三株乳酸杆菌的分离鉴定与益生特性研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

梁东梅  李玉鹏  杜艳芬  朱琪  安建勇  崔茂盛  李治欣  乔家运  杨卓婧  王文杰  李海花 《中国饲料》2018,(11)

本研究通过分离鉴定猪肠道内乳酸杆菌并对其益生特性进行比较分析,旨在为乳酸杆菌在仔猪饲粮中的应用提供科学依据。试验选取健康猪粪便,利用选择性培养基进行厌氧培养和单克隆纯化,共获得三株乳酸杆菌,通过生化鉴定、16Sr RNA基因序列测定和同源性分析,确定分离菌株分别为植物乳杆菌、唾液乳杆菌、嗜酸乳杆菌;采用牛津杯法、活菌计数法和细胞试验等研究三株乳酸杆菌体外抑菌活性、黏附性及竞争性黏附猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)的益生特性。结果表明:与对照组相比,三株乳酸杆菌培养上清液的抑菌圈直径(P0.01)和抑菌效果(P0.01)差异均极显著,并且以植物乳杆菌培养上清液的抗菌效果为最佳;三株乳酸杆菌均可黏附于IPEC-J2细胞,并且以植物乳杆菌黏附IPEC-J2的菌数为最多;与对照组相比,三株乳酸杆菌对大肠杆菌黏附IPEC-J2细胞均具有抑制作用(P0.01),并且以植物乳杆菌抑制黏附的效果最好。  相似文献   

猪NLRP6蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备     

杨文静  李玉鹏  梁冬梅  王倩  杨升  乔家运  姚胜宁  李海花 《中国畜牧兽医》2019,(9)

试验旨在表达、纯化猪NLRP6蛋白,并制备鼠抗NLRP6多克隆抗体。根据猪NLRP6全基因核苷酸序列(GenBank登录号:XM_003124236.4)设计特异性引物,利用PCR方法从pMD-19T-NLRP6重组载体中扩增NLRP6基因片段,将扩增产物与原核表达载体pET-32a(+)连接,获得重组质粒pET-32a-NLRP6,经抗性筛选阳性菌、双酶切鉴定、PCR及测序分析后,将其转化大肠杆菌Rosetta(DE3)感受态细胞中,并进行IPTG诱导表达及Western blotting鉴定。对获得的重组融合蛋白进行可溶性分析,经变性、镍柱亲和纯化、复性后得到纯化的融合蛋白,将其免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体。结果显示,试验成功克隆大小约为576 bp的NLRP6基因序列,经鉴定重组质粒pET-32a-NLRP6构建正确,通过IPTG诱导获得大小约34 ku的NLRP6重组融合蛋白,Western blotting分析表明其与小鼠抗6×His单克隆抗体呈阳性反应。可溶性分析结果显示,NLRP6重组融合蛋白以包涵体形式存在,约占95%。纯化的NLRP6重组融合蛋白免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体,经Western blotting分析显示出特异性反应。本试验成功制备了具有免疫原性的NLRP6蛋白及其鼠源多克隆抗体,为NLRP6蛋白生物学功能及相关疾病致病机制研究提供了基础材料。  相似文献   

丁酸梭菌介导mTOR信号通路调控猪肠上皮细胞炎症反应的分子机制     

李玉鹏  李海花  郭晓飞  姚大为  李义海  冯婧  张金龙  张效生 《中国饲料》2021,1(23):24-29

本试验旨在研究丁酸梭菌（CB）介导雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路调控产肠毒素大肠杆菌K88（ETEC K88）感染猪肠上皮细胞（IPEC-J2）炎症反应的分子机制。按试验步骤处理细胞,利用1×103 cfu/mL 的ETEC K88感染IPEC-J2以及400 nmol/L的mTOR抑制剂处理IPEC-J2,到达作用时间后,分别收集细胞及培养上清,然后按照猪肿瘤坏死因子（TNF-α）和猪白细胞介素-8（IL-8）检测试剂盒说明书进行细胞因子检测,以及使用荧光定量PCR（qPCR）法进行ZO-1、occludin和mTOR表达量的检测。结果表明：与ETEC组相比,抑制剂+ETEC组、CB+ETEC组和抑制剂+CB+ETEC组ZO-1和occludin的表达量均显著升高,或有升高趋势,ZO-1的表达量分别升高了86.59%、31.48%和133.98%,occludin的表达量分别升高了69.34%、18.63%和87.52%,而mTOR的表达量分别降低了40.81%、11.62%和52.43%。与CB+ETEC组相比,抑制剂+CB+ETEC组在mTOR活性被抑制后ZO-1和occludin的表达量极显著升高了77.97%和58.07%,而mTOR的表达量极显著降低了46.18%,CB与抑制剂协同逆转ETEC造成的紧密连接蛋白表达下降。综上所述,ETEC K88能够激活mTOR信号通路,而CB通过介导mTOR信号通路能够降低ETEC K88感染IPEC-J2引起的炎症反应,并提高紧密连接蛋白的表达量,从而减轻细胞损伤。 [关键词] 猪肠上皮细胞|丁酸梭菌|产肠毒素大肠杆菌K88|mTOR信号通路|肠道健康  相似文献   

