欧李ChPSY基因的原核表达     

陈俊奇  王鹏飞  杜俊杰  李润丰  洪文泓  李佩  马精选  张建成 《山西农业科学》2012,40(12)

为了解欧李果实类胡萝卜素合成过程中八氢番茄红素合成酶基因的作用和功能,将从欧李成熟果实中分离的ChPSY cDNA序列,连接到原核表达载体pET-28a(+),导入大肠杆菌BL21(DE3)体内诱导表达。SDS-PAGE分析表明,1.0 mmol/LIPTG诱导4 h,表达了相对分子量约为45.8 kD融合蛋白产物;IPTG的浓度和诱导时间优化表明,1.2 mmol/LIPTG诱导6 h时,融合蛋白的表达量最大。此外,Western-blot试验证实,表达的融合蛋白能与抗6×His的单抗发生特异性反应。这为欧李八氢番茄红素合成酶基因ChPSY生物学功能的深入研究奠定了基础。  相似文献   

欧李八氢番茄红素合成酶cDNA克隆、序列分析及在大肠杆菌中的功能表达     

张建成  杜俊杰  刘和  王鹏飞  薛晓芳  穆霄鹏  陈俊奇 《中国农业科学》2011,44(23):4848-4857

 【目的】克隆、分析欧李[Cerasus humilis（Bge）Sok]八氢番茄红素合成酶（phytoene synthase,PSY）基因,并利用大肠杆菌异源表达体系验证其功能。【方法】以欧李果实中分离的总RNA为模板,通过RT-PCR扩增到PSY cDNA中间片段,再利用RACE技术获得该基因cDNA全长并分析其序列;然后利用PCR技术获得欧李PSY cDNA编码区全长,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+),获得重组质粒pET-ChPSY,转化大肠杆菌BL21（DE3）诱导表达,并利用工程菌株验证融合蛋白6×His-PSY的催化活性。【结果】欧李PSY cDNA全长1 559 bp,最大开放读码框为1 194 bp,可编码398个氨基酸,命名为ChPSY。核酸序列及其推导的氨基酸序列与已知其它植物PSY核酸、氨基酸序列之间的相似性分别在70%和65%以上,并且发现欧李PSY的N末端存在1—55个氨基酸残基组成的转运肽信号序列,在37—58和219—240氨基酸区域包含2个跨膜结构域。SDS-PAGE分析表明,原核表达获得了具有较高表达水平的融合蛋白6×His-PSY,相对分子量约为45.8 kD。通过大肠杆菌异源表达证实ChPSY可编码一个功能蛋白,促进工程菌株中β-胡萝卜素含量增加。【结论】该研究成功地克隆了欧李PSY cDNA全长并在大肠杆菌中功能表达,为进一步研究该酶蛋白特性和欧李果实类胡萝卜素的合成机制奠定了基础。  相似文献   

甘肃省农村沼气建设后续管理服务运行机制和政策扶持情况调研报告——对提高甘肃省沼气后续服务网点运行成效的思考     

陈俊奇  郦凯 《甘肃农业》2014,(8):40-41,46

为全面了解全省沼气后续服务状况,掌握各地农村能源服务网点运行机制和政策扶持情况,努力提高全省农村能源后续服务管理水平,甘肃省农村能源办公室对全省农村沼气后续服务网点运行和政策扶持情况进行了调查研究,以期对农村沼气后续服务管理工作起到指导作用。  相似文献