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为研究融合表达肿瘤靶向肽(RGD)和蜂毒肽(MEL)双基因重组减毒沙门氏菌对小鼠黑色素瘤B16细胞的体外抑瘤作用,本实验将RGD-MEL基因片段克隆至pEGFP-N1载体,将重组载体导入减毒沙门氏菌LH430,构建了重组沙门氏菌LH430/pEGFP-RGD-MEL,经PCR技术、质粒双酶切鉴定后采用阳性重组菌株侵染体外培养的小鼠黑色素瘤B16细胞,提取细胞总RNA经反转录后采用PCR检测目的基因RGD-MEL转录情况,western blot检测目的蛋白RGD-MEL以及凋亡蛋白Caspase-3、Bcl2、Bax的表达;流式细胞术检测B16细胞凋亡情况。结果显示:导入RGD-MEL基因的减毒沙门氏菌LH430侵染B16细胞后,目的基因RGD-MEL高效表达;经重组菌株侵染的B16细胞凋亡蛋白Caspase-3、Bcl2、Bax表达水平均显著增高(p<0.05);重组沙门氏菌诱导B16细胞的凋亡作用较PBS组显著增强(p<0.05)。本研究为细胞穿膜肽和细菌联合治疗肿瘤提供实验支持,并为后续动物试验奠定了研究基础。 相似文献
2.
为了构建高效低毒的新型抗菌肽,将抗菌肽Eumenitin及其序列修饰后获得4条新型短肽的毕赤酵母真核表达载体,采用生物信息学方法对Eumenitin及其衍生肽的理化参数进行预测,基因序列经毕赤酵母密码子优化后,克隆至pMD19T-simple载体上,鉴定后连接至毕赤酵母表达载体pGAPZαA上,构建的重组表达质粒经Avr Ⅱ线性化后,电转化至毕赤酵母GS115感受态细胞中,涂布于YPDSZ平板上,进行表型筛选和高拷子筛选,并对5条短肽的溶血率进行测定。结果显示:Eumenitin及其衍生肽均为较稳定的疏水性多肽,空间结构以α螺旋为主,且序列中不含有信号肽。经PCR、双酶切鉴定和核苷酸序列测定,成功构建了5条短肽的毕赤酵母重组表达载体,经设计改造后的抗菌肽溶血性均较低。本研究结果为后续进行重组蛋白的表达以及抑菌活性研究奠定了基础,以期获得抗菌活性强、溶血性低、高表达的新型抗菌肽。 相似文献
3.
乳腺是一个高度活跃的器官,在青春期和生殖周期中,其上皮细胞发生了极大的变化。这些变化是由专门的干细胞和祖细胞推动的。研究乳腺干细胞对动物乳腺发育、哺乳和乳腺癌等方面都有着重大意义。如今,在乳腺干细胞生物学研究方面已经取得了显著进步。乳腺干细胞是组织学上未分化的上皮细胞,可以对称分裂产生两个相同的干细胞,或不对称地产生一个干细胞和一个腔上皮祖细胞或基底/肌上皮祖细胞。通过标记滞留细胞、染料排斥法、干细胞抗原-1标记、细胞表面标记物标记以及谱系示踪等方法可以鉴定出多种不同类型的乳腺干/祖细胞,应用多种不同方法分离鉴定乳腺干细胞有助于深入了解其异质性。乳腺的研究主要分为6个阶段：胚胎期、青春期、性成熟期、妊娠期、泌乳期和退化期。在乳腺不同发育阶段,乳腺干/祖细胞的类型及特性不同。有研究表明,在胚胎期就有基底和管腔谱系的祖细胞产生,静止的乳腺干细胞也可能来自于胚胎期,出生后,静止干细胞可以在卵巢激素的刺激作用下重新进入细胞周期,产生乳腺细胞谱系和自我更新。作者介绍了乳腺干细胞和祖细胞的存在、形态特征、鉴定方法,简述了乳腺干细胞在胚胎期、青春期和妊娠期的特征,分析了目前该领域研究的不足之处以及对未来应用的展望。 相似文献
4.
为了确诊天津市某规模化猪场送检病猪是否为产气肠杆菌感染,试验采集濒死仔猪十二指肠内容物,对其进行细菌分离培养、革兰氏染色镜检、生化试验、药敏试验,并特异性扩增分离所得菌株16S rRNA基因片段,测序后与GenBank进行BLAST比对。结果表明:该菌株为革兰氏阴性短杆菌,生化反应与肠杆菌科的产气肠杆菌属最相似,对头孢类抗生素敏感而对部分氨基糖苷类和四环素类抗生素耐药,16S rRNA基因片段测序结果与GenBank中产气肠杆菌相似性达99.9%。说明该分离菌株为产气肠杆菌。 相似文献
5.
为了评价融合表达抗菌肽TLN-58和人溶菌酶hLYZ双基因重组表达质粒的安全性,试验采用基因重组法将TLN-58和hLYZ基因片段克隆至pEGFP-N1载体,利用转染试剂GeneTwinTW将构建好的重组质粒转染HEK293细胞,RT-PCR验证重组真核质粒在细胞中表达情况;通过DAPI染色、AO/EB染色、CCK-8检测法和流式细胞术测定并分析hLYZ和TLN-58融合基因表达产物的细胞毒性。结果表明:成功构建重组真核质粒pEGFP-N1-hLYZ-TLN-58,当重组质粒DNA用量为1μg且GeneTwinTW转染试剂用量为3μL时,转染HEK293细胞24 h,为最佳转染条件,重组质粒可成功表达目的基因;DAPI染色和AO/EB染色显示,转染pEGFP-N1-hLYZ-TLN-58质粒组细胞凋亡与对照组相比,无显著性差异;CCK-8试验测定细胞相对增殖率(RGR)为50%~74%,显示重组质粒的细胞毒性较小;流式细胞术检测发现重组质粒转染细胞与对照组细胞在G1、G2和S期所占的比例均差异不显著。结果表明,重组质粒的细胞毒性较小且对细胞周期无显著影响,为抗菌肽TLN-58和hLYZ的安全性及抗菌应用奠定了研究基础。 相似文献
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本文选取1995—2014年四川旅游业和农业发展水平的相关数据,通过构建VAR模型,运用协整检验、格兰杰因果检验等对四川旅游业与农业融合发展关系进行研究,结果表明:四川旅游业与农业间存在着一种长期稳定的均衡关系;农业增加值每增长1%,旅游总收入约增长1.707%;旅游业与农业的融合发展是相互促进的;旅游业波动受自身和农业波动的影响,农业波动主要受自身波动影响。 相似文献
7.
