伪狂犬病病毒gB蛋白抗原表位基因串联构建及原核表达     

王雨  吉艺宽  程艺  向柯宇  张宝石  琚春梅 《中国畜牧兽医》2015,42(4):810-815

本试验通过自行设计两段引物,利用重叠延伸PCR方法,将伪狂犬病病毒(PRV)gB基因两段优势抗原表位序列串联,克隆至pMD18-T载体,测序正确后双酶切连接至pET-32a(+)载体,构建重组质粒;重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)受体菌,经IPTG诱导后,通过SDS-PAGE和Western blotting检测融合蛋白表达情况。经检测,诱导后的重组蛋白获得表达,重组蛋白大小约为54ku,其中串联蛋白大小约为34ku。该重组蛋白可与伪狂犬病病毒gB蛋白单克隆抗体发生特异性反应,表明重组蛋白的抗原性良好。  相似文献   

秦皇岛市青龙县农业供给侧结构性改革调查研究     

高依萌  杨文珂  程艺萌  于国华  徐蕊 《农家参谋》2018,(16)

党和政府多次提出推进农业供给侧结构改革,青龙作为秦皇岛市的农业大县,其改革具有典型意义。通过对相关统计数据的收集、整理并深入实地调研,分析了青龙县农业供给侧结构性改革的背景和现状,提炼出了改革过程中面临的主要问题,进而从找准政策落实着力点、优化农产品生产经营结构、加大农业科技和政策性资金投入力度等四个方面提出了对策建议。  相似文献   

伪狂犬病毒EP0基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达研究   总被引：1，自引：1，他引：0  

孙磊磊  程艺  梁梓森  周慧英  琚春梅 《中国畜牧兽医》2012,39(6):57-60

为了研究EP0蛋白在伪狂犬病毒粒子中的定位及其功能,试验利用PCR从伪狂犬病毒基因组中扩增PRV EP0基因的编码区,克隆至pMD18-T载体,构建重组质粒pMD-EP0。经测序鉴定正确后,用EcoRⅠ和Hind Ⅲ双酶切pMD-EP0,回收EP0基因与经同样双酶切处理的pET-32a(+)进行连接,构建重组质粒pET-EP0。将pET-EP0转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导后,通过SDS-PAGE和Western blotting检测融合蛋白的表达情况及反应原性。结果表明,成功扩增得到EP0基因编码区序列,大小为1227 bp;重组表达质粒 pET-EP0经诱导后,EP0融合蛋白获得了表达,大小约为75 ku,主要以包涵体形式存在,且能与伪狂犬病毒阳性血清反应。  相似文献   

伪狂犬病病毒gE基因主要抗原表位区的原核表达及间接ELISA方法的建立     

吉艺宽  王雨  程艺  张宝石  向柯宇  琚春梅 《华南农业大学学报》2015,36(4):11-15

【目的】为了区分伪狂犬病病毒疫苗免疫猪和自然感染猪,建立快速诊断的方法.【方法】利用PCR方法从伪狂犬病病毒中扩增出糖蛋白E(g E)基因的主要抗原表位区,用Bam HⅠ和HindⅢ双酶切后,插入原核表达载体p ET-32a(+)中,构建重组表达质粒p ET-g E184,并转化至大肠埃希菌Escherichia coli BL21(DE3),经IPTG诱导后进行SDS-PAGE电泳和Western-blot检测,用纯化后的g E184蛋白作为包被抗原,建立间接g E184-ELISA检测方法.【结果和结论】用该方法检测290份临床猪血清样本,并与商品化ELISA试剂盒检测结果比较,两者的符合率为93.1%.  相似文献   

H9亚型禽流感病毒HF株的分离鉴定和免疫原性评价     

程艺  田辉  张亚  薛景景  盛东北  刘武杰  王婉冰  张盼涛  田克恭 《中国畜牧兽医》2020,47(9):2945-2952

2015年,从安徽合肥某养鸡场分离出一株H9N2亚型禽流感病毒（AIV）,命名为HF株。该毒株鸡胚半数感染量（EID₅₀）为10^9.17/0.1 mL,最小致死量的平均死亡时间（MDT）为87 h。对其HA基因分析发现,其氨基酸裂解位点为RSSR↓GLF,符合低致病性AIV特征;HA基因的遗传进化分析结果表明,该分离株属于h9.4.2.5谱系,符合当前毒株流行趋势。将HF株与2006-2018年分离自全国各地的10株H9N2亚型AIV分离株同时制备灭活疫苗,免疫SPF鸡,制备阳性血清,通过交叉血凝抑制试验分析病毒抗原性,结果显示HF株与2014年之前毒株抗原相关性介于0.50~0.56之间,与2014年及之后毒株抗原相关性介于0.89~1.00之间,表明该分离株与2014年之后的流行毒株具有良好的抗原相关性。用0.2%甲醛灭活HF株病毒液,其HA效价在灭活前后未发生变化;用灭活抗原制备油乳剂灭活疫苗免疫SPF鸡,免疫后21 d HI抗体效价几何平均值达到9.0log2以上,可使免疫鸡完全抵抗H9亚型AIV的感染,提供100%的攻毒保护。研究结果表明,HF株具有良好的免疫原性,可作为疫苗候选株用于H9N2亚型禽流感疫苗的研制。  相似文献   

