紫花苜蓿盐诱导类受体蛋白激酶基因MsSIK1的克隆及功能分析     

郭鹏  邢鑫  张万筠  姜健 《中国农业科学》2014,47(23):4573-4581

【目的】对紫花苜蓿（Medicago sativa L. cv. Zhongmu-1）stress-induced protein kinase gene 1（MsSIK1）进行克隆与表达研究,了解该基因的分子机制及其应用。【方法】以紫花苜蓿叶片总RNA为模板,根据同源克隆设计简并引物,利用RT-PCR结合RACE技术,获得MsSIK1的编码序列。利用同源性比对进行序列分析。通过SMART网站（http://smart.embl-heidelberg.de/）模拟该基因的蛋白结构。构建MsSIK1的亚细胞定位瞬时表达载体,使用基因枪转化法将MsSIK1与GFP在洋葱表皮细胞中融合瞬时表达并观察其亚细胞定位荧光信号。通过Real time-PCR分析MsSIK1在NaCl、ABA和干旱处理条件下的表达特征。利用农杆菌侵染方法获得转基因拟南芥植株,通过RT-PCR对转基因植株进行表达鉴定,获得转基因植株后,利用转基因株系进行盐处理进而对成苗期转基因拟南芥性状鉴定。在盐胁迫处理下,测定野生型与转基因株系的叶绿素含量、MDA含量进而验证该基因的抗盐功能。【结果】获得MsSIK1编码序列2 478 bp,编码825个氨基酸。该蛋白C端与多种植物激酶具有相当高的同源性,模拟蛋白结构发现该基因具有类受体蛋白激酶高度保守的丝氨酸/苏氨酸结构域、跨膜结构域和富含亮氨酸重复序列的膜外结构域。Real time-PCR分析表明该基因在NaCl、ABA和干旱处理条件下上调表达,其中在盐处理条件下,MsSIK1表达先升高后降低,在处理4 h时达到最大值（约为对照值的7倍）。在干旱胁迫处理时,MsSIK1受诱导表达增强明显,当处理2 h时表达量达到最大值（约为对照值的6倍）;ABA处理时,MsSIK1被诱导表达明显,当处理3 h时表达量达到最大值,约为对照值的6.8倍。MsSIK1与GFP融合瞬时表达的洋葱表皮细胞中的荧光信号主要集中于质膜附近,转化空载体的洋葱表皮细胞中的荧光信号分布于细胞各个部位。转基因植株的RT-PCR鉴定表明,T₁代6个株系中所得到的MsSIK1条带明显、亮度高,且T₁-10中表达量最高;但在野生型中检测不到该条带,说明外源基因已经整合到拟南芥染色体中并能遗传到子代。成苗期转基因拟南芥盐处理后发现T₃-2、T₃-6、T₃-10转基因株系较野生型植株长势好,说明MsSIK1的转入提高了拟南芥的抗盐性。与对照相比,转MsSIK1拟南芥在NaCl处理下,叶绿素含量下降较少,其中,野生型叶绿素含量降低了77%,T₃-3降低了53%,T₃-6降低了44%,T₃-10降低了35%;同样盐胁迫下,3个转基因株系的MDA含量积累较少,其中,野生型MDA的含量是T₃-10株系的1.3倍。【结论】MsSIK1作为一个类受体蛋白激酶受多种逆境胁迫诱导,该基因的过量表达提高了拟南芥的抗盐性。  相似文献   

欧美杨PdPP2C基因的克隆与功能分析     

郭鹏  张士刚  邢鑫  姜健 《北京林业大学学报》2015,37(2):100-106

欧美杨是中纬度地区最适合的短轮伐期工业用材集约经营树种之一,然而盐渍、干旱和低温严重影响了欧美杨的生长发育和产量。本文利用RT-PCR等技术克隆出欧美杨PP2C基因并进行了序列分析。PdPP2C基因开放阅读框为1 320 bp,编码439个氨基酸。蛋白质序列分析表明,PP2C蛋白N端保守性不强,C端有保守的蛋白磷酸酶区域。荧光定量PCR分析表明,该基因在欧美杨根、成熟叶、顶端叶和茎中都有表达且根中表达量最高。逆境胁迫分析表明,该基因受NaCl、ABA和干旱等诱导表达。干旱和盐胁迫处理下转PdPP2C基因拟南芥与野生型相比生长受到较少抑制,且叶绿素含量上升,丙二醛含量下降,表明PdPP2C基因作为一种蛋白磷酸酶提高了拟南芥的抗逆性。   相似文献   

