布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统效应蛋白VceC对山羊滋养层细胞内质网应激和性腺激素分泌的影响     

相彩霞  王相国  李俊玫  支飞杰  房姣阳  郑维芳  陈家露  靳亚平  王爱华 《畜牧兽医学报》2023,(3):1210-1220

旨在研究布鲁氏菌IV型分泌系统效应分子VceC对山羊滋养层细胞(GTC)内质网应激及性腺激素分泌的影响,为揭示其在布鲁氏菌感染宿主细胞中的作用,阐明布鲁氏菌胞内生存和引起动物流产的机制提供重要依据。本研究通过构建VceC的真核表达载体pEGFP-C1-VceC并转染GTC,Western blot检测内质网应激标志性分子GRP78和CHOP蛋白表达量变化,qRT-PCR和Western blot进一步检测未折叠蛋白反应(UPR)信号通路相关分子;ELISA检测细胞培养上清液的孕酮和雌激素的浓度变化。结果表明,成功构建了VceC真核表达载体pEGFP-C1-VceC,转染GTC后,12和24 h GRP78蛋白表达均显著升高(P<0.01),24 h后CHOP蛋白表达显著降低(P<0.05);qRT-PCR检测IRE1和XBP-1的mRNA表达量在24 h均显著升高(P<0.05),而PERK、ATF6和ATF4 mRNA的表达未发生显著变化(P>0.05),Western blot检测IRE1蛋白的表达在转染12 h后显著升高(P<0.01);VceC转染...  相似文献   

西藏林芝散养藏鸡新城疫抗体ELISA检测分析     

陈家露  蔡重振  扎西卓玛  甘富斌  索朗斯珠  罗润波 《甘肃畜牧兽医》2019,49(7)

为了解西藏林芝市散养藏鸡新城疫的流行情况,并给出合理的临床免疫指导。利用酶联免疫吸附试验对随机抽样采取的92份藏鸡血清进行新城疫抗体的血清学定性检测。结果显示:92份藏鸡血清新城疫抗体阳性率为0,表明林芝市散养藏鸡中无新城疫的流行。  相似文献   

西藏那曲市羊源大肠杆菌分离鉴定及耐药性研究     

陈家露  蔡重振  次旦  高家登  扎西次仁  索朗斯珠  罗润波 《中国畜牧兽医》2019,46(12):3759-3767

为了解西藏那曲市羊大肠杆菌的耐药情况，指导临床进行合理用药，本试验从那曲市采集羊新鲜无污染腹泻物92份，进行大肠杆菌显色培养基分离、革兰氏染色镜检、生化鉴定、分子生物学鉴定、致泻性大肠杆菌生化鉴定、药敏试验及耐药基因检测。结果显示，分离菌株在大肠杆菌显色培养基上呈蓝色菌落、革兰氏染色为粉红色的短杆菌，通过生化鉴定及23S rRNA的PCR检测得到26株羊源大肠杆菌，分离率为28.3%；其中25株符合致泻性大肠杆菌生化特性，致泻菌株分离率为27.2%。药敏试验结果显示，所得25株羊源大肠杆菌对氨苄西林的耐药性较高，耐药率为24.0%；对羧苄西林、卡那霉素的耐药性次之，耐药率为8%；对哌拉西林、头孢呋辛、庆大霉素、四环素、米诺霉素等药物耐药率为4%；对诺氟沙星、氧氟沙星、环丙沙星等药物极为敏感，可作为临床用药。5种耐药基因检测结果显示，bla_TEM基因检出率为100%，表明分离菌均含有相应的耐药基因。以上结果表明，西藏那曲市羊源大肠杆菌对多种药物耐药，提示在临床实践过程中应注重合理用药、联合用药，减缓大肠杆菌耐药性的产生。  相似文献   

布鲁氏菌外膜蛋白16单克隆抗体的制备及初步应用     

翟云逸  袁野  李俊玫  田路路  刁梓洋  李彬  陈家露  周栋  靳亚平  王爱华 《畜牧兽医学报》2023,(5):2083-2091

旨在制备布鲁氏菌外膜蛋白16(OMP16)单克隆抗体，建立OMP16抗体竞争ELISA方法，为布病临床防控提供免疫血清学检测手段。本研究选取保守性高、免疫原性良好的布鲁氏菌OMP16,经原核表达获得携带GST或His标签的重组OMP16(rOMP16)。利用杂交瘤技术筛选可稳定分泌OMP16特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株，经亚型鉴定、细胞核型分析和抗体交叉反应性试验分析单抗性质。制备小鼠腹水并纯化，方阵滴定法建立布鲁氏菌OMP16抗体竞争ELISA方法。结果表明，成功构建OMP16原核表达系统，经表达、纯化获得rGST-uOMP16和rHis-OMP16。筛选到1株遗传稳定的OMP16特异性杂交瘤细胞株，命名为B7;经鉴定，该抗体亚型为IgM-κ型，可识别目的蛋白，与标签蛋白无交叉反应。建立了布鲁氏菌OMP16抗体竞争ELISA方法，该方法与试管凝集试验检测结果相比总体符合率为90.53%,显示出良好的一致性。本研究有望为布鲁氏菌病的临床防控提供特异性高、敏感性好的免疫血清学检测方法。  相似文献