一株粗糙型牛种布鲁氏菌诱导株的构建及鉴定     

孙浩杰  任小侠  秦玉明  朱良全  蒋卉  孙石静  丁家波  辛凌翔  王楠  李晓宁  李巧玲  毛开荣  蔡亚南  徐磊 《中国畜牧兽医》2020,47(11):3445-3453

本试验旨在研究布鲁氏菌病疫苗的新型研制方法，并通过op诱导剂成功诱导出一株粗糙型牛种布鲁氏菌弱毒株，命名为RB71。试验检测了RB71相关基因的缺失情况，并对其脂多糖完整性、生长特性、遗传稳定性以及在小鼠巨噬细胞（RAW264.7）中生存能力等与光滑型菌株进行了比较研究。结果显示，试验成功获得了诱导突变株，其缺失片段大小为15 070 bp；热凝集试验阳性，能被结晶紫染色，吖啶黄凝集试验阳性；对提取脂多糖进行银染，结果显示O链缺失，诱导株RB71脂多糖不完整；连续传代30次，PCR检测未发现基因回复突变；在体外相同培养条件下，诱导株RB71生长速度显著低于亲本株A19；入侵RAW264.7细胞72 h时，其胞内存活率与亲本株相比极显著下降（P<0.01）。综上所述，本试验开发出一种能高效诱导光滑型布鲁氏菌变异为粗糙型布鲁氏菌的试剂及诱导方法，成功获得一株具有良好遗传稳定性的粗糙型减毒布鲁氏菌RB71诱导株，该诱导株在RAW264.7细胞内的存活能力显著变弱，这为新型弱毒布鲁氏菌粗糙型疫苗的研制奠定技术基础。  相似文献   

原虫感染对宿主免疫应答的影响     

赵丽娟  祝学珍  唐磊  秦亚  孙浩杰  蔡亚南 《黑龙江畜牧兽医》2018,(15)

原虫感染可引起严重的肠道黏膜免疫应答,其侵入机体时,会触发机体的固有免疫应答和适应性免疫系统反应,包括诱导特异性抗体的产生以及效应T淋巴细胞的形成。T淋巴细胞包括CD_4~+和CD_8~+两大类,CD_4~+为辅助性T淋巴细胞,通过膜表面分子及其所分泌的细胞因子辅助并调控B淋巴细胞和巨噬细胞的活化与功能;CD_8~+是杀伤细胞,也是肠道上皮细胞主要表达因子,功能与自然杀伤细胞相似,可以与被感染上皮细胞接触将其杀死。B淋巴细胞主要功能是制备抗原特异性抗体,发挥体液免疫作用。文章将从两方面论述原虫与机体免疫应答之间的相互调节作用。  相似文献   

羊种布鲁氏菌WadC基因缺失株的构建与鉴定     

孙浩杰  徐磊  孙佳丽  丁家波  毛开荣  蔡亚南  王楠 《中国畜牧兽医》2020,47(12):3852-3860

试验旨在分析糖基转移酶编码基因WadC影响布鲁氏菌胞内存活的作用。以羊种布鲁氏菌Rev.1基因组为模板,通过同源重组方法获得WadC基因上、下游同源臂融合片段,并与载体pUC19-SacB连接,构建pUC19-SacB-ΔwadC重组载体,电转至羊种布鲁氏菌Rev.1,构建ΔwadC缺失株（Rev.1ΔwadC）,检测菌株Rev.1ΔwadC的遗传稳定性,比较分析亲本株Rev.1和缺失株Rev.1ΔwadC的生长特性及其在BMDC和RAW264.7细胞中的生存能力。结果显示,试验成功构建基因缺失株,连续传代30次未发现基因回复突变;在体外相同培养条件下,缺失株Rev.1ΔwadC与亲本株Rev.1生长趋势相似,均在20 h到达对数生长期,44 h进入平台期;侵染BMDC细胞48和72 h时,其胞内存活率显著低于亲本株（P<0.05）;而侵染小鼠RAW264.7巨噬细胞试验显示,亲本菌株和基因缺失株无显著性差异（P>0.05）。综上所述,本试验成功构建并获得了具有良好遗传稳定性的布鲁氏菌WadC基因缺失株,该缺失株在体外培养条件下与亲本株生长趋势相似;但该缺失株在BMDC细胞内的存活能力显著变弱,为深入研究布鲁氏菌WadC基因功能奠定基础。  相似文献   

