鸡毒霉形体HS株pMGA多基因族的研究   总被引：2，自引：1，他引：1  

翁长江  毕丁仁  沈青春  李自力  石德时  许青荣  刘梅  程峰 《中国兽医学报》2003,23(2):149-152

鸡毒霉形体（Mycoplasma gallisekpticum,GM)基因组中存在着编码细胞表面血凝粘附素蛋白（protein of Mycoplasma gallisepticum adhesin,pMGA)相关基因组的多基因族。为筛选出含有完整的pMGA基因片段，并估算出鸡毒霉形体HS株基因组中pMGA多基因族的基因数，本试验以pUC18为载体，用EcoR I限制性内切酶构建了鸡毒霉形体HS株的基因组文库。根据pMGA基因引导序列的保守区和pMGA基因间隔区的序列，人工合成了2个寡核苷酸探针（探针I、探针Ⅱ），经标记后，双筛选所建的基因文库，从600个转化子中共得到的38个含有pMGA基因的阳性克隆子，选其中1个7．5kb的片段（17号阳性克隆子，W17），用4种限制性内切酶（EcoR I,Hind Ⅲ，Pst I,Bgl Ⅱ）酶切消化，绘制了该片段的物理图谱。该片段酶切产物经电泳、转膜后与探针I和探针Ⅱ杂交，发现2个探针杂交图谱基本相同，根据杂交带及放射信号的强度值，估测出该片段含有4个pMGA基因，以这个片段所含的pMGA基因数为标准，估算出鸡毒霉形体HS株含有39个pMGA基因。  相似文献   

乙型脑炎病毒NS1基因重组伪狂犬病毒的构建   总被引：7，自引：0，他引：7  

徐高原  王祥  陈焕春  徐晓娟  李自力  何启盖  吴斌 《畜牧兽医学报》2004,35(2):192-197

设计1对引物从含有乙型脑炎病毒NS1基因的质粒pNS1上亚克隆NS1基因,将NS1基因插入到中间转移载体pUSK中，获得重组中间转移质粒pUSK—NS1。将pUSK—NS1与伪狂犬病毒Ea株TK／gG／LacZ^ 突变株基因组共转染真核细胞IBRS-2，通过空斑纯化得到了乙型脑炎病毒NS1基因重组伪狂犬病毒株TK／gG^-／NS^ 1。经检测,重组病毒能表达具有生物活性的NS1蛋白。该重组病毒可作为猪乙型脑炎和伪狂犬病双价基因工程疫苗用毒株。  相似文献   

禽流感病毒夹心ELISA快速检测方法的研究   总被引：21，自引：1，他引：21  

肖运才  李自力  胡思顺  石德时  许青荣  程峰  刘梅  毕丁仁  王桂枝 《畜牧兽医学报》2004,35(5):536-541

以禽流感病毒(AIV)湖北分离株(H9N2亚型)提纯物为免疫原，制备出鸡抗AIV和兔抗AIV抗体，经用琼脂扩散法测得效价分别为1:32和1:16。以纯化的鸡抗AIVIgG为包被抗体，兔抗AIVIgG为第二抗体，建立了检测AIV抗原的夹心ELISA法。结果表明，鸡抗AIVIgG的最佳包被浓度为1μg/mL，兔抗AIV IgG的最适工作浓度为5μg/mL；对已知的阳性样品，用夹心ELISA法测得的病毒滴度比血球凝集滴度高16倍以上，且能检出其它亚型的禽流感病毒；与新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、减蛋综合征病毒、传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊病病毒、鸡痘病毒、马立克氏病病毒等无交叉反应，说明本方法有很高的特异性及敏感性。对14个鸡场送检的、患有呼吸道疾病或有腹膜炎、眼炎、产蛋下降、怀疑为禽流感感染的病鸡进行了检测，结果有7个鸡场为阳性。本方法的建立为禽流感病鸡群的临床检验提供了一种方便、敏感、快速的检测方法。  相似文献   

高压线对埋地管道耦合干扰规律的试验研究   总被引：3，自引：2，他引：1  

李自力  禹浩  王帅华  张震 《油气储运》2010,29(7)

针对高压输电线工频电磁场产生的交流电压引起附近埋地管道的交流腐蚀,进而影响管道服役寿命的问题,开展了高压线对埋地管道耦合干扰规律的试验研究。设计并建立了室内试验装置,通过试验研究分析了输电线电压、电流、高度等因素对管道感应电压的影响,为总结干扰规律、研究管道腐蚀机理提供了试验依据。  相似文献   

鸡毒霉形体病研究进展     

李自力  毕丁仁 《中国兽医杂志》1997,23(12):34-36

鸡毒霉形体病研究进展李自力毕丁仁（华中农业大学畜牧兽医学院，湖北武汉４３００７０）霉形体（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ）是一类缺乏细胞壁的原核生物。现已命名的禽源霉形体共有２１种［１］，最重要的三个成员是：鸡毒霉形体（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａｇａｌｉｓｅｐｔｉｃ...  相似文献   

