鸡Ii结合Rab5a和Rab7b分子的分析     

陈芳芳  桂亚萍  于凤梅  张俊  谈阳  李锦春  刘翠艳  查丽莎 《畜牧兽医学报》2021,52(12):3588-3597

本研究旨在探明鸡恒定链（invariant chain，Ii）与内吞体转运蛋白Rab5a和Rab7b结合的结构域和在细胞内共定位的特征。首先，用PCR和基因突变技术将Ii胞浆区与跨膜区[Ii_{（Cyt-Tra）}]、Ii CLIP （class Ⅱ-associated invariant chain peptide）-三聚体区[Ii_{（CLIP-TRIM）}]和Ii突变体[Ii_{（M81-87aa）}、Ii_{（M91-99aa）}和Ii_{（M81-99aa）}]分别插入pET-32a和pEGFP-C1构建相应的原核和真核重组质粒。其次，将构建的含有绿色荧光蛋白的重组质粒与实验室保存的含有红色荧光Rab5a和Rab7b的重组质粒共转染至人胚胎肾细胞系293 T，观察它们的共定位。将构建的原核重组质粒进行表达和纯化，最后用拉下法和免疫印迹检测Ii与Rab5a和Rab7b的结合域。结果表明，成功构建Ii结构域及Ii突变体的重组质粒。Ii_{（Cyt-Tra）}及Ii突变体均能与Rab5a和Rab7b在细胞内共定位，而Ii_{（CLIP-TRIM）}与空载体却不能。Ii的胞浆区和跨膜区是与Rab5a和Rab7b结合的功能结构域，而不是CLIP与三聚体区。综上所述，鸡Ii与Rab5a和Rab7b共定位和结合的区域是其胞浆区和跨膜区，而不是内质网腔区。这些结果提示Rab分子参与了Ii在胞内细胞器的转运机制，为进一步研究Ii及其载体在细胞内的转运机制和功能提供了新的途径。  相似文献   

导入AGPase基因的转基因可育水稻及其经济性状的研究   总被引：8，自引：0，他引：8  

宋敏  李援亚  张云孙 《华北农学报》2001,16(4):11-14

以农杆菌介导法将淀粉合成关键酶AGPase(腺嘌呤二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶）基因导入云南地方优质水稻合系35，38，39，41，42中，获得了大量的可育转基因植株。PCR扩增检测，外源基因已稳定整合进水稻基因组中。大量的农艺性状及淀粉含量研究表明，转基因水稻种子的千粒重比对照明显提高，但总淀粉含量没有显著变化。  相似文献   

分泌抗鸡Ig单抗杂交瘤细胞系的建立与单抗生物学特性的鉴定   总被引：7，自引：0，他引：7  

梁荣  冯斌 《中国兽医学报》1997,17(2):140-144

从传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞系１Ｄ１０、１Ｇ１中得到了３株能稳定分泌抗鸡免疫球蛋白（Ｉｇ）ＭｃＡｂ的杂交瘤细胞系１Ｂ７、１Ｄ７、３Ｇ６。其抗体类和亚类均属ＩｇＧ２ｂ，腹水的ＥＬＩＳＡ效价≥１∶２５６００，琼扩效价为１∶８～１∶１６。３株ＭｃＡｂ能与鸡血清中的Ｉｇ出现沉淀反应，琼扩在２４ｈ以内出现清晰的沉淀线，而不能和鸭、鸽、鹌鹑等禽类及异种动物血清出现沉淀线。纯化的鸡ＩｇＧ、ＩｇＭ经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ后，分别用纯化并经辣根过氧化物酶（ＨＰＲ）标记的１Ｂ７、１Ｄ７、３Ｇ６单抗酶结合物进行免疫印迹试验证明，３株单抗识别的均为ＩｇＧ、ＩｇＭ分子的轻链  相似文献   

笼养鸡舍鸡粪固态处理系统的研究     

金林生  孟子江 《家畜生态》1994,15(1):14-17

上海出现多种笼养鸡舍液态鸡粪的处理方法，似均存在投资大、运行费用高、操作管理复杂、技术不过关或不配套等缺点。作者设计了“鸡粪固态处理系统”，其思路是在笼养鸡舍内就使粪与饮水严格分流。本文介绍了该系统的工艺流程、设施改造。日常管理等。实践证明该系统具有投资很少、运行费用甚低。操作管理十分简单、不占用土地和效益相当突出的优点，确是一项简易的实用技术。  相似文献   

甲苯侧链催化氯化产物分布的研究     

唐薰  邓凤其 《湖南农业大学学报(自然科学版)》1996,23(6)

研究了催化氯化的产物分布，试验了有关条件对产物分布的影响。结果表明：氯化程度是产物分布的主要影响因素；温度的提高，有利于苄叉二氯和苄川三氯的生成；铁离子、低温及水会导致环上的氯化；水引起水解的发生。  相似文献   

Feline Ubiquitin Fusion Protein Genes     

Kano  R.  Kubota  A.  Nakamura  Y.  Watanabe  S.  Hasegawa  A. 《Veterinary research communications》2001,25(8):615-622

