植物基因启动子的克隆方法及其应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

尹辉　李丹张毅  李秋莉 《分子植物育种》2006,4(Z1):85-91

植物基因的表达调控已成为分子生物学研究热点,启动子是基因表达调控的重要顺式元件,启动子的克隆对于研究基因表达调控、构建基因工程载体、表达目的蛋白有着重要的意义。启动子克隆的方法很多,从常用的启动子陷阱技术筛选启动子到PCR方法的应用,此后相继问世的一些基于PCR的克隆启动子技术,如载体锚定PCR、反向PCR、接头PCR、交错热不对称PCR等,为克隆启动子提供了更可靠,更合理的方法。本文着重介绍了几种植物基因启动子的克隆方法,分析了它们的优缺点,并展望了今后的研究前景。  相似文献   

橡胶树胶乳HbPLDα1基因及其启动子的克隆与生物信息学分析     

夏可灿  康桂娟  黎瑜  聂智毅  代龙军  段翠芳  曾日中 《热带作物学报》2012,33(1):63-69

植物磷脂酶PLDα1与伤害信号转导密切相关,是伤害诱导内源茉莉酸（Jasmonic acid, JA）生物合成的关键酶之一。橡胶树胶乳PLDα1基因（HbPLDα1）表达的研究将有助于揭示橡胶树乳管细胞JA信号转导及其调控橡胶生物合成的机制。在EST序列的基础上,通过RACE和Genome Walking方法分别克隆了橡胶树胶乳的HbPLDα1基因及其启动子序列。HbPLDα1基因的cDNA全长为2 870 bp,包含长度为2 427 bp的完整开放阅读框（ORF）,具有典型的植物PLDα蛋白保守功能域,与同属大戟科的蓖麻和麻风树的PLDα1基因亲缘关系最近。HbPLDα1基因启动子区域长为1 559 bp,除含有TATA box和CAAT box等基本顺式作用元件外,还存在JA和脱落酸等激素响应元件以及干旱胁迫等环境信号响应元件,这表明HbPLDα1基因的表达可能受激素和环境信号的调控,在橡胶树乳管细胞对激素和环境信号的响应过程中发挥重要作用。  相似文献   

马银花愈伤组织RoWUS基因及其启动子的克隆与表达分析     

匡华琴  刘生财  陈裕坤  赖钟雄 《热带作物学报》2014,35(10):1984-1991

WUSCHEL(WUS)基因是植物干细胞的标志基因。采用同源克隆法结合RACE技术从马银花愈伤组织中克隆得到Ro WUS c DNA全长序列,采用染色体步移法克隆得到该基因的启动子序列,登录号分别为KF365488、KF861578。马银花Ro WUS c DNA全长1 123 bp,编码302个氨基酸;DNA序列2 001 bp,包含2个内含子和3个外显子;启动子序列3 122 bp。生物信息学分析表明:Ro WUS亚细胞定位于细胞核,是不稳定的亲水蛋白,无信号肽,具有跨膜结构,包含homeodomain功能位点。系统进化树分析结果表明:Ro WUS单独形成一个分支,与葡萄、大豆和苜蓿的亲缘关系最近。对Ro WUS的启动子进行分析表明,该启动子除了含有丰富的TATA-box和CAAT-box等基本元件以外,还含有多个光响应元件、逆境胁迫响应元件、激素应答元件和其他功能元件。q PCR结果表明:Ro WUS基因在马银花愈伤组织不同生长时期中呈先上升后下降的趋势,在第5个继代周期时表达量最高。外源赤霉素和脱落酸浓度为15 mg/L时表达量最高,说明Ro WUS基因在该浓度时对赤霉素和脱落酸的响应最强。  相似文献   

