香菇SSR-PCR技术体系的建立及其在遗传多样性分析中的初步应用     

肖扬 《勤云标准版测试》2009,29(2)

摘 要: 利用ISSR-抑制PCR法结合Primer 3软件开发香菇特异性的SSR引物,并采用L16（45）正交试验设计,对影响香菇SSR-PCR的主要因素进行了优化筛选，建立了最佳的SSR-PCR反应体系。在20μl反应体系中，包含1.5mmol/L Mg2+，75ng模板DNA，0.25mmol/L dNTPs，0.50μmol/L引物及1.5U Taq酶。梯度PCR试验筛选得到相应引物的最佳退火温度为62℃。以该体系为基础，应用5对引物扩增8个香菇菌株的基因组DNA，均能获得理想结果，聚类分析结果能较好地反映供试菌株的地理来源关系。以0.5 的相似性为分割点，8个菌株可分成2大类群。类群Ⅰ主要由北方菌株组成，类群Ⅱ由南方菌株组成。  相似文献   

猪源性成分的PCR检测技术优化研究   总被引：1，自引：0，他引：1  

刘昊 《中国农学通报》2009,25(18):1-6

本试验研究目的是对食品和饲料中的猪源性成分PCR检测技术的反应体系进行优化。试验采用20μL的 PCR反应体系,分别测定Taq DNA聚合酶为0U、1U、2U、3U时;25mMol?L-1的MgCl2 为0μL、2μL、4μL、6μL时;dNTP为0μL、0.1μL、0.2μL、0.4μL时,其它PCR反应因素为最大量的结果,以优化猪源性成分PCR反应体系。试验结果：1、优化的猪源性成分PCR反应体系中Taq DNA聚合酶、25mMol?L-1 MgCl2、dNTP适宜浓度分别为2U,2μL,0.4μL。2、优化的猪源性成分PCR反应体系其检测最低猪肉DNA浓度为0.04 ng?μL-1。结论：本研究优化出的猪源性成分PCR反应体系经二重PCR反应技术进行验证,不仅快速,简便,准确性与灵敏度高,并且经济、高效。  相似文献   

芝麻SRAP反应体系的建立与优化   总被引：5，自引：0，他引：5  

车卓  张艳欣  孙建  黄波  张秀荣 《中国农学通报》2008,24(10):74-77

以芝麻幼叶提取的DNA为试验材料,通过对影响SRAP扩增结果的重要反应因素dNTPs、Mg2 + 、Taq酶、随机引物及模板DNA进行优化,建立了芝麻扩增多态性高、稳定性强、带型清晰的SRAP最佳反应体系：dNTPs（10mmol／L）0.30μl,Mg2 +（25mmol／L）1.20μl,Taq酶1.00U,正反引物各50ng,DNA模板80ng,10×Buffer 1.5μl,总体积15μl,为SRAP标记技术在芝麻分子生物学研究方面的应用奠定了基础。  相似文献   

芝麻SRAP反应体系的建立与优化     

车卓  张艳欣  孙建  黄波  张秀荣 《勤云标准版测试》2008,(10)

通过对芝麻SRAP反应体系主要影响因素进行优化,建立最佳反应体系.以芝麻幼叶提取的DNA为实验材料,对影响SRAP扩增结果的重要反应因素dNTPs、Mg2 、Taq酶、随机引物及模板DNA设置不同梯度实验.得到了芝麻扩增多态性高、稳定性强、带型清晰的SRAP最佳反应体系为:dNTPs(10mmol/L)0.30μl,Mg2 (25mmol/L)1.20μl,Taq酶1.00U,正反引物各50ng,DNA模板80ng,10×Buffer1.5μl,总体积15μl,为SRAP标记技术在芝麻分子生物学研究方面的应用奠定了基础.  相似文献   

北沙参SRAP分子标记体系的建立与优化     

齐树杰  沈镝  李颖  张钦德  李庆典 《勤云标准版测试》2009,29(24)

