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为研究油菜蜂花粉总黄酮(rape bee pollen flavonoids,RBPF)抗心血管疾病的作用机制,以RBPF为研究对象,利用人工建立的血管内皮细胞氧化损伤模型,对RBPF的抗氧化活性进行初步研究,在体外水平探索RBPF对血管内皮细胞氧化损伤的保护作用。采用超声醇提及大孔树脂纯化的方法提取富集RBPF,同时采用过氧化氢叔丁醇(tert-Butyl hydroperoxide,TBHP)诱导细胞氧化损伤,建立人脐静脉内皮融合细胞系EA.hy926的氧化损伤模型,并利用此模型研究RBPF在细胞水平的抗氧化作用,以公认抗氧化性质良好的黄酮类化合物槲皮素作为阳性对照,CCK8法检测细胞活力。首先,用梯度稀释的RBPF及槲皮素作用于正常培养细胞,分析其细胞毒性,确定毒性阈值;然后,在毒性阈值范围内设置梯度浓度的槲皮素溶液作用于细胞损伤模型,确定槲皮素最佳抗氧化浓度剂量,并以此剂量组作为阳性对照组,与毒性阈值范围内梯度浓度的RBPF同时作用于细胞损伤模型,研究RBPF对血管内皮细胞氧化损伤的保护情况。结果表明:其一,体外血管内皮细胞EA.hy926氧化损伤模型的最佳建模条件确定为500μmol·L~(-1)TBHP作用3h;其二,细胞毒性试验结果表明,对于血管内皮细胞EA.hy926,RBPF的毒性阈值为24mg·L~(-1),阳性对照品槲皮素的毒性阈值为50mg·L~(-1);其三,CCK8法测定RBPF对细胞氧化损伤模型的保护作用,结果显示在6~18mg·L~(-1)剂量范围内,RBPF预处理对EA.hy926细胞氧化损伤模型具有明显的保护作用(p≤0.05),其抗氧化作用在低浓度(≤10mg·L~(-1))范围内呈上升趋势,在高浓度(≥14mg·L~(-1))范围内呈下降趋势,在10,12,14mg·L~(-1)3个剂量组其抗氧化性优于槲皮素(25mg·L~(-1)),RBPF浓度为10mg·L~(-1)时效果最佳。综上所述得出结论,对于血管内皮细胞氧化损伤模型,RBPF表现出了极好的体外抗氧化效果,可作为优质的预防心血管疾病的天然产物资源进行深入开发利用。 相似文献
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