文登西洋参种植管理技术     

孙黎明  王丹丹  刘丽涛  邢鑫  李波 《中国农技推广》2015,31(1):31-33

<正>西洋参为五加科多年生宿根草本植物,干燥根入药,富含人参皂甙、挥发油、多糖等成分,味甘、微苦、性凉。现代医学证明,西洋参具有提高体力和脑力的能力、降低疲劳度和调节中枢神经系统等药理作用,有滋阴降火、益气生津的功效;对高血压、心肌营养不良、冠心病、心绞痛等血管病均有较好的疗效[1]。威海市文登区西洋参种植面积4.0万亩,每年产量5000t,年产值达10亿元,已经成为文登种植  相似文献   

基于自适应遗传优化递归神经网络的木工送料平台补偿控制研究     

朱莉  马婧尧  孟兆新  石晋菘  邢鑫  姜中金 《北京林业大学学报》2020,42(12):125-134

  目的  针对结构较为复杂的并联式多轴联动的新型木工带锯送料平台加工精度较低，控制参数无法优化，有多种不确定因素影响精度等问题。结合遗传算法寻优速度快和递归神经网络具有抑制不确定性因素的优点，设计一种将递归神经网络和自适应遗传算法结合的全局优化的控制策略。  方法  分析送料平台结构和误差产生来源，从而建立了相应的误差源模型；结合自适应遗传算法优化RNN网络参数进而对PID参数进行优化，通过Matlab和Adams联合仿真的方法对该补偿控制策略进行验证，并与传统PID、遗传算法优化PID参数和RNN网络优化PID参数3种补偿控制算法进行对比；分析不同算法下控制参数、送料平台位移与角度变化曲线，并搭建了实际电路和控制器进行实验。  结果  分析仿真结果可知:该控制策略与其他3种控制策略相比，超调量最小，响应最快，大约在0.6 s达到稳定，且其在外部干扰下，更快达到稳定，大约0.3 s达到稳定。经过该控制策略补偿后，Y方向的偏移误差从补偿前6 mm降低至小于3 mm，X方向的偏移误差从6 mm降低到2 mm，倾斜角误差从5.5°减小至3°，平台轨迹曲线大部分曲线段与目标曲线完全重合；传统PID控制时，Y方向的偏移误差为6 mm，X方向的偏移误差6 mm，倾斜角误差5.5°，平台轨迹曲线与目标曲线偏差较大；遗传算法优化PID参数控制时，Y方向的偏移误差从补偿前6 mm降低至小于4.8 mm，X方向的偏移误差从6 mm降低到5 mm，倾斜角误差从5.5°减小至4.5°，平台轨迹曲线部分曲线段与目标曲线重合；RNN网络优化PID参数控制时，Y方向的偏移误差从补偿前6 mm降低至小于4.5 mm，X方向的偏移误差从6 mm降低到4.8 mm，倾斜角误差从5.5°减小至4°，平台轨迹曲线部分曲线段与目标曲线重合。  结论  该方法与其他3种方法相比，响应速度快，超调量小，具有很好的抗干扰性能和较强的鲁棒性，且可有效补偿误差，提高其运动精度，满足驱动要求。   相似文献   

高活性漆酶菌株6BS筛选及其对染料脱色的影响     

刘学  王金家  王艳杰  于文浩  邢鑫蕊  汪春蕾 《贵州农业科学》2019,47(2)

  相似文献   

一株H3N7亚型禽流感病毒全基因组序列分析及对小鼠的感染性研究     

谷文丽  崔鹏飞  崔嘉琦  韩舒雨  邢鑫  邓国华  陈化兰 《中国预防兽医学报》2018,(7)

H3亚型流感病毒是威胁公共卫生安全以及动物生命安全的主要流感病毒亚型之一。为了解H3N7亚型流感病毒的生物学特性,本研究对2015年浙江省分离到的一株H3N7亚型禽流感病毒(AIV A/duck/Zhejiang/S1075/2015(H3N7)(简称DK/ZJ/S1075/2015)进行了遗传演化分析、抗原性分析以及小鼠感染性实验。遗传演化分析结果显示,该病毒株的聚合酶碱性蛋白2(PB2)基因、核蛋白(NP)基因、神经氨酸酶(NA)基因、非结构蛋白(NS)基因分别与H4N2、H7N3、H10N7、H4N6亚型流感病毒有着密切的关系,表明该株病毒的基因来源具有明显的遗传多样性。分离株的抗原性分析结果显示该病毒株与本实验室分离的多株H3亚型AIV存在16倍以上的抗原性差异,表明其发生了明显的抗原漂移。小鼠感染性实验结果表明,分离株无需提前适应即可在小鼠肺脏和鼻甲中复制,但小鼠感染病毒后无明显临床症状,与对照组相比其体重变化不明显,呈现低致病性。本研究结果为H3亚型流感病毒的全面监测和综合防控提供了数据支持。  相似文献   

