柔嫩艾美耳球虫微线4N端蛋白序列分析与真核表达     

王黎霞  张鹏  张建军  安健 《北京农学院学报》2021,36(3):62-66

[目的]为了获得重组柔嫩艾美耳球虫微线4N端蛋白.[方法]根据Genebank设计柔嫩艾美耳球虫微线4N端基因特异引物,RT-PCR扩增该基因,经Blast与Genebank公布的该基因比对,而后构建该蛋白的真核表达载体pPICZaA/EtMIC4N,用毕赤酵母表达系统小规模表达该蛋白,利用SDS-PAGE和Western Blot对表达的蛋白鉴定,再以摇瓶的方式进行大规模表达.[结果]RT-PCR扩增获得柔嫩艾美耳球虫微线4N端基因序列,大小为773 bp,经比较,与目的基因开放阅读框相似度99.5％,其中有4个碱基发生突变,1个gap.PCR证实成功构建真核表达载体,电转后的毕赤酵母用甲醇诱导表达,SDS-PAGE和Western Blot发现在上清中有45 kD的条带,说明成功表达该蛋白,且该表达系统可持续获得较高纯度的目的蛋白,以摇瓶的方式进行大规模表达,每升能够纯化到约10 mg的目的蛋白.[结论]毕赤酵母成功表达重组柔嫩艾美耳球虫微线4N端蛋白,为该蛋白免疫原性的研究奠定基础.  相似文献   

鸡急性马杜拉霉素中毒的实验病理学研究     

安健  王黎霞 《中国兽医科技》2001,31(12):34-35

以28日龄鸡为试验动物，在饲料中添加不同剂量马杜拉霉素（0、5、6、7、8、9和10mg/kg)，对实验性马杜拉霉素中毒鸡的临床症状、剖检变化和组织病理学变化进行观察。结果马杜拉霉素急性中毒鸡表现腹泻、食欲下降、渴欲增加，翅膀下垂、腿无力或麻痹；剖检可见病鸡肝淤 血、轻度肿胀、呈微黄色；病理组织学变化为肝脂肪变性及心肌和腿肌出血。  相似文献   

低温诱导堆型艾美耳球虫3-1E基因的可溶性表达   总被引：1，自引：0，他引：1  

姚鹏  张建军  王黎霞  安健 《北京农学院学报》2012,27(2):39-42

设计合成特异引物应用RT-PCR技术扩增堆型艾美耳球虫的3-1E基因。通过EcoRⅠ和NotⅠ双酶切,基因连接到表达载体PET28a上,转化入Escherichia coli BL21(DE3)感受态细菌,挑取阳性菌落。经过双酶切和测序鉴定,证明含目的基因的表达载体PET28a构建成功。低温(16℃)诱导表达,经过SDS-PAGE和We-stren Bolt鉴定,表明此蛋白以可溶蛋白在细菌内表达。在诱导50h,IPTG浓度为0.4mmol/L时目的蛋白表达量最大。  相似文献   

中华绒螯蟹致病性弗氏柠檬酸杆菌的分离鉴定及其药敏特性          下载免费PDF全文

黄晓东  周慧华  安健  杨先乐  曹海鹏 《南方农业学报》2019,50(7):1613-1619

[目的]明确中华绒螯蟹黑鳃病的病原菌及其药敏特性,为该病的临床诊断和防控提供科学依据.[方法]采用传统方法从患黑鳃病的中华绒螯蟹肝胰腺组织中分离病原菌,通过人工回归感染试验确定病原菌的致病性,利用API 20E细菌鉴定系统和16S rRNA序列分析对病原菌进行鉴定,并以K-B药敏纸片扩散法测定其药敏特性.[结果]从患黑鳃病的中华绒螯蟹肝胰腺中共分离获得4株疑似病原菌株(C1、C2、C3和C4),人工回归感染试验结果表明,仅C1菌株感染中华绒螯蟹后出现死亡,死亡率达90%,且试验中华绒螯蟹出现黑鳃、肝胰腺呈浅黄色的病症,与自然发病的症状基本一致.依据C1菌株的生理生化特性及16S rRNA序列分析结果,可确定C1菌株为弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii),其对健康中华绒螯蟹的半数致死剂量(LD50)为2.85×105 CFU/mL.药敏试验结果表明,C1菌株对新霉素、阿米卡星、庆大霉素、链霉素、多西环素、四环素、复方新诺明、氧氟沙星和恩诺沙星等9种抗生素高度敏感,对多粘菌素B中度敏感,对氨苄西林、羧苄青霉素和万古霉素3种抗生素已产生耐药性(不敏感).[结论]弗氏柠檬酸杆菌感染可引起中华绒螯蟹黑鳃病,且对中华绒螯蟹具有较强毒力,实际养殖生产中可选用新霉素、多西环素等渔用抗生素进行防治.  相似文献   