伪狂犬病病毒立即早期180基因的克隆及序列分析简     

程艺  王雨  吉艺宽  孙磊磊  周慧英  琚春梅 《中国畜牧兽医》2014,41(1):15-18

为了研究伪狂犬病病毒（pseudorabies virus,PRV）立即早期180基因（immediate early 180,IE180）及其功能,试验采用设计的特异性引物通过PCR法对IE180基因进行扩增,并成功构建了IE180克隆载体,经序列测定后,用DNAStar软件对该序列和已发表的7个PRV参考株的IE180基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列进行比对分析。结果表明,HB-98株IE180基因编码区大小为4425 bp,编码1474个氨基酸,与GenBank中登录的参考株的IE180基因核苷酸同源性为98.4%～99.1%,氨基酸同源性为97.8%～98.4%。系统进化树分析结果表明,该毒株与毒株TNL(登录号：AF352564.2）的亲缘关系较近。  相似文献   

伪狂犬病病毒gB基因的原核表达及间接ELISA方法的建立     

王雨  吉艺宽  程艺  张宝石  向柯宇  琚春梅 《动物医学进展》2015,36(6)

为了建立评价伪狂犬病疫苗免疫效果的方法,应用PCR方法扩增gB基因的主要抗原表位区序列,大小为768bp,用BamHⅠ和HindⅢ双酶切后克隆至pET-32a(+)载体,构建重组表达质粒pETgB768,转化大肠埃希菌BL21(DE3)后,通过IPTG进行诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot检测融合蛋白的表达情况及其反应原性。用纯化的gB768蛋白作为包被抗原建立间接gB768-ELISA检测方法,试验结果表明,该方法具有良好的敏感性、特异性、重复性。用该方法检测128份临床送检猪血清样本,并与商品化ELISA试剂盒检测结果进行比较,符合率为93.8%。该方法的建立为猪伪狂犬病疫苗免疫效果的评估奠定了基础。  相似文献   

江汉平原秋甜瓜栽培技术操作规程     

张登登  程艺 《农民致富之友》2015,(14)

<正>秋甜瓜栽培,即甜瓜夏播秋收栽培,长江中下游地区一般7月15日左右播种,10月1日前后采收。秋瓜栽培季节性很强,从播种到成熟采收期的外界气温是由高到低的过程。长江中下游一带9月中、下旬以后天气是秋高气爽,但有的年份冷空气来临较早出现寒露风,需要小棚覆盖防寒。操作程序如下:1品种选择伊丽莎白、荆甜一号、荆蜜等。2种子处理将种投入55℃的水中搅拌使水温降至30℃左右浸泡30分  相似文献   

鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活苗(La Sota株+M41株+Re-9株)应用效果研究     

洪素梅  袁月  刘月月  田辉  程艺  张盼涛  王林果  薛景景  刘武杰  田克恭 《畜牧与兽医》2021,(2):88-91

鸡新城疫、传染性支气管炎、禽流感(H9亚型)三联灭活苗(La Sota株+M41株+Re-9株)(三联苗(Re-9株))为国内首个采用基因重组H9亚型禽流感疫苗株研制的新支流三联灭活疫苗。为研究疫苗上市后的实际应用效果,使用7日龄AA肉鸡和260日龄产蛋期蛋鸡评价三联苗(Re-9株)有效性。结果显示:肉鸡免疫后14 d即可激发抗体,免疫后21 d,新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、H9亚型禽流感病毒(H9 AIV)的血凝抑制(HI)抗体分别达8.6log2、6.2log2、8.3log2,出栏时仍维持在较高水平;于免疫后14 d抽样进行NDV、H9 AIV攻毒,对照组均100%发病或排毒,免疫鸡均可获得100%保护;在蛋鸡上,免疫三联苗(Re-9株)后28 d,NDV、IBV、H9 AIV的HI抗体效价分别达12.0log2、7.8log2、12.2log2,免疫后6个月仍可以维持在较高水平。结果表明:三联苗(Re-9株)在实际应用中免疫效果较好,本研究将为鸡新城疫、传染性支气管炎、H9亚型禽流感的防控提供有力支撑。  相似文献