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1.
采用PCR方法，以牛疱疹病毒Ⅰ型基因组DNA为模板扩增gB基因，克隆至pGEM—T载体。将以克隆质粒pGEM-T-gB为模板扩增的gBⅠ、gBⅡ和gBⅢ基因片段分别连接至原核表达载体pET32a。获得的重组质粒分别转化感受态细胞BL21（DE3），在IPTG诱导下表达。经SDS-PAGE鉴定，gBⅠ、gBⅡ和gBⅢ基因片段在大肠埃希氏菌BL21（DE3）中以融合蛋白形式获得了表达。以磁化组氨酸蛋白纯化系统对融合蛋白纯化后，Western-blotting和ELISA分析结果表明，这些融合蛋白均与BHV-1标准阳性血清反应，可作为抗原用于牛传染性鼻气管炎ELISA检测方法的建立。 相似文献
2.
用PCR法扩增了牛疱疹病毒Ⅰ型B artha N u/67株gB基因,将其插入原核表达载体pBAD/TOPO中构建重组质粒pBAD-gB。将pBAD-gB质粒转化大肠杆菌TOP 10后进行了诱导表达,对表达产物进行了纯化和抗原性检测,并通过改变诱导剂L-A rab inose的浓度和诱导时间对诱导表达条件进行了优化。结果表明,重组质粒pBAD-gB构建成功,gB蛋白获得了高效表达,并以包涵体形式存在,纯化后gB蛋白的纯度达90%以上,gB蛋白抗原性良好,最佳诱导表达条件:L-A rab inose终浓度为0.2 g/L,诱导时间为5 h。 相似文献
3.
用PCR方法从感染牛疱疹病毒Ⅰ型Bartha Nu／67株的MDBK细胞中扩增gD基因，将之克隆到pGEM-T Easy载体。根据对gD基因的结构分析，设计合成3对引物，以获得的克隆质粒为模板，PCR扩增gD胞外域基因，将之分别亚克隆到pGEX-4T-2和pET-32a表达载体中构建成表达质粒pGEX-4T—gDQ、pGEX-4T—gDQB、pGEX-4T—gDHB和pET—gDQ、pET—gDQB、pET—gDHB，利用上述质粒分别转化大肠杆菌BL21和BL21（DE3），IPTG诱导后SDS—PAGE检测，结果pGEX-4T—gDQ、pGEX-4T—gDQB、pGEX-4T—gDHB和pET—gDQ四个表达质粒出现表达且符合预期大小，Western blot表明表达产物均有抗原性。 相似文献
4.
水肥一体化模式下日光温室黄瓜氮磷钾优化施肥方案的研究 总被引：5，自引：0，他引：5
为了探明水肥一体化模式下日光温室黄瓜氮(N)、磷(P_2O_5)、钾(K_2O)的适宜施用量,采用三因子D–饱和最优设计,研究N、P_2O_5、K_2O用量对黄瓜产量和品质的影响,建立了以N、P_2O_5、K_2O用量为变量因子,以黄瓜产量和品质为目标函数的三元二次数学模型。通过对模型解析表明:N、P_2O_5、K_2O对黄瓜产量和品质均有显著影响;当N、P_2O_5、K_2O用量分别达到861.5 kg·hm~(-2)、306.1 kg·hm~(-2)和1 082.0 kg·hm~(-2)时,边际产量效应降至0;N、P_2O_5、K_2O用量分别达到688.4 kg·hm~(-2)、320.2 kg·hm~(-2)和1 230.2 kg·hm~(-2)时,边际品质效应降为0。通过计算机模拟运算,得出本试验条件下日光温室黄瓜产量达138 000 kg·hm~(-2)以上,同时品质综合评分达到88分以上的优化施肥方案为N 665.5~827.6 kg·hm~(-2),P_2O_5 267.9~334.3 kg·hm~(-2),K_2O 1 043.1~1 235.0 kg·hm~(-2),适宜的氮磷钾配比为1︰0.40︰1.53。 相似文献
5.
杨树优质高效栽培技术 总被引：1，自引：0，他引：1
杨树速生、丰产、优质、高效,是我国营造速生丰产林、农田林网、村宅四旁和生态舫护林的主要造林绿化树种。我国气候温暖、雨量充沛,适宜杨树生长,发展潜力巨大,是在短期内改变缺材状况与生态环境的重要途径。杨木已成为胶合板、纤维板、刨花板、造纸、卫生筷和包装业的重要工业原料。 相似文献
6.