玉米转录因子NF-YB基因家族的生物信息学分析     

徐志军  刘洋  徐磊  安东升 《分子植物育种》2019,17(12):3807-3816

为揭示玉米NF-YB基因家族的功能,本研究利用生物信息学手段,鉴定了玉米NF-YB基因家族,并系统的分析了该基因家族各蛋白的理化性质、基因的染色体定位、保守结构域、基因结构、系统进化、磷酸化位点、启动子和基因组织表达。结果表明:玉米基因组中含有21个NF-YB基因,所编码的蛋白质均位于细胞核,且不含有跨膜结构。这些基因不均匀地分布于玉米的9条染色体上,均含有高度保守的结构域CBFD_NFYB_HMF,系统进化分析将其分为3类。磷酸化位点分析表明,玉米NF-YB家族存在着大量的磷酸化位点。启动子分析表明,基因家族启动子区域均含有大量的逆境胁迫应答顺式作用元件。组织表达分析发现,至少有18个基因可以进行表达,其中有5个基因表现出组织特异性,不同基因在不同组织、不同时期的表达具有时序性。玉米NF-YB基因家族核心结构域的保守性、基因功能的分化、启动子序列中的大量逆境相关元件、基因表达的差异性,可能都是玉米更好调控自身生长发育和适应逆境的结果。研究结果为进一步解析玉米NF-YB基因家族的功能提供参考。  相似文献   

草莓FaMYB10蛋白互作验证及启动子克隆     

李小龙  胡港  杨静  刘勇强  马小舒  汤浩茹 《分子植物育种》2019,17(12):3902-3909

本研究旨在探究光信号如何调控草莓花青素苷合成的分子机制,利用同源克隆法从3个不同颜色的草莓品种(‘红颜’,‘桃熏’,‘白雪公主’)中分离得到FaMYB10基因及其启动子序列,采用酵母双杂交系统验证FaMYB10的转录激活能力及其与FaCOP1的蛋白互作关系,利用红颜草莓FaMYB10基因的启动子序列构建酵母单杂交诱饵载体pHIS2-ProFaMYB10,并验证其在酵母Y187中的自激活现象。结果表明,经测序显示3个不同颜色的草莓品种FaMYB10基因的CDS区域序列完全一致为702 bp,但是在启动子区域存在不同差异。酵母双杂交实验表明Fa MYB10在Y2HGold中存在转录激活能力,FaMYB10同FaCOP1存在蛋白质与蛋白质互作关系。在Y187宿主内,发现当3-AT浓度达到60 mmol/L无法抑制FaMYB10基因启动子带来的自激活现象。本研究结果为理解草莓通过光信号传导调控下游FaMYB10,进而影响花青素苷合成的分子机制提供一定理论参考。  相似文献   

利用交错式热不对称PCR法获取多脊椎蒙古羊Hoxc8启动子序列的研究(英文)     

陈琦  赵静  张立岭  马月辉 《农业科学与技术》2012,(1):103-107

[目的]探索获得蒙古羊Hoxc8基因启动子序列的方法。[方法]尝试利用交错式热不对称PCR法,获得蒙古羊Hoxc8启动子序列。[结果]通过PCR获得的序列不理想,测序结果无法与已知序列相匹配。虽然利用交错式热不对称PCR法未获得蒙古羊的Hoxc8的启动子序列,但可为今后的相关研究提供借鉴。[结论]该研究为进一步分析蒙古羊Hoxc8的启动子区域的甲基化状态奠定了基础。  相似文献   

工能基因组学:T-DNA介导的基因诱捕和植物基因鉴定(英文)   总被引：2，自引：0，他引：2  

唐巍 《林业研究》2001,12(1):1-8

拟南芥菜、水稻、蕃茄、土豆、玉米、小麦和大豆的全基因组测序为植物细胞和发育生 物学研究提供了许多有用的信息。基因组学的中心任务是利用这些信息去探索蛋白质的功能 和鉴定与发育有关的重要基因。尽管依赖于毁坏基因和产生可识别的突变表型的经典遗传学 方法仍然是极为成功的基因鉴定方法，借助于报告基因结构，随机插入植物基因组的T-DNA 介导的基因诱捕正发展成为植物细胞和发育生物学研究的极强有力的技术。本文描述了基因 诱捕、启动子诱捕和增强子诱捕在植物生物学中的应用，并且希望这些基因鉴定方法有助于 植物分子生物学家和生物技术工作者的研究。  相似文献   

