内含NDV核酸的耐核糖核酸酶病毒样颗粒作为荧光定量RT-PCR内标的制备与鉴定     

《畜牧与兽医》2017,(6):120-124

为制备检测新城疫病毒的实时荧光RT-PCR病毒样颗粒内标,扩增MS2噬菌体的成熟酶蛋白和衣壳蛋白序列,将其定向插入pET32a载体的相应位置,双酶切和PCR鉴定,构建pET32a-MS2重组质粒;根据新城疫病毒实时荧光RT-PCR检测的目标片段,采用化学合成和klenow酶连接技术制备内标片段,将内标片段插入pET32a-MS2重组质粒,构建pET32a-MS2-IC重组质粒,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,经RNase和DNase消化后,采用荧光RT-PCR检测耐核糖核酸酶病毒样颗粒内标的含量。结果表明,制备了高表达量耐核糖核酸酶病毒样颗粒内标,可用于新城疫病毒实时荧光RT-PCR检测方法的建立。  相似文献   

中国首创新技术“一步法”制取玉米塑料     

王贵荣 《农机推广与安全》2006,(3):28-29

1.何为“玉米塑料”饱含淀粉质的玉米应用现代生物技术可生产出无色透明的液体——乳酸,再经过特殊的聚合反应过程就能生成颗粒状高分子材料——聚乳酸。从玉米中提取的聚乳酸颗粒称为“玉米塑料”,可代替化工塑料粒子,根据不同需要制成建筑墙体板材、包装材料、纺织面料、日用器具、农用地膜、地毯、医用材料、汽车内饰和家庭装饰品等。由这种生物高分子材料制成的物品,废弃后可采用堆肥填埋处理,在自然界微生物的作用下彻底分解为水和二氧化碳,并可当作有机肥施入农田成为植物养料。这一新技术,无疑为农业生产中消灭地膜覆盖造成的白色污…  相似文献   

多用炉一步法活化糠醛渣技术及经济效益     

贾铭勋  马玉雯 《吉林林业科技》1989,(1):39-41

用平泉多用炉一步法活化糠醛渣,整个操作过程需206小时,活化得率为17.1％。用糠醛渣生产活性炭,每吨成本约2080元,利润为920元左右。  相似文献   

禽I型副粘病毒广西分离株F基因序列及毒力的研究   总被引：5，自引：0，他引：5  

韦平  刘禄  韦天超  左天荣  李康然  甘甲忠 《中国预防兽医学报》2003,25(2):104-106

对源于鸡、鹅、鸽的 9株APMV_1广西分离株及我国常用的中发型疫苗毒株I系 (Mukteswar株 )的F基因N_端前段进行了RT_PCR扩增 ,产物进行核苷酸序列测定 ,用基因分析软件DNAStar进行分析并与已发表的其它参考毒株进行比较。结果发现 ,广西分离株在裂解位点的氨基酸组成和排列均符合强毒株的特征 ;根据F基因绘制的系谱树来看 ,广西鸡和鹅分离株都归属于基因型VII,证实近年来广西流行的基因型与国内其他地区的相同 ;并发现中发型疫苗毒株I系 (Mukteswar株 )也属于基因型VII。研究还对分离株进行了常规的毒力和致病性测定试验 ,并与根据F基因序列特征判定的结果相比较 ,结果发现其中一株鸽源和两株鹅源分离株根据常规方法判定的结果与毒株在临床上的致病性不相符 ,而根据F基因序列特征判定的结果与毒株在临床上的致病性相一致  相似文献   

大骨鸡中MSTN基因表达规律性的研究   总被引：2，自引：0，他引：2  

胡兰  郭东新  胡锐  刘梅  王娜  栾新红 《猪业科学》2003,20(11):42-44

本实验以大骨鸡为试材,采用RT-PCR法检测了MSTN基因在大骨鸡不同器官、不同时间的表达情况,结果表明MSTN基因在骨骼肌中表达水平较高,在心肌、肾脏、脑、肠、舌中也有微量表达,但在肺、肝脏中未检测出MSTNmRNA,而且在14日龄时表达水平明显低于35日龄和56日龄,而且在孵化后一周时胸肌中MSTN基因的表达水平达到最低。  相似文献   