补体C3d是补体系统（complement system,CS）中补体c3的最终裂解产物。本试验利用RT—PCR技术从从肉鸡肝脏总RNA中扩增C3dcDNA,测序证实为C3d基因。然后将其连接至表达载体pET-32a（＋）,转化E．coliBL21（DE3）,1％IPTG诱导表达。SDS-PAGE、Western-blotting证实目的蛋白为C3d。亲和层析分离C3d融合蛋白,与纯化新城疫病毒（Lasota株）经戊二醛连接后免疫SPF鸡。血凝抑制试验（HI）检测新城疫抗体水平,MTT法检测胸腺T淋巴细胞转化率。结果表明C3d融合蛋白能够提高特异性抗体水平以及细胞免疫水平,本研究为进一步研究、利用鸡补体C3d奠定了基础。 相似文献
7.
利用连翘适应性强,耐寒、耐旱、耐瘠薄的特性,推广适合太行山区连翘种植的四项栽培技术,提炼出连翘日常管理及采收技术要点,为提高浅山丘陵地区连翘的栽培效益提供了实践依据。 相似文献
8.
以早春拱棚栽培‘菊锦’大白菜为试材,无色棚膜为对照,研究有色棚膜对春大白菜光合特性、生长量及产量的影响。结果表明,在相同光量子通量密度(PFD)下,紫膜和红膜处理的气温较高,空气湿度较低;蓝膜和绿膜的气温较低,而空气湿度略高。各处理大白菜叶片光合速率(P_n)日变化呈单峰曲线型,紫膜和红膜的P_n显著大于对照,而蓝膜和绿膜与对照差异不显著;早春棚栽大白菜的光饱和点(LSP)为1133.4~1217.5μmol·m~(-2)·s~(-1),紫膜和红膜的明显高于对照,蓝膜和绿膜与对照无显著差异。各处理大白菜的光补偿点(LCP)、表观量子效率(AQY)、CO_2补偿点和饱和点差异不大,但紫膜的羧化效率(CE)显著高于对照,绿膜的明显低于对照。晴天中午红膜和紫膜的光呼吸速率(P_r)低于对照,光能利用率(LUE)高于对照。核酮糖–1,5–二磷酸羧化酶(RuBPCase)、果糖–1,6–二磷酸酶(FBPase)、景天庚酮糖–1,7–二磷酸酶(SBPase)和转酮醇酶(TK)的活性多以紫膜和红膜较高,绿膜较低。与对照相比,紫膜和红膜的生长量较大,而绿膜的较小,蓝膜与对照差异不显著。紫膜和红膜的经济学产量分别比对照高15.1%和7.8%,而蓝膜和绿膜的比对照低6.4%和15.5%。可见,紫膜和红膜可提高大白菜叶片的光能利用效率,增强光合碳同化能力,从而促进植株生长,产量明显提高;绿膜处理的结果相反。 相似文献
9.
绵羊肺炎支原体Y-98株外膜蛋白成分分析及其免疫原性研究 总被引：1，自引：0，他引：1
采用TritonX-100裂解和0．6％KI提取的方法制备绵羊肺炎支原体Y-98株外膜蛋白，经12％SDS-PAGE分析，表明其分子量范围在14．4—125．9KD之间；分别制备抗Y-98株全细胞抗原和外膜蛋白高免血清，经Western-blotting分析，表明外膜蛋白为绵羊肺炎支原体的主要保护性抗原，而在外膜蛋白，67．6、39．3和28．8KD多肽为其主要保护性抗原。利用间接ELISA方法和MTT法对外膜蛋白引起的体液免疫和细胞免疫功能进行了测定，结果表明膜蛋白能够诱导机体产生高效价的抗体，免疫后7、14和28d效价分别达到了1：2^4.25、1：2^7.75和1：2^8.75;膜蛋白具有非特异性和特异性致有丝分裂作用，在免疫前0d及免疫后28d对T淋巴细胞刺激的转化率分别为8．46％和18．3％。 相似文献
10.
牛疱疹病毒Ⅰ型gB、gE基因的克隆及其杆状病毒表达载体的构建 总被引：2，自引：1，他引：1
本试验用PCR方法扩增了牛疱疹病毒Ⅰ型(bovine herpesvirus-1,BHV-1)Bartha Nu/67株gB、gE基因片段,将其克隆到pGEM-T-easy载体。经转化、筛选、鉴定后将重组质粒经BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切后,与经相同方法处理的杆状病毒转移载体pFastBacHTb连接,得到了重组质粒pFBHgB、pFBHgE。经酶切和测序鉴定后,将其转化入含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac,经抗性、蓝白斑筛选和PCR鉴定,得到了含gB、gE基因的重组穿梭载体。 相似文献