农民专业合作经济组织利益分配机制   总被引：4，自引：0，他引：4  

孙浩杰  王征兵  汪蕴慧 《安徽农业科学》2011,39(20):12505-12507

在对青岛胶南市进行实地调研的基础上,剖析了农民专业合作经济组织利益分配机制：一是利益关联以契约关联为主;二是利润分配以股金分红为主;三是惠顾额返还具有多种内涵;四是公共积累尚未量化到个人;五是政府扶持资金界定模糊。在此基础上提出了农民专业合作经济组织利益分配格局改进的措施：一是改革产权结构,实现农户所有;二是改变决策方式,实现农户控制;三是增加交易额返利,实现农户受益;四是量化公共积累和政府扶持资金。  相似文献   

浅议新时期村干部在农村基础设施建设中的作用     

汪蕴慧  李录堂  王征兵  孙浩杰 《安徽农业科学》2006,34(19):5073-5074

农村基础设施建设是建设社会主义新农村的重要内容,作为国家“代理人”,村民“代言人”的村干部在农村基础设施建设中有着不可忽视的重要作用。从村干部的职能转变入手,分析了新时期村干部在农村基础设施建设中的作用并提出了相关的政策建议。  相似文献   

农民专业合作经济组织政府扶持评价指标体系构建     

孙浩杰  王征兵  汪蕴慧 《安徽农业科学》2011,39(24):15051-15053,15056

在阐述农民专业合作经济组织评价指标体系设计必要性的基础上,按照系统学原理,结合统计学和数量经济学的方法,构建了组织发展指标、社员发展指标和社会发展指标3个1级指标和合作组织的资产总额、合作组织的年分配利润总额、合作组织的年总收入等13个2级指标的指标体系,采用层次分析法计算得到各指标的权重并进行了一致性检验,建立了运行效果评价模型,计算得到指标标准值和综合得分。根据综合评分结果,建议应该因地制宜,对不同发展程度和规范程度的农民专业合作经济组织进行有层次、有针对性的系统扶持。通过指标体系的构建及综合得分,最后提出政府应在扶持农民专业合作社经济组织发展过程中应建立常规的进入与退出机制,合理引导合作者的快速发展。  相似文献   

犬细小病毒河南株的分离鉴定及全基因组序列分析     

唐磊  张弛  秦亚  孙浩杰  张楠  张百惠  蔡亚南  魏战勇 《河南农业科学》2019,48(5)

为了研究河南省当前犬细小病毒(Canine parvovirus,CPV)的流行情况,收集经CPV胶体金试纸检测阳性的病犬血便病料,对其处理后进行特异性PCR扩增,然后将粪便处理物经滤器过滤后接种于F81细胞,进行细胞盲传并观察细胞的病变情况,同时对病毒进行理化性质及血凝试验等检测,最后对病毒的全基因组进行测序。结果表明,该病毒经特异性PCR扩增初步鉴定为CPV,接种于F81细胞盲传2代后,出现明显细胞病变。全基因组测序显示,该病毒分离株基因组全长5 052 bp,其中包含U型发卡结构188 bp,Y型发卡结构120 bp。此外,其ORF1全长2 007 bp,能够编码非结构蛋白NS1,ORF2全长2 257 bp,能够编码结构蛋白VP1、VP2。经VP2氨基酸序列分析,鉴定其为New CPV-2b亚型,命名为CPV/HN1,该病毒分离株TCID_(50)为10~(-4.85)/0.1 mL,血凝效价为1∶256。与国内的17株参考毒株全基因组序列核苷酸同源性为96.4%～99.9%,其中与北京分离毒株同源性为99.9%。  相似文献