地自然特点和种植习惯的保护性耕作技术工艺路线。同时也对保护性耕作的留茬保护在减少风蚀中的作用进行了监测。通过监测初步得出,留茬保护地对防治土壤风蚀起了较大作用,并科学的掌握了相关数据。为保护性耕作的抗风蚀效果提供了理论依据。 相似文献
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