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金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是革兰氏阳性菌,可以引起人和动物感染化脓性疾病及毒素性疾病。S.aureus能够附着在一些医用器材上和宿主组织中,建立成熟的生物被膜(Bacterial biofilm,BF),从而引起持续性感染。细菌生物被膜一旦形成,不仅保护细菌免受宿主吞噬细胞的杀伤作用,而且对抗菌药物的耐药性增强,同时细菌对低氧、低营养环境的耐受性也增强,这是细菌适应环境的一种自我保护形式,使对其的临床治疗变得更加困难。所以,研究S.aureus生物被膜的形成及调控机制,对预防与治疗S.aureus引起的感染具有重大意义。 相似文献
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旨在揭示金黄色葡萄球菌针对β-内酰胺类抗生素可能存在细胞壁增厚的耐药机制。2016-2018年间，采集宁夏地区部分奶牛养殖场临床及亚临床型乳腺炎的乳样，通过显色培养基鉴别、镜检及PCR方法，分离鉴定牛乳源金黄色葡萄球菌；利用微量肉汤稀释法测定细菌对14种抗菌药物的耐药性，了解本地区金黄色葡萄球菌的耐药率及多重耐药情况；通过qRT-PCR方法检测细胞壁增厚相关的pbpB、murG、glmU、atlR基因转录丰度，并结合透射电镜进行形态观察，以确定增厚及发生原因。结果显示，分离鉴定出261株牛乳源金黄色葡萄球菌，其中包括9株耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant Staphylococcus aureus，MRSA）。药敏试验结果显示，金黄色葡萄球菌对β-内酰胺类抗生素具有较高的耐药率，其中氨苄西林为79.69%，青霉素为78.54%。多重耐药情况是以3、7和8重耐药的菌株居多；其中1株耐药种数达14种之多。qRT-PCR结果表明，4种相关基因的转录丰度均极显著上调（P<0.001或P<0.01）。透射电镜观察发现，甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌（methicillin sensitive Staphylococcus aureus，MSSA）JY21菌株的细胞壁在64和128 μg·mL-1的青霉素浓度下，较对照组均极显著增厚（P<0.001），并可见细胞壁表面粗糙，有结节状凸起；但药物浓度从64 μg·mL-1升高至128 μg·mL-1细胞壁不再显著增厚（P>0.05）。MRSA WLD10菌株细胞壁未出现明显增厚（P>0.05）。综上所述，本地区牛乳源金黄色葡萄球菌针对β-内酰胺类抗生素，存在细胞壁增厚的耐药机制；增厚的原因主要是肽聚糖的过度合成及细胞自溶的减少。与MSSA JY21菌株相比，细胞壁增厚并非MRSA WLD10重要的耐药机制。 相似文献
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旨在深入了解宁夏地区牛源金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus, SA)所产生β-内酰胺酶的进化及结构特征并揭示其作用方式。分别以药敏试验和PCR方法检测5种β-内酰胺类药物耐药情况和耐药基因;通过生物信息学手段对检出的β-内酰胺酶BlaZ作进化分析及结构功能预测;利用分子对接和动力学模拟,分析BlaZ的作用方式。结果表明,青霉素类药物的耐药率明显高于头孢菌素;blaZ基因检出率为82.37%,并检出SA中较少报道的blaZTEM-1基因,检出率为26.05%;进化分析可知,BlaZ属于A型β-内酰胺酶,包含63个重要且承受进化压力的踪迹残基;分子对接发现,BlaZ易与青霉素类药物及阿维巴坦等抑制剂结合并形成稳定复合物;动力学模拟显示,BlaZ的结构柔性小于同型酶TEM-1和TEM-52,其中Ω-loop区域柔性存在差异(P<0.05)且能影响与药物的作用,即该区域柔性与结合活性呈正相关;BlaZ分别与氨苄西林和头孢噻呋结合时结构稳定性差异显著(P<0.05)。宁夏地区牛源SA产生的β-内酰胺酶BlaZ属A型,并从菌株中检出blaZTEM-1基因;BlaZ对青霉素类药物的结合活性高于头孢菌素且易于结合阿维巴坦等抑制剂,其中Ω-loop区域的结构柔性是BlaZ与药物结合活性的重要影响因素。 相似文献
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金黄色葡萄球菌是引起奶牛细菌性乳腺炎的主要原因，生物被膜的形成是金黄色葡萄球菌在不利环境条件下持久性存在的关键因素。探索同一株菌在生物被膜态与浮游态生长状态下的耐药性与其生长状态的相关性，可为进一步探究金黄色葡萄球菌的耐药性机制奠定基础。本研究培养了金黄色葡萄球菌的生物被膜，使用光学显微镜和扫描电镜观察其形成过程。测定并比较了9种抗菌药物对32株金黄色葡萄球菌在生物被膜态和浮游态的最小抑菌浓度，并对两种状态下的金黄色葡萄球菌进行转录组学测序，筛选出具有显著性差异的细胞信号通路和表达基因，同时对主要差异表达的基因进行RT-qPCR验证。结果发现，在生物被膜形成前期，随着培养时间的延长，显微镜下观察到的生物被膜态菌聚集面积越来越大，结构也越来越紧密，培养至72 h后，生物被膜逐渐开始分散。MIC测定结果显示浮游态菌的抑菌浓度低于生物被膜态菌。转录组结果显示两种状态菌的差异表达基因共1 512个，其中，生物被膜态菌中上调基因760个，下调752个。GO与KEGG富集分析显示，相比于浮游态菌，生物被膜态菌中与代谢相关的通路显著富集，其次为氨基酸的生物合成和ABC转运蛋白通路。与生物被膜形成相关的基因，如编码ABC转运蛋白的基因表达上调，而与代谢途径相关的基因下调。RT-qPCR验证了10个主要差异基因，其表达差异趋势与转录组测序结果一致。这些差异可能对金黄色葡萄球菌生物被膜态的高耐药性和细菌毒力的研究有所帮助。 相似文献
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家畜相关耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(livestock-associated methicillin-resistant Staphylococcus aureus,LA-MRSA)在畜牧业和动物性食品中多次被检测到，可以向人群传播，造成严重的公共卫生问题，因此研究其耐药性、毒力因子的表达与调控对LA-MRSA的防治及后续药物的开发具有重要意义。本研究以宁夏规模化奶牛养殖场乳腺炎患牛牛乳中分离出的9株LA-MRSA为试验对象，通过抗菌药物敏感性、生物被膜形成能力检测和细菌体外侵袭力试验筛选出具有高耐药、高毒力特征的LA-MRSA菌株，结合本实验室前期LA-MRSA分子分型结果，鉴定出1株具有高毒力特征的代表菌株，然后将代表菌株和标准菌株ATCC 33591进行转录组测序(RNA-seq)分析，最后通过RT-qPCR验证RNA-seq结果准确性。高毒力LA-MRSA鉴定结果显示，9株LA-MRSA中编号为D10的菌株对13种抗菌药物耐药，且生物被膜形成能力、体外侵袭力较强，具有高耐药、高毒力特征。RNA-seq分析结果显示，与标准菌株相比，D10株存在大量差异表达基因(differenti... 相似文献
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