低温诱发肉鸡腹水综合征过程中缺氧诱导因子-1α的动态表达     

乔尚怡  郑新枫  王静  许中衎  李畅  安健  张建军 《北京农学院学报》2018,33(3):49-52

【目的】通过测定环境低温诱发AS发生发展过程中缺氧诱导因子-1α表达的动态变化,初步探讨HIF-1α与AS发生发展之间的关系。【方法】100只商品代肉公雏,15d时随机分为常温对照组(22~24℃)和低温组(9~11℃)。各组在22、29、36和43d随机选取6只鸡,测定mPAP、AHI和心、肺组织中HIF-1αmRNA的表达量,试验结束后统计腹水发生率。【结果】低温组AS发生率(22%)显著高于对照组(4%)(P0.05);低温组肉鸡mPAP和AHI显著或极显著高于对照组(P0.05,P0.01);低温组肉鸡心脏HIF-1αmRNA表达量显著或极显著(P0.05,P0.01)增加;肺脏HIF-1αmRNA表达量类似于同时间点的心脏。【结论】低温诱发AS发生过程中,肉鸡心脏和肺脏HIF-1α表达量明显增加,可能参与肉鸡AS的发生发展。  相似文献   

环境因子对条斑紫菜壳孢子放散和附着的影响     

安健  陈百尧  路吉坤  郑义  唐兴本  伏光辉  张祖禹 《水产养殖》2018,(8)

正条斑紫菜是黄渤海沿海主要栽培种类,而江苏连云港是主产区,从苗种生产、海上养殖到紫菜加工,形成了一条完整的产业链,产业商业化程度较高~([1-3])。条斑紫菜壳孢子作为紫菜叶状体的苗源是人工育苗的关键,壳孢子的质量、放散的数量、附着效果直接影响到紫菜育苗效果,从而对紫菜苗种质量和养殖产量造成影响。因此开展对紫菜采苗期间,壳孢子放散和附着研究非常必要。2017年9月28日—10月20日,在连云港市  相似文献   

不同隔离网模式对鱼虾混养效果的影响     

唐兴本  陈百尧  薛学坤  徐中兵  安健  龚琪本 《水产养殖》2014,(5):9-12

<正>南美白对虾又称凡纳滨对虾,与斑节对虾、中国对虾并列为世界养殖产量较高的三大优良虾种,目前南美白对虾养殖在国内多个省份普遍展开的同时,病害也多有发生。在南美白对虾越来越难养的情况下,连云港市对虾综合试验站在试验示范基地,吸取别人的经验[1],先后开展了多项南美白对虾养殖试验、示范[2,4,5],设置平行隔离网和设置"U"型隔离网分别混养南美白对虾与鲤鱼、黄金鲫,利用生物防控原理有效的控制了对虾的病害,增加了南美白对虾的产量和品质,本文主要介绍两种不同隔离网模式对鱼虾混养效果的影响。  相似文献   

对虾池塘投放不同规格黄金鲫养殖增效探讨     

薛学坤  陈百尧  唐兴本  徐中兵  安健  龚琪本 《水产养殖》2014,(5):22-24

<正>近年来,南美白对虾病害日趋严重,养殖效益不稳定,以桃拉病毒病、红体病和白斑病等为主的对虾流行病的暴发已经成为发展南美白对虾养殖业的制约因素。南美白对虾病害的防控是近年来国家虾产业体系的重点任务之一。连云港市对虾综合试验站根据国家虾产业体系的有关要求,吸取别人的经验[1,2],在试验示范基地开展了多项生物防控南美白对虾病害试验[3,5-7],本文主要介绍内容是在南美白对虾混养池塘内投放不同规格的黄金鲫苗种,对池塘的养殖效果进行对比分析。  相似文献   

柔嫩艾美耳球虫MIC4-N的真核表达   总被引：2，自引：1，他引：1  

王卫婷  姚鹏  周赛  王黎霞  安健 《北京农学院学报》2011,26(3):24-27

应用RT-PCR技术扩增柔嫩艾美耳球虫的MIC4-N端基因并去掉信号肽,为了表达检测和纯化的方便,设计引物时改变了3＇端的终止密码子,使MIC4-N的C末端带有c-myc和6His抗原标签。通过双酶切,使加工好的MIC4-N基因连接到毕赤酵母表达载体pPICZαA上,转化JM109感受态细胞。再经EcoRⅠ与NotⅠ双酶切、菌落PCR及测序鉴定,证明目的基因与真核表达载体pPICZαA构建成功,单酶切重组表达载体、电转转入GS115酵母感受态细胞中。用含高浓度Zeocin的YPD平板筛选酵母菌落,菌落PCR法鉴定转化成功的阳性菌,在BMMY培养基中摇瓶培养,并用甲醇诱导,经SDS-PAGE及Western Blot鉴定,蛋白分泌表达成功。  相似文献   

猪密螺旋体痢疾的诊断方法研究进展   总被引：1，自引：0，他引：1  

王黎霞  张伟  安健 《北京农学院学报》2011,26(2):78-80

猪痢疾是由猪痢疾密螺旋体引起的一种肠道传染病,其特征是大肠黏膜发生卡他性炎、出血性炎,继而引发纤维素性坏死性炎,呈现黏液性、出血性下痢,该病属二类传染病,给养猪业造成很大损失,临床上,已成为危害养猪业比较严重的传染病之一,从病原学诊断、流行病学诊断、临床诊断、血清学诊断、分子生物学诊断和病理学诊断等方面加以综述。  相似文献