Using cDNA from a CRFK cell line as a template, PCR amplification was performed with the Ub1S and poly(dT) primers to isolate feline ubiquitin genes. Sequencing of the 495 bp PCR fragment revealed that the putative amino acids induced by this fragment gave a fusion protein consisting of a ubiquitin polypeptide (76 amino acids) and an extension protein of ribosomal proteins L40 (52 amino acids). The putative amino acid sequence of ubiquitin was identical to those of humans, rats and pigs.The recombinant glutathione S-transferase (GST)–feline ubiquitin fusion proteins were produced in Escherichia coli and purified. The fusion proteins had a molecular weight of about 42 kDa and were detected by immunoblot assay with rabbit anti-ubiquitin antiserum.The mRNAs from heat-shocked and non-heat-shocked cells were subjected to RT-PCR (Ub1S and poly(dT) primers) analysis. The molecular weights of the ubiquitinated proteins in heat-shocked CFRK cells were between 18 kDa and 24 kDa by immunoblot assay.These results suggested that there were more ubiquinated proteins in the heat-shocked CRFK cells than in the pre-heat-shocked cells.  相似文献   

三分域模型在研究单胃动物内源氨基酸排泄中的应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

陈正玲  明道绪 《动物营养学报》2001,13(2):5-9

本文在分析三分域链状系统模型及单胃动物内源氨基酸排泄特点的基础上 ,讨论了如何将三分域链状模型用于单胃动物内源氨基酸排泄模式的确定。研究分三步进行 :1.测定动物血液体积 ;2.静脉连续灌注同位素标记的氨基酸并使之于体内达到平衡 ;3.检测消化道中同位素标记氨基酸的排泄率。文章指出 ,若能对所有必需氨基酸的内源排泄率均进行测定 ,则可得出内源氨基酸排泄模式 ,因而在实际测定饲料或日粮真可消化氨基酸含量时 ,只需测定某种氨基酸的内源排泄量即可知其它氨基酸的内源排泄状况  相似文献   

RT-PCR及RFLP分析技术对鸡传染性支气管炎病毒的诊断和S1基因分型的研究   总被引：4，自引：0，他引：4  

磨美兰  李康然  韦平 《中国预防兽医学报》2001,23(4)

本研究使用分别扩增整个S1糖蛋白基因 (引物A)和S1糖蛋白基因N_端高变区Ⅰ (引物B)的 2对引物对 3个IBV标准株M41、Connecticut、Arkansas及 5个地方分离株 (C60 ,D41A ,D41B ,A112 1,A1171)进行RT_PCR扩增。用引物A时 ,有 5个IBV毒株扩增到目的片段 (172 0bp) ;用引物B时 ,所有 8个IBV毒株均得到与预计大小相符的目的产物 (2 2 8bp)。对 172 0bp的PCR产物用限制性内切酶HaeⅢ进行酶切 ,结果得出 3个不同的RFLP图谱 ,其中M41、Connecticut、D41B具有相同的HaeⅢ酶切图谱。Arkansas和D41A则分别具有互不相同的图谱 ;对 2 2 8bp的PCR产物进行DdeⅠ、RsaⅠ限制性内切酶消化 ,根据它们的RFLP图谱 ,8个IBV毒株可分为 5个基因型。综合 2对引物的PCR产物的RFLP分析结果 ,8个IBV毒株可分为 7个基因型 ,分型的结果与传统的血清学方法吻合。本研究建立的方法和技术具有快速、简单、特异、灵敏等优点 ,为现场流行毒株的定型(基因型 /血清型 )及其S1基因变异的跟踪研究以及更有效防制传染性支气管炎奠定了基础。  相似文献   

鸡实验性急性有机磷中毒血清酶活性变化分析   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘艳卉  杨君宁  傅童生 《畜牧兽医杂志》2005,24(4):1-2

选取临床健康体质量为0.8±0.07kg的三黄肉鸡24只,随机分成3个试验组和1个对照组,每组6只,其中试验、和组分别皮下一次注射氧乐果攻毒,剂量分别为35mg/kg体质量、70mg/kg体质量和140mg/kg体质量;对照组注射生理盐水。攻毒后系统观察动物急性有机磷中毒症状,采血测定体内胆碱酯酶(CHE)、碱性磷酸酶(ALP)、乳酸脱氢酶(LDH)、谷丙转氨酶(ALT)以及谷草转氨酶(AST)的活力。试验结果表明:鸡急性有机磷中毒主要表现为精神沉郁,共济失调,口角大量流涎,呼吸困难,严重腹泻和粪便带血等临床症状。攻毒组CHE3活性显著低于对照组,ALP的活性也有所降低,LDH活性升高,但ALT和AST的活性无显著变化。  相似文献   

鸡IL-15基因的克隆与序列分析   总被引：6，自引：0，他引：6  

独军政  刘胜旺  孔宪刚  陈怀涛  夏春 《中国预防兽医学报》2003,25(2):107-111

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