VSV的RT-PCR快速检测方法的建立     

杨桂梅  徐自忠 《猪业科学》2003,20(2):23-25

选取水泡性口炎病毒 N基因序列 ,设计 1对引物 ,建立检测水泡性口炎病毒的 RT- PCR方法。对VSV各毒株进行检测 ,结果均为阳性 ,而对反刍动物病毒性疾病相关病毒进行检测 ,结果均为阴性。结果表明所建立的 RT- PCR技术可用于水泡性口炎的诊断和流行病学调查  相似文献   

柑橘裂皮病类病毒的一步RT-PCR法检测及其在甜橙体内的分布   总被引：3，自引：0，他引：3  

彭军  周常勇  唐科志  谭万忠 《果树学报》2005,22(6):744-747

柑橘裂皮病是由柑橘裂皮病类病毒(Citrusexocortisviroid,CEVd)引起的一种重要的柑橘病害。分别采用快速微量核酸提取法和SDS-KAc抽提法在表现症状的Etrog香橼中提取核酸,采用一步RT-PCR法对CEVd进行检测,结果显示SDS-KAc法可以消除带毒样品中非特异性条带。从嫁接接毒的铜水72-1锦橙植株的接穗部取嫩叶、老叶、皮,从砧木部茎杆上取老皮以及根皮分别提取总核酸进行RT-PCR检测,分析CEVd在甜橙体内的分布情况。初步检测结果表明在接穗的嫩叶、老叶、皮,砧木部茎杆的老皮和根皮上都可以检测到CEVd,以接穗部叶和皮检出稳定性高。  相似文献   

番木瓜环斑病毒株系的分子生物学方法鉴定   总被引：6，自引：1，他引：6  

贺国安  肖火根  张曙光  李华平  范怀忠 《植物病理学报》2002,32(1):21-25

 以PRSV株系特异性引物对PRSV的PRSV126(PRSV日本分离物)、Ys、Vb和Sm等株系进行RT-PCR方法鉴定,引物PR21/PR22能把Ys从Vb和Sm中鉴定出来,PR300/PR301则能把Vb从Ys、Sm和PRSV126中鉴定出来;用限制性内切酶Hae Ⅱ、Sau3A I和Hinf I对PRSV的PRSV126、Ys、Vb和Sm等株系进行单酶切RT-PCR-RFLP分析,Hinf I能把PRSV126与Ys、Vb和Sm鉴别开来,Sau3A I能把Ys与Vb和Sm鉴别开来,Hae Ⅱ则能把Ys与PRSV126、Vb和Sm鉴别开来;以P1/P2为引物,对Vb、Ys和Sm株系进行RT-PCR-RFLP-SSCP分析,结果能一次把三者较好地区别开来。  相似文献   

利用RT-PCR检测库尔勒香梨苹果茎痘病毒的研究   总被引：3，自引：0，他引：3  

刘连科  牛建新  王小兵  覃伟铭 《植物病理学报》2003,33(3):286-288

 以库尔勒香梨新鲜、冷藏、冷冻叶片和皮层为材料,对提取双链RNA (dsRNA)的2种方法和提取总RNA的3种方法进行了分析比较,并对总RNA的提取方法进行了改进,获得了纯度较高、完整性较好的dsRNA和总RNA,在此基础上进行了反转录(RT)和PCR扩增。在国内首次完成了对苹果茎痘病毒(ASPV)的RT-PCR检测,建立了ASPV有效RT-PCR反应体系。用此体系扩增到ASPV一个长约316 bp的片段。实验表明以dsRNA和总RNA为模板均能成功进行RT-PCR检测,且dsRNA优于总RNA。  相似文献   

鸡新城疫不同免疫程序鸡群强毒感染的监测     

董伟  孙志良  曹迎春  黎满香 《畜牧兽医杂志》2004,23(2):6-8

本试验应用快速检测NDV强毒的RT-PCR方法对鸡新城疫4种不同免疫程序的鸡群NDV强毒的感染进行监测。每7d采一批样品，共采3批样品，用检测NDV强毒的RT-PRC进行检测。检测结果显示，鸡新城疫弱毒疫苗和油乳剂灭活疫苗同时接种的免疫鸡群感染NDV强毒的感染率最低。  相似文献