水稻OsGL1-2基因反义表达载体的构建     

黄丹莹  叶能辉  庄楚雄 《安徽农业科学》2014,42(36):12818-12820

应用聚合酶链式反应技术（PCR）扩增水稻OsGL1-2基因反义片段及基因自身的启动子,并分别克隆到pUC19克隆载体上,得到含有OsGL1-2启动子＋OsGL1-2反义片段的中间载体.对重组子进行PCR检测和酶切分析并测序,结果表明,长度分别为417和2 199bp.将OsGL1-2启动子＋OsGL1-2反义片段克隆到植物表达载体pCambia1380多克隆位点,构建了该基因的植物反义表达栽体pCamGL1-2.  相似文献   

木薯细胞壁酸性转化酶MeCWINCV5基因启动子的克隆和序列分析     

夏文睿  刘姣  胡艳平等 《安徽农业科学》2014,(11):3179-3181,3215

[目的]了解MeCWINCV5在植物生长发育、激素调节和逆境胁迫应答中的功能.[方法]采用PCR方法从木薯基因组中分离MeCWINCV5基因启动子序列,考察MeCWINCV5对植物生长发育、激素调节和逆境胁迫应答的影响.[结果]分析显示启动子的长度为1170bp,合有TATA box和CAAT box等多个典型的真核生物启动子基本元件元件,还存在大量逆境胁迫诱导相关的顺式调控元件,如HSE、MBS、SARE、GARE-motif和TATC-box等多个与植物逆境胁迫相关的元件.[结论]MeCWINCV5基因启动子与逆境胁迫有关,在木薯抵御逆境胁迫的生理过程中具有重要作用.  相似文献   

Repression of SFRP5 promoter activity by hepatitis B virus X protein     

CHEN Lin-lin  XIE Qing  SHAN Xiao-liang  QUAN Hui-qin  CHEN Qing-mei  ZHOU Fan  NIE Dan  TANG Ni 《园艺学报》2013,29(2):200-204

AIM: To investigate the molecular mechanism that hepatitis B virus X protein (HBx) inhibits the promoter activity of secreted frizzled-related protein 5 (SFRP5). METHODS: Serial truncated fragments of SFRP5 promoter were amplified and cloned into luciferase reporter vector pGL3-Basic. LO2 cells were transfected with recombinants, and then infected with the adenoviral vector expressing HBx protein (Ad-HBx) or the analogous adenovirus expressing green fluorescent protein (Ad-GFP) for control. The infection efficiency was examined under a fluorescence microscope and the activity of SFRP5 promoter was measured by luciferase assay. RESULTS: Truncated fragments of SFRP5 promoter were successfully constructed. Compared with the pGL3-Basic control, the luciferase activity was 6.32±0.04 of the -478 bp~+47 bp fragment, 5.79±0.32 of the -811 bp~+47 bp fragment, 3.59±0.34 of the -1 235 bp~+47 bp fragment, 3.86±0.39 of the -1 677 bp~+47 bp fragment and 3.26±0.42 of the -2 072 bp~+47 bp fragment, respectively. Overexpression of HBx inhibited the activity of SFRP5 promoter. The average inhibitory rates were 44% for -478 bp~+47b, 46% for -811 bp~+47 bp, 28% for -1 235 bp~+47 bp, 24% for -1 677 bp~+47 bp and 40% for -2 072 bp~+47 bp, respectively. CONCLUSION: HBx suppresses the activity of SFRP5 promoter, leading to down-regulation of SFRP5 expression.  相似文献