菏泽牡丹主要病虫害的发生与防治     

薛杰  郭霞  马书燕  李玉鹏 《林业实用技术》2005,(4):26-28

山东菏泽牡丹栽培面积已达到4000多hm^2，有800多个品种，成为世界上面积最大，品种最多的牡丹生产、集散地。但随着面积的不断扩大，牡丹病害也逐年加重，受害的牡丹生长势衰弱、花色衰退、丹皮产量低、苗木品质差，严重影响出口创汇和国内外市场需求，也给花农造成了重大经济损失。牡丹病害现已知的有20余种，其中真菌病害15种，病毒病害3种，线虫病害1种及缺素症病害等。  相似文献   

丛枝菌根真菌改善镉胁迫下植物根系和土壤微环境的效应     

杜红  李玉鹏  程文  肖荣英  胡鹏 《浙江农业学报》2022,34(5):1039

为探究Cd胁迫下丛枝菌根真菌(AMF)对植物根系和土壤微环境的影响,以黑麦草为供试植物、变形球囊霉(Glomus versiforme)为供试AMF,以Cd浓度(0、10、20、30 mg·kg^-1)和是否对黑麦草接种AMF为双因素,设计8个处理,开展盆栽试验。结果显示:随着Cd浓度增加,AMF侵染率和孢子数量显著(P<0.05)降低。相同Cd浓度下,接种AMF显著(P<0.05)改善了黑麦草的根系构型(根系总长度、根系总投影面积、根系总体积、根尖数、根分叉数)。在相同Cd浓度下,接种AMF显著(P<0.05)增加了土壤中真菌、细菌和放线菌的数量,土壤微生物生物量碳、微生物生物量氮含量,以及土壤多酚氧化酶活性,和土壤易提取球囊霉素相关土壤蛋白和总球囊霉素相关土壤蛋白含量。这说明,接种AMF能够通过改善植物根系和微生物环境、提高土壤相关酶活性和球囊霉素含量等,增加植物抗性。  相似文献   

适宜菏泽地区栽培的牡丹品种     

李玉鹏  晁新胜 《甘肃农业科技》2012,(5):48-49

牡丹属毛茛科芍药落叶小灌木,为我国特有的传统名花,被誉为＂花中之王＂。随着人民生活水平的提高,牡丹新品种的市场需求空前增大,在园林、药用、食用、盆景、化妆品、旅游等方面得到广泛应用。近年来,  相似文献   

丁酸梭菌对小鼠健康状况的影响     

李玉鹏  李海花  尚智援  张效生 《中国饲料》2021,1(21):21-25

为研究丁酸梭菌对小鼠生长性能、血清细胞因子含量和肠道紧密连接蛋白表达量的影响，试验将32只KM小鼠随机分为4组，分别为对照组、丁酸梭菌组、产肠毒素大肠杆菌K88组以及丁酸梭菌+产肠毒素大肠杆菌K88组。试验周期为14 d，期间测定小鼠生长性能。采用ELISA测定小鼠血清中二胺氧化酶（DAO）、肿瘤坏死因子（TNF-α）以及白介素-8（IL-8）的含量|采用Western blot检测回肠中紧密连接蛋白ZO-1和occludin的表达量。结果表明：在第7、14天时称重，与对照组相比，丁酸梭菌组的小鼠体重分别提高了5.79%、3.97%，但差异均不显著（P ＞ 0.05）|与产肠毒素大肠杆菌K88组相比，丁酸梭菌组DAO、TNF-α及IL-8含量显著降低（P ＜ 0.05），分别降低了13.81%、29.61%、37.29%|与对照组相比，丁酸梭菌组小鼠回肠紧密连接蛋白的表达量显著提高，分别提高了40%和20%（P ＜ 0.05）。综上所述，饲粮中添加丁酸梭菌能够调节小鼠炎症反应，改善小鼠肠道健康状况，且不影响小鼠生长性能。 [关键词] 小鼠|丁酸梭菌|产肠毒素大肠杆菌|生长性能|炎症因子  相似文献   