为北沙参的遗传多样性分析提供一种科学的途径。采用SRAP标记技术,以北沙参基因组DNA为模板,优化了SRAP反应体系的各主要参数。建立了稳定可靠的SRAP-PCR反应体系;20μL反应体系中,DNA的量为80ng、Mg2+ 2.5mmol/L、dNTPs 0.25mmol/L、TaqDNA聚合酶为1U、正反向Primer浓度均为0.1μmol/L。该体系适合北沙参遗传多样性分析、遗传图谱构建等研究。  相似文献   

响应面法优化苏云金杆菌固态发酵培养基   总被引：8，自引：0，他引：8  

杨超英  陶玉贵  徐先炉  叶连斌  汪耀明 《中国农学通报》2008,24(7):69-73

采用Plackett-Burman试验设计法和响应面分析法对基于压力脉动周期刺激的苏云金杆菌固态发酵培养基进行优化。利用SAS软件对以啤酒糟为主要基质的培养基中影响苏云金杆菌毒力效价的主要因子进行了评价,响应面法优化结果表明最适培养基的组分（m/m）为：啤酒糟：玉米粉：豆粕粉：KH2PO4=100:2.19:15.41:0.22。在优化培养基中,生物农药的毒力效价可达到8563IU/mg,验证值与预测值基本相符。  相似文献   

银耳微波真空干燥工艺优化的研究     

黄艳  郑宝东 《勤云标准版测试》2009,29(20)

[研究目的]获取银耳微波真空干燥的最优工艺.[方法]采用二因子二次回归通用旋转组合设计,分析微波强度及真空度2个变量对干燥时间、复水比、银耳多糖含量以及单位能耗的影响,根据实验数据建立描述4个指标的二次回归模型,对变量进行响应面分析,并采用评价函数法优化干燥工艺.[结果]微波强度和真空度对干燥时间、复水比、银耳多糖含量以及单位能耗均有显著影响.银耳微波真空干燥工艺的最佳参数为:10 W/g,-90 kPa.[结论]该工艺参数可为生产出高品质银耳干品提供理论依据.  相似文献   

北沙参SRAP分子标记体系的建立与优化     

齐树杰  沈镝  李颖  张钦德  李庆典 《中国农学通报》2009,25(24):73-77

为北沙参的遗传多样性分析提供一种科学的途径。采用SRAP标记技术,以北沙参基因组DNA为模板,优化了SRAP反应体系的各主要参数。建立了稳定可靠的SRAP-PCR反应体系;20μL反应体系中,DNA的量为80ng、Mg2+ 2.5mmol/L、dNTPs 0.25mmol/L、TaqDNA聚合酶为1U、正反向Primer浓度均为0.1μmol/L。该体系适合北沙参遗传多样性分析、遗传图谱构建等研究。  相似文献   

花生SSR-PCR体系的优化     

张发  万勇善  刘风珍 《勤云标准版测试》2008,(4)

以花生品种丰花3号为材料,研究了花生SSR技术中PCR反应体系的主要成分对SSR扩增效果的影响及不同引物的退火温度。结果表明dNTP对扩增影响较大,每对引物都有其扩增适合的退火温度。确立了适合花生SSR分子标记研究的优化体系。最终确定总反应体系为20μl,其中25mMMgCl21.5μl,2.5mMdNTP1.6μl,5U/μlTaq酶0.17μl,100ng/μl模板DNA0.4μl,2.5mM引物5μl。优化后的扩增程序退火温度为54℃。  相似文献   

辣椒cDNA-AFLP体系的优化与应用   总被引：1，自引：0，他引：1  

吴智明  曾晶  胡开林  乔爱民 《中国农学通报》2010,26(12):26-29

以辣椒花蕾和嫩叶为试验材料,对影响辣椒cDNA-AFLP体系的关键因素进行了探讨,建立了适宜于辣椒基因差异表达的cDNA-AFLP体系。结果表明,Trizol法适用于辣椒花蕾和嫩叶总RNA提取;SMART法合成双链cDNA效率较高;利用Taq I/Ase I分步酶切cDNA各3h可酶切完全;连接产物最佳稀释倍数为15倍;预扩产物稀释15倍经选择性扩增,PAGE电泳可以获得带型丰富且重复性好的结果。辣椒cDNA-AFLP反应体系的建立为辣椒基因的差异表达分析奠定了基础。  相似文献