为了找到引起养猪场送检猪发病的原因,试验采用分离培养、革兰氏染色镜检观察、生化试验、16S rRNA基因序列测定及同源性分析、致病性试验和药敏试验等对分离菌株进行了研究。结果表明:分离菌株为革兰氏阳性球菌,其生长特性、菌落特征、生化试验结果与葡萄球菌属中的溶血葡萄球菌基本一致,但在血琼脂培养基上并未出现溶血现象;分离菌株与溶血葡萄球菌L50菌株(KU179371. 1)同源性为99. 9%,且进化程度最相近;分离菌株导致小鼠出现运动迟缓、群聚扎堆等临床症状,并从小鼠体内分离出相同形态特征和菌体特征的菌株;分离菌株对氧氟沙星、米诺环素敏感,对头孢哌酮、多西环素、环丙沙星中度敏感;对青霉素、氨苄西林、头孢唑林等14种药物耐药。说明从病猪体内分离的菌株是存在多重耐药的γ-溶血葡萄球菌。 相似文献
8.
为探讨双启动子调控HN基因重组腺病毒Ad-mTERTp-mTyrp-HN对小鼠黑色素瘤动物模型的抑瘤作用,试验构建B16裸鼠皮下移植瘤模型,采用HEK293细胞扩增重组腺病毒,进行纯化和滴度检测。将重组腺病毒Ad-HN、Ad-mTERTp-HN、Ad-mTyrp-HN、Ad-mTERTp-mTyrp-HN、Ad-GFP和PBS通过尾静脉注射裸鼠,冰冻切片观察裸鼠肿瘤内GFP绿色荧光表达情况,通过肿瘤生长和裸鼠存活情况计算抑瘤率,探究其在体内的抗肿瘤作用。结果显示:重组腺病毒在HEK293细胞中扩增,滴度分别为10^11.250,10^12.250,10^10.625,10^12.125,10^12.250 TCID50/mL;肿瘤组织中能观察到黑色素细胞,证明皮下黑色素移植瘤模型构建成功;重组腺病毒对脏器无损伤,且在双启动子组脏器中没有观察到黑色素细胞的肝肺转移;通过尾静脉注射重组腺病毒后能够在肿瘤中观察到荧光表达;与其他组相比双启动子组重组腺病毒不但能抑制黑色素瘤的生长,而且能延长裸鼠的生存期,抑瘤率为55.5%。因此,该重组腺病毒Ad-mTERTp-mTyrp-HN具有靶向性,并且可以抑制肿瘤生长,可为黑色素瘤的治疗提供参考。 相似文献
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为了解天津地区宠物犬感染皮肤病的发病情况,对天津地区某大型宠物医院2018年3～6月接诊的166例犬皮肤病进行流行病学调查,分别从发病犬的品种、年龄、性别、病原、绝育情况等5个方面进行了统计学分析。结果显示:接诊犬共18个品种,其中,发病率分别为贵宾犬19.28%、中华田园犬15.06%、斗牛犬13.25%;发病年龄以2岁以内的未成年犬居多,占56.02%,2～9岁成年犬及中老年犬发病较少,分别为22.89%和10.24%,10岁以上的老年犬发病率相对较高,为10.84%;雄性占62.65%,较雌性犬易感;病例多为传染性皮肤病,以真菌感染为主,且多为混合感染,其他非传染性皮肤病较少;绝育犬仅为调查总数的7.22%。结果说明天津地区3～6月间犬类的皮肤病以真菌为主,且混合感染居多,幼犬感染占比较大,本研究为宠物临床皮肤病的科学防治提供依据。 相似文献
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为了评价猪传染性胸膜肺炎与猪肺疫二联亚单位疫苗(由多杀性巴氏杆菌外膜蛋白H(OmpH)质粒导入胸膜肺炎放线杆菌(APP)菌影制备)的免疫效果,于某规模化猪场选取30头无上述病原菌和抗体的4周龄(w)仔猪,随机分为安全评估组和试验组进行免疫,试验组包括APP组、OmpH组、APP+OmpH联苗组,分别于4、6 w肌肉注射2 mL/头相应疫苗,采取4、6、9 w外周血,用流式细胞术、ELISA、血常规、血生化试验分析疫苗免疫后,相关免疫因子、免疫细胞及免疫球蛋白的变化。结果显示:APP+OmpH组外周血中CD3+、CD8+细胞增加数量比APP、OmpH组显著增多(P<0.05);血清抗体结果显示,APP+OmpH组结果优于APP和OmpH组;APP+OmpH组的外周血白细胞数、淋巴细胞数、中性粒细胞数、单核细胞数在二免后增多,白蛋白、球蛋白亦明显增加,且APP+OmpH组增加数量多于APP和OmpH组。结论:APP+OmpH组能更好地刺激机体细胞免疫和体液免疫反应,进而发挥免疫保护效果。 相似文献