蓝舌病病毒VP7蛋白的原核表达及免疫原性鉴定     

贾赟  王贞钧  孙铭英  张雪  张永宁  栾慎顺  王全凯  孙颖杰 《中国畜牧兽医》2015,42(8):2000-2005

为获得蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV)25型的VP7原核表达蛋白,本试验以蓝舌病病毒重组质粒为模板,PCR扩增VP7基因,将其克隆于pET-24b(+)表达载体中,获得pET-24b-BTV-VP7重组质粒。经酶切和测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3)受体菌,IPTG诱导表达His-BTV-VP7蛋白。在变性条件下用镍亲和层析柱纯化His-BTV-VP7蛋白,经Western blotting及ELISA鉴定其免疫原性。结果显示,His-BTV-VP7蛋白以包涵体形式表达,大小约为40 ku;Western blotting和ELISA检测此原核表达蛋白能与山羊阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫原性。本研究为后续建立蛋白芯片检测方法奠定了基础。  相似文献   

水貂阿留申病毒地方强毒株ADV-LN的分离鉴定     

贾赟  李艳伍  孙铭英  张雪  张岩岩  宋大贺  刘钊  王全凯  孙颖杰 《中国畜牧兽医》2016,43(6):1597-1603

本研究采用对流免疫电泳方法(CIEP)检测辽宁水貂养殖场疑似水貂阿留申病毒(aleutian mink disease virus,ADV)水貂血清抗体,采集抗体阳性水貂的肝脏、脾脏、肾脏和肠系膜淋巴结组织,电镜观察存在细小病毒样颗粒。组织液研磨无菌处理后,接种CRFK细胞,盲传6代,取病毒细胞分离液用PCR方法检测,呈ADV阳性。将病毒分离液纯化后接种健康水貂,隔离观察,接种后3 d即出现食欲减退,贫血,被毛无光泽,后期出现拒食、狂饮、死亡,个别水貂出现神经症状,表现抽搐、痉挛、步态蹒跚、共济失调,证明分离获得的病毒为ADV强毒株,命名为ADV-LN株。  相似文献   

进境鱼传播传染性造血器官坏死病风险分析模型的建立     

吴斌  孙铭英  于畅  蔡晓萍 《鲑鳟渔业》2014,(4):56-59

世界动物卫生组织(OIE)将传染性造血器官坏死病(IHN)列为必须报告的动物疫病,我国将其列为二类动物疫病。本文运用风险分析理论,从危害确定(流行地区、传播方式和传染源、临床症状和潜伏期、发病机理及病理变化等)、传入概率、社会经济危害、风险管理(产地选择、时间限制、预防免疫、实验室检疫等)和风险交流(主要为检疫系统评价)等角度切入,建立了进境鱼传播IHN的风险分析模型。风险分析结果:从IHN流行地区进口一尾鲑传入IHN的概率为4.2×10-3。  相似文献   

小反刍兽疫病毒核蛋白的原核表达及免疫原性分析     

张雪  贾赟  孙铭英  张永宁  栾慎顺  刘钊  孙颖杰  包永明 《中国农学通报》2016,32(23):27-31

为了获得小反刍兽疫病毒特异性抗原N蛋白,用于检测血清中抗小反刍兽疫病毒抗体的检测方法的建立,本文根据GenBank中已发表的小反刍兽疫病毒(PPRV)N蛋白核苷酸序列,设计引物,扩增N基因。扩增片段通过NdeI和NotI酶切位点插入表达载体pCold I。重组蛋白通过pCold I载体转化,在大肠杆菌BL21(DE3)中实现了原核表达,表达产物经SDS-PAGE和Western Blotting检测表明,表达产物为58kDa的融合蛋白,可被PPRV感染动物血清识别,重组蛋白具有良好的反应原性。用纯化的重组N蛋白作为包被抗原,建立了检测PPRV血清的间接ELISA方法,与国外标准ELISA试剂盒的符合率达98.3,为建立快速检测小反刍兽疫病毒抗体检测方法奠定了基础。  相似文献