犬附红细胞体的体外连续培养     

李晓云  石德时  李自力  肖运才  胡思顺  刘梅  袁宗辉  毕丁仁 《中国兽医学报》2009,29(9)

犬血样经Giemsa染色镜检及PCR检测.证实感染附红细胞体.选择添加新生牛血清(BS)、酵母浸出液、葡萄糖等成份的PPLO肉汤(PPLO-S-BS)为培养液,将染虫红细胞稀释后接种到细胞培养板,置37℃、5%CO2的培养箱中培养.24～72 h后红细胞溶血变为带虫血影(ghost);在PPLO-S-BS中虫体生长较好,并能连续培养180 d;除首次接种外不添加任何红细胞.对PPLO-S-BS中培养的带虫血影进行了光镜及扫描电镜观察、PCR鉴定、感染阴性红细胞试验、抗生素敏感性试验,结果表明其特征与接种物相同.  相似文献   

鸡毒霉形体HS株pMGA多基因族序列分析   总被引：3，自引：1，他引：2  

沈青春  毕丁仁  翁长江  李自力  石德时  许青荣  程峰 《中国兽医学报》2003,23(3):243-246

用限制性核酸内切酶对鸡毒霉形体(MG)HS株基因文库中经初步估测可能含有的4个鸡毒霉形体粘附蛋白(protein of Mycoplasma gallisepticum adhesin,pMGA)基因的MgW17重组质粒进行了不同组合的酶消化,根据消化片段的大小及酶切位点绘制了7.5kb外源片段的物理图谱;然后根据所得的物理图谱,选用Pst I和EcoR I将MgW17外源片段酶解成1.3、2.0、4.2 kb 3个部分,将它们分别亚克隆到SK(十)质粒上,得到了3个亚克隆子SGp100、SGp200、SGp300.使用核酸外切酶Ⅲ缺失法构建缺失子系列,经序列分析后得到MgW17外源片段的全部序列.序列全长7 434 bp,中间含有2个完整的pMGA基因和另2个不完整的pMGA基因的首部和尾部,分别将它们顺次命名为H-pMGA1.1、H-pMGA1.2、H-pMGA1.3和H pMGA1.4.2个完整的pMGA基因的阅读框长度分别为1 967 bp(1.2)和2039 bp(1.3);H-pMGA1.1首部不完整的阅读框的长度为720 bp,尾部不完整的H-pMGA1.4的长度为1 752 bp.将H-pMGA基因与已报道的MG.S6株、F株的pMGA基因进行了比较,探讨了pMGA基因在不同MG菌株中的相似性、基因启动子结构的差异、间隔区内GAA重复序列对转录调控的影响等.  相似文献   

湖北省水禽(鸭、鹅)的免疫措施     

许青荣  李自力  毕丁仁  石德时 《养殖与饲料．饲料世界》2002,(2):54-55

免疫接种是预防水禽传染病的有效措施之一.并可减少蛋传疾病,使后代雏水禽具有高度的母源抗体,提高雏水禽抵抗疫病的能力.要保证水禽养殖业的健康发展,必须建立一整套严格的综合性卫生防疫措施.  相似文献   

地方鸡禽白血病病毒感染调查及主要流行亚群分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

杨荣坤  许青荣  崔卫涛  肖运才  李自力  周祖涛 《华中农业大学学报》2020,39(3):89-93

为了解湖北省地方鸡禽白血病病毒的感染状态及主要流行亚群,从麻城绿壳蛋鸡、江汉鸡、景阳鸡3个地方品种核心群采集了7 477份样品,进行蛋清p27抗原检测、公鸡病毒分离鉴定及分离株gp85基因序列分析。结果显示:3个地方鸡种蛋清p27抗原阳性率分别为1.32%、6.54%和2.82%,公鸡病毒分离率为6.11%、30.14%和8.64%,表明湖北省地方鸡禽白血病病毒感染比较严重,不同品种的感染率不同,公鸡的排毒率高于母鸡。利用PCR方法将分离的15株禽白血病病毒分为两大亚群,分离株gp85基因遗传进化分析结果显示,3个地方鸡品种主要流行J、K亚群禽白血病病毒,均存在J、K亚群禽白血病病毒的共感染,表明湖北省地方鸡禽白血病病毒感染情况较为复杂。  相似文献   

油罐综合计量系统研制与应用     

罗时金  陆春红  李自力  任增珺  丁清苗 《油气储运》2010,29(12)

针对以往国内外油库罐区计量产品功能单一、通讯系统不统一、质量不能保证、易受外界影响及价格昂贵等缺点,采用高精度、稳定性好的压力传感技术,多参数同时测量的工艺流程,以及等浮力浮子引压管技术、长尺寸不锈钢精密加工技术、阻止油和油蒸汽进入毛细管技术、引压管环境温度补偿技术等自动化控制技术,研究开发了一种新型油罐综合计量系统.该系统可以测量油罐计量和报警需要的所有参数,如液位、密度、温度和油量等,具有计量准确、性价比高、现场显示及通信方便等特点.现场应用实践证明:该系统运行情况良好,减少了计量纠纷,降低了劳动强度,在石油化工行业有推广应用价值.  相似文献