威海市花生高产栽培技术     

邱俊兰  于海宁  邢鑫  王军伟  姜振品 《种子世界》2013,(10):40-41

我市花生产业可持续发展存在区域间发展不平衡、品种混杂退化、病虫害发生严重、标准化集成技术应用不到位、产品质量不高、产业化程度较低等问题,与经济发展和人民生活需求相差较大。成果转化率低,目前在新品种研发、病虫害综合防控、配方施肥技术、栽培种植模式、花生出口标准化生产等方面有一批实用技术成果,但是南于种种原因转化率仅有30％。  相似文献   

一株H5N3亚型禽流感病毒全基因组序列分析及其对小鼠的感染性研究     

韩舒雨  崔鹏飞  崔嘉琦  谷文丽  邢鑫  邓国华  陈化兰 《中国预防兽医学报》2019,(7):665-669

为了解H5N3亚型流感病毒的生物学特性,本研究对2017年浙江省分离到的一株H5N3亚型禽流感病毒(AIV)[DK/ZJ/S1368/2017(H5N3)]进行了遗传演化分析及小鼠感染性实验。遗传演化分析结果显示,该株病毒的HA蛋白裂解位点处仅含一个碱性氨基酸,属于低致病性AIV。同时,该病毒的血凝素(HA)基因与H5N7亚型流感病毒亲缘关系较近;聚合酶碱性蛋白2(PB2)基因和核蛋白(NP)基因与H10N7亚型流感病毒亲缘关系较近;碱性聚合酶蛋白1(PB1)基因与H1N1亚型流感病毒亲缘关系较近;酸性聚合酶蛋白(PA)基因与H6N2亚型流感病毒亲缘关系较近;神经氨酸酶(NA)基因与H10N3亚型流感病毒亲缘关系较近;基质蛋白(M)基因与H3N8亚型流感病毒亲缘关系较近;非结构蛋白(NS)基因与H1N1亚型流感病毒亲缘关系较近。表明其基因来源复杂。小鼠感染实验结果显示,该分离株无需提前适应即可以在小鼠肺脏和鼻甲中复制,小鼠感染病毒后无明显临床症状,与对照组相比其体质量变化不明显,表明该病毒对小鼠呈低致病性。本研究通过对该H5N3亚型AIV的生物学特性的分析,发现该病毒基因来源复杂,无需提前适应就可以在小鼠体内复制,具有感染哺乳动物的潜在威胁,提示应当持续加强对H5N3亚型AIV的监测和相关生物学特性的研究工作。  相似文献   

一株鸭源H6N6亚型禽流感病毒的全基因组序列分析及对小鼠的感染性研究     

范威峰  崔鹏飞  崔嘉琦  谷文丽  张元成  邢鑫  孔兴天  彭大新  邓国华  陈化兰 《中国预防兽医学报》2020,(1):75-79

为了解H6N6亚型禽流感病毒(AIV)的生物学特性,本研究对2015年在广东活禽交易市场分离的一株鸭源AIV DK/GD/S1182/2015(H6N6)进行了全基因组测序、遗传演化分析和对BALB/c小鼠的感染性试验。序列分析显示,该病毒的HA蛋白裂解位点处仅有一个碱性氨基酸,符合低致病性AIV的分子特征;HA蛋白的222V和228S,可以增强病毒对α-2,6唾液酸受体的结合能力。NA蛋白颈部有11个氨基酸的缺失,这将会影响NA的神经氨酸酶活性;该病毒可能是2010年广东H6N6猪流感病毒与2014年广西AIV重组产生。小鼠感染性试验表明,该分离株不需要预先适应就能够在小鼠的肺脏内高效复制,提示该分离株具有感染哺乳动物的潜在风险。本研究对H6亚型AIV监测和相关生物学特性研究具有一定的指导作用。  相似文献   

欧美杨脱水素PdDHN2b的克隆与表达分析     

郭鹏  邢鑫  张万筠  姜健 《北京林业大学学报》2015,37(1):22-36

以欧美杨为材料,通过RT-PCR方法从欧美杨叶片中克隆到了抗旱脱水素DHN2b基因(命名为PdDHN2b),该基因开放阅读框为1 440 bp,编码379个氨基酸,绝大多数氨基酸组成属于亲水性氨基酸,无明显跨膜结构域。亚细胞定位表明PdDHN2b基因定位在细胞质或细胞膜上。荧光定量PCR分析表明:该基因在顶端中表达量最高,功能叶、根和茎中则无表达。同时该基因受NaCl、ABA和干旱等诱导表达。另外,构建了原核表达载体pET-PdDHN2b,并在大肠杆菌BL21中表达融合蛋白,诱导纯化后免疫小白鼠,制备抗体。SDS-PAGE电泳结果表明,融合蛋白分子量为58 ku。最后利用Ni-NTA纯化的PdDHN2b-his重组蛋白用于Western blot分析。   相似文献