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秦烟遗传转化体系的优化 总被引：1，自引：0，他引：1
【目的】优化烟草的高效遗传转化体系。【方法】以陕西地区广泛种植的烟草品种秦烟98为试材,采用根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens,LBA4404)介导法,将从酿酒酵母细胞中克隆到的具有较强耐盐表型的HAL1基因进行遗传转化,对农杆菌介导的遗传转化条件及其影响因素进行研究。【结果】用50 mg/L卡那霉素(Kan)筛选转化外植体用800 mg/L羧苄青霉素(Cb)除菌可以获得理想的筛选和除菌效果。以优化的农杆菌介导烟草叶片的遗传转化条件为:将未经过预培养(预培养0 d)的外植体用稀释150倍的农杆菌菌液(OD600=0.5)浸泡1min,转至MS1培养基上共培养48 h,用无菌水冲洗后于体积分数2%NaClO中浸泡15 min,用无菌水冲洗4~5次,置800 mg/L Cb+质量分数0.1%的甘露醇中浸泡约12 h除菌。【结论】获得了农杆菌介导烟草叶片遗传转化的最佳优化条件,有效地减少了外植体的污染率,提高了抗性芽分化率。 相似文献
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研究了根癌农杆菌LBA 4404和C58C1生长的培养基类型、菌株生长状态、转化溶液、质粒与感受态细胞共放置时间、质粒加入量、液氮速冻时间及热激条件对质粒P rokⅡ转化的影响。结果表明,以70 mm o/L C aC l2作为转化溶液,YEB培养基制备的、OD600为0.5的LBA 4404感受态细胞与10 ng质粒DNA,于0℃共放置30m in,液氮速冻5 m in,37℃热激5 m in时转化率最高,达1.40×105μg-1;以70 mm o/L C aC l2作为转化溶液,YEB培养基制备的、OD600为0.5~0.6的C58C1感受态细胞与20 ng质粒DNA,于0℃共放置10 m in,液氮速冻1 m in,37℃热激1 m in时转化率最高,达1.33×105μ-g 1。 相似文献
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