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以金色链霉菌J13基因组DNA为模板,扩增金霉素C6甲基化酶基因ctcF上下游序列作为两端同源交换臂,在两臂之间添加抗性筛选标记neo基因,并在该基因上游加入组成型强启动子ermE*,以强化筛选标记.将该外源DNA序列插入到质粒pSET152,构建重组质粒pFD106.转化大肠杆菌ET12567后,经接合转移导入金色链... 相似文献
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用最小抑制浓度法对嗜线虫致病杆菌北京变种野生型菌株的抗生素抗性进行了测定。结果表明,该菌株对氯霉素、新霉素和卡那霉素敏感,而对链霉素、氨苄青霉素和青霉素具有不同程度的抗性。利用滤膜三亲交配的接合转移方法,以嗜线虫致病杆菌北京变种作为受体细菌,在卡那霉素、四环素和氨苄青霉素的选择压力下,筛选得到接合转移子。经过菌落PCR鉴定,证明质粒pLA2917已经成功转移到嗜线虫致病杆菌北京变种细胞内。对昆虫病原线虫共生细菌的质粒转移方法进行了讨论。 相似文献
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对标准的链霉菌接合转移方法进行优化建立起适用于吸水链霉菌NRRL5491的接合转移系统。40℃温浴20 min为孢子的最佳热激处理条件;整合型质粒pSET152的接合转移效率是穿梭型质粒pOJ446的3~6倍;当阿泊拉霉素覆盖浓度为1μg/mL时,pSET152的接合转移效率是50μg/mL时的4.6倍,而pOJ446接合转移效率相应提高了2.4倍;MS培养基上接合转移效率是SY琼脂培养基上的3.4倍。采用最适优化条件时,接合转移频率可达到2×10-6,足够用于基因置换等遗传操作。 相似文献
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用羊抗兔抗体进行抗体连接到细菌磁小体(BMPs)实验，以探讨结合条件对抗体连接效率(以每毫克BMPs上连接抗体的微克数表示，单位为μg/mg)的影响。实验表明，冷冻干燥后的BMPs的抗体连接效率降低36%~55%；在液氮中(-196 ℃)预处理的抗体连接效率显著高于在-70 ℃和-20 ℃预处理的。室温(15 ℃)下反应18 h的抗体连接效率最高，为64.06 μg/mg，明显高于其它温度和连接时间的。反应体系中，BMPs用量由5 mg降到0.1 mg，抗体用量由10 μg增加到300 μg时，抗体连接效率逐渐上升，当BMPs用量为0.1 mg，抗体用量为300 μg时，抗体连接效率达762.37 μg/mg。PBS、HEPES、Tris-HCl、MOPS、VBS以及磷酸盐等溶液可用于抗体连接到BMPs体系中，在通常使用的缓冲液pH和浓度下，几种溶液的抗体连接效率变化范围为46.28±0.58 ~ 90.83±1.64 μg/mg；并且不同的溶液有相应的使抗体连接效率达到最高时的pH和溶液浓度，当HEPES的pH为3.5，浓度为20 mmol / L；Na3PO4的pH为5.6，浓度为5 mmol / L时，抗体连接效率分别为108.01和76.78 μg/mg。对连接到BMPs上的抗体进行SDS-PAGE定性检测结果表明，抗体连接到了BMPs的膜上。 相似文献
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加纳链霉菌(Streptomyces ghanaensis)是动物饲料添加剂黄霉素的主要生产菌。建立高效稳定的遗传操作系统是对该菌进行分子生物学研究和构建高产黄霉素基因工程菌的基础。以含有基因整合型重组质粒pIJ8630-nsdA的Escherichia coli ET12567/pUZ8002为供体、加纳链霉菌ATCC 14672为受体进行接合转移,通过单因素试验与正交试验对接合转移过程中的关键影响因素进行优化。结果表明,WL50培养基为接合转移最适培养基,当受体加纳链霉菌ATCC 14672孢子在50 ℃条件下热激10 min、37 ℃预培养3 h后,与供体按细胞数比例1∶15混合后涂布于接合转移平板上,30 ℃培养14 h后覆盖50 μg·mL-1安普霉素和500 μg·mL-1萘啶酸时,接合频率最高,比优化前提高20.3倍。 相似文献
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盐酸四环素人工抗原的合成及鉴定 总被引：2，自引：1，他引：1
本试验旨在合成盐酸四环素人工抗原,为其单克隆抗体的制备奠定试验基础。将盐酸四环素(TCH)发生霍夫曼降解和重氮化反应生成重氮盐,再与蛋白质载体(BSA,OVA)偶联生成免疫原和包被原,对偶联产物采用三氯化铁及紫外扫描法鉴定偶联成功,且免疫原和包被原的摩尔结合比分别约为3.4∶1和4.2∶1。用免疫原免疫BALB/c小鼠,用间接ELISA检测抗体效价,采用竞争ELISA法测IC50,获得了效价为1∶51200I、C50为16.91 ng/mL的多克隆抗体,最终证明人工抗原制备成功。 相似文献
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在单峰函数的基础上又引进了满的及溢出的单峰函数的概念,并且对这些单峰函数研究２种意义下的浑沌情况。 相似文献
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利用三亲本杂交方法,将luxAB发光酶基因标记至荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)CP1108上,研究标记菌株CP1108L的个体生态学特征及其在棉花根圈的定殖动态.结果表明,标记菌株连续传代20次均未发生质粒丢失现象,标记质粒在受体菌株中较为稳定,CP1108L菌株的生长及部分生理生化特性... 相似文献
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灰红链霉菌AL7对多种植物病原真菌和细菌都具有明显的抑菌活性。本研究在通用的大肠杆菌克隆宿主基础上,构建获得Dcm甲基化缺陷菌株,再引入接合转移辅助质粒pUZ8002得到菌株LP3。以LP3为宿主构建灰红链霉菌AL7的基因组粘粒文库,平均插入片段大小40kb。用高通量接合转移的方法将文库转到变铅青链霉菌TK24中,得到了异源表达文库,并从表达文库中初筛获得一些表型特异的克隆,如光秃表型、产素提前表型、产孢提前表型等。 相似文献