猪NLRP6蛋白的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备     

杨文静  李玉鹏  梁冬梅  王倩  杨升  乔家运  姚胜宁  李海花 《中国畜牧兽医》2019,46(9):2707-2714

试验旨在表达、纯化猪NLRP6蛋白,并制备鼠抗NLRP6多克隆抗体。根据猪NLRP6全基因核苷酸序列（GenBank登录号：XM_003124236.4）设计特异性引物,利用PCR方法从pMD-19T-NLRP6重组载体中扩增NLRP6基因片段,将扩增产物与原核表达载体pET-32a（+）连接,获得重组质粒pET-32a-NLRP6,经抗性筛选阳性菌、双酶切鉴定、PCR及测序分析后,将其转化大肠杆菌Rosetta（DE3）感受态细胞中,并进行IPTG诱导表达及Western blotting鉴定。对获得的重组融合蛋白进行可溶性分析,经变性、镍柱亲和纯化、复性后得到纯化的融合蛋白,将其免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体。结果显示,试验成功克隆大小约为576 bp的NLRP6基因序列,经鉴定重组质粒pET-32a-NLRP6构建正确,通过IPTG诱导获得大小约34 ku的NLRP6重组融合蛋白,Western blotting分析表明其与小鼠抗6×His单克隆抗体呈阳性反应。可溶性分析结果显示,NLRP6重组融合蛋白以包涵体形式存在,约占95%。纯化的NLRP6重组融合蛋白免疫BALB/c小鼠获得多克隆抗体,经Western blotting分析显示出特异性反应。本试验成功制备了具有免疫原性的NLRP6蛋白及其鼠源多克隆抗体,为NLRP6蛋白生物学功能及相关疾病致病机制研究提供了基础材料。  相似文献   

甘薯源库发育及产量品质对氮源和施氮量的响应     

王宁  孟亚依  姚剑锋  王学彧  李玉鹏  邓宝妮  李永忠  司成成 《热带作物学报》2024,(1):77-86

通过大田试验研究氮源、施氮量及其互作对鲜食型甘薯鸣门金时全生育期源库发育及其与产量和品质形成的关系。结果表明：施氮提高了栽后70～110 d功能叶叶绿素(Chl)含量和净光合速率(Pn),提高了单株结薯数、平均单薯重和产量,显著增加了可溶性糖(soluble sugars, SS)、蔗糖、可溶性蛋白(soluble proteins, SP)、多酚和维生素C(VC)的含量,显著降低了淀粉的含量。在相同氮源下,栽后30～120 d,茎和叶鲜重随施氮量增加而显著增加;平均单株结薯数、平均单薯重和平均单株薯重随施氮量增加先增加后降低,在施氮量120 kg/hm²时最大;T/R(Top/Root)随施氮量的增加先降低后升高,在施氮量120 kg/hm²时最低;施氮量120 kg/hm²的单株结薯数和产量最高。在高产施氮量120kg/hm²下,与酰胺态氮素和硝态氮素相比,铵态氮素在栽后70～110d显著提高了Chl含量和Pn;栽后30d显著提高了叶和茎鲜重;栽后30～120 d显著提高了单株结薯数;栽后60～...  相似文献   

宛麦18的生理特性及其与产量性状的关系     

李玉鹏  郑明燕  李金良  张明辉  曹枫  李冬 《麦类作物学报》2015,35(5):662-666

为了解小麦品种宛麦18高产的原因,以周麦22、内麦988和新麦19为对照,在高产麦田对宛麦18的生理特性及产量构成进行了研究.结果表明,宛麦18在灌浆期具有较高的叶面积指数、较稳定的净光合速率和灌浆速率,并且光合功能期长.宛麦18具有较多的次生根,根系吸收功能较强,营养物质积累量大.宛麦18较内麦988和新麦19相比分别增产21.3％和22.9％,差异达到显著水平.宛麦18的有效穗数和穗粒数与3个对照差异不显著,但千粒重显著高于内麦988和新麦19.说明生育后期较高的灌浆速率、光合性能、根系活力是宛麦18有较大千粒重,进而获得高产